PBL在循环生理学实验教学中的应用及效果评价

为探讨PBL(Problem-based learning)教学法在生理学实验教学中的应用模式及效果,在循环生理学实验教学中采用PBL,采用成绩对比分析和教育环境评估量表(Dundeeready education environment measure,DREEM)对教学质量及教学环境进行评价。结果表明PBL教学组成绩及DREEM量表总分均明显高于传统教学组(P<0.01)。结果提示,将PBL运用到生理学实验教学中,可有效改善教学环境,提高教学质量。

左归饮对围绝经期大鼠卵巢Bcl-2及Bax表达的影响

目的观察中药左归饮对围绝经期大鼠卵巢细胞凋亡指数及Bcl-2、Bax表达的影响。方法采用围绝经期大鼠动物模型,分别给予低、中、高剂量左归饮灌胃处理8 w。用TUNEL染色观察卵巢细胞凋亡指数(AI);用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢Bcl-2、Bax mRNA及蛋白的表达。结果围绝经期大鼠卵巢细胞AI明显高于青年组(P<0.01),各剂量左归饮可使其显著降低(P<0.01或P<0.05)。与青年组相比,围绝经期大鼠卵巢Bcl-2的表达明显降低,Bax表达显著升高(P<0.01);低、中剂量左归饮可有效改善这种表达异常。结论左归饮可通过抑制围绝经期大鼠卵巢细胞过度凋亡,改善卵巢功能。不同剂量的作用机制不同,低、中剂量左归饮可通过上调Bcl-2、下调Bax的表达起作用。

左归饮对围绝经期大鼠卵巢促卵泡激素受体表达的影响及机制

目的探讨左归饮对围绝经期大鼠卵巢促卵泡激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)表达的影响及机制。方法采用围绝经期大鼠动物模型,分别给予低、中、高剂量左归饮灌胃处理8周,用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢FSHR mRNA及蛋白的表达。未成年大鼠注射孕马血清后收集培养卵巢颗粒细胞,用RT-PCR方法检测给予不同处理因素后FSHR mRNA的表达水平。结果(1)围绝经期大鼠卵巢FSHR的表达明显低于青年组(P<0.01),给予不同剂量左归饮处理后,FSHR表达均显著升高(P<0.01)。(2)培养颗粒细胞给予不同处理因素,结果显示,与对照组相比,左归饮提取物可促进FSHR mRNA表达(P<0.01);与单纯加入左归饮提取物相比,同时加入左归饮提取物和福司考林(Forskolin)可进一步促进FSHR mRNA的表达(P<0.01),同时加入左归饮提取物和酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein则能明显削弱左归饮的促进作用。结论左归饮可通过上调围绝经期大鼠卵巢FSHR的表达,提高卵巢对卵泡刺激素的反应性,改善围绝经期卵巢功能。左归饮对FSHR mRNA表达的促进作用可能是通过激活腺苷酸环化酶-蛋白激酶A(cAMP-PKA)及酪氨酸蛋白激酶途径实现的。

左归饮对围绝经期大鼠卵巢NO生成的影响及机制

目的观察左归饮对围绝经期大鼠卵巢一氧化氮(nitric oxide,NO)生成的影响及机制。方法对围绝经期大鼠动物模型,分别给予低、中、高剂量左归饮及尼尔雌醇灌胃8周,模型组及青年对照组(对照组)予生理盐水灌胃。用硝酸酶还原法、化学比色法分别检测卵巢NO含量、总一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性;用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢诱导型NOS(inducible NOS,iNOS)、内皮型NOS(en-dothelial NOS,eNOS)及神经型NOS(neuronal NOS,nNOS)mRNA及蛋白的表达。结果 (1)模型组大鼠卵巢NO含量、总NOS活性显著低于对照组(P<0.01),中、高剂量左归饮可使其明显增高(P<0.01,P<0.05);(2)模型组大鼠卵巢中eNOS、iNOS、nNOS表达均明显低于对照组(P<0.01),中剂量左归饮可显著促进初老大鼠卵巢此3种NOS表达(P<0.01),高剂量可使iNOS、eNOS表达增高(P<0.01),而低剂量仅使iNOS表达增强(P<0.01)。结论卵巢局部eNOS、iNOS、nNOS表达的下调,导致的NOS活性降低、NO生成减少,均与围绝经期大鼠卵巢微循环血管功能受损密切相关;左归饮可通过上调eNOS、iNOS、nNOS表达,增加围绝经期大鼠卵巢NOS活性、NO生成,对衰老卵巢微循环发挥保护作用。

PACAP mRNA在大鼠妊娠黄体及离体细胞的表达与调节

目的:观察垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)mRNA在大鼠妊娠黄体中的表达及调节。方法:①于妊娠不同时期收集大鼠卵巢。用RT-PCR和原位杂交方法,观察妊娠过程卵巢PACAP mRNA表达的动态变化;②未成年雌性大鼠颈部皮下注射50IU孕马血清促性腺激素,48h后注射25IU人绒毛膜促性腺激素,第6天收集培养黄体细胞。用放免法测定给予不同处理后,培养液中孕酮的含量;用RT-PCR方法检测各组PACAP mRNA表达水平。结果:从妊娠11d起,PACAP mRNA表达逐渐增强,在妊娠19d达高峰;与对照组相比,血小板活化因子(PAF)、福司考林(forskolin)、佛波酯(PMA)均使培养黄体细胞孕酮分泌量及PACAP mRNA表达显著增高(P<0.05)。结论:PACAP与中、晚期妊娠的维持密切相关;PAF可促进培养黄体细胞PACAP mRNA的表达,蛋白激酶C(PKC)和蛋白激酶A(PKA)途径都有可能参与了此过程。

左归饮对围绝经期大鼠卵巢P450芳香化酶表达的影响及调节

目的研究左归饮对围绝经期大鼠卵巢P450芳香化酶(P450 arom)及CYP19 mRNA表达的影响及机制。方法采用围绝经期大鼠动物模型,分别给予低、中、高剂量左归饮灌胃处理8周。用放射免疫法(RIA)检测血清中雌二醇(E_2)含量;用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢CYP19mRNA及P450 arom的表达。未成年大鼠注射孕马血清后收集培养颗粒细胞,用RT-PCR方法检测给予不同处理后CYP19 mRNA的表达水平。结果围绝经期大鼠血清E_2水平及卵巢P450 arom及其基因CYP19的表达明显低于青年组(P<0.01),给予中、高剂量左归饮处理后,血清E_2水平及P450 arom、CYP19表达显著升高(P<0.01)。培养颗粒细胞给予不同处理因素,结果显示,与对照组相比,染料木黄酮(Genistein)、福司考林(Forskolin)、左归饮提取物可促进CYP19 mRNA表达(P<0.05);与单纯加入左归饮提取物相比,同时加入左归饮提取物和佛波酯或Genistein可进一步促进CYP19 mRNA的表达(P<0.05)。结论中、高剂量左归饮可通过上调卵巢CYP19及其产物P450 arom的表达,使围绝经期大鼠血清E_2含量升高。左归饮对CYP19 mRNA表达的促进作用可能是通过激活PKC途径或加强Genistein的作用实现的。

左归饮对围绝经期大鼠卵巢VEGF及SPARC表达的影响

目的:观察滋阴理气中药左归饮对围绝经期大鼠卵巢血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)表达的影响。方法:采用围绝经期大鼠动物模型,分别给予低、中、高剂量左归饮(13.78,20.67,31.00 g.kg-1)灌胃处理8周。用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢VEGF mRNA及蛋白的表达,用RT-PCR方法检测卵巢SPARC mRNA的表达水平。结果:围绝经期大鼠卵巢VEGF mRNA的表达明显高于青年组(P<0.01),中、高剂量左归饮可有效降低其表达水平(P<0.01)。围绝经期大鼠卵巢SPARC mRNA的表达明显低于青年组(P<0.01),中、高剂量左归饮可使其表达显著升高(P<0.01)。结论:VEGF和SPARC表达异常可能在卵巢衰老过程中起一定作用。滋阴理气中药左归饮能通过下调VEGF的表达、上调SPARC的表达,从而促进衰老大鼠卵巢的血管生成,延缓卵巢衰老过程。

左归饮煎剂对围绝经期大鼠卵巢Caspase-3和Fas表达的影响

目的:研究左归饮煎剂对围绝经期大鼠卵巢细胞凋亡指数(AI)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Cysteinyl aspartate-specific protease,Caspase)-3和凋亡相关因子(Fas)表达的影响。方法:采用围绝经期大鼠模型,分别灌胃高、中、低剂量(31.00、20.67、13.78g/kg)左归饮煎剂,每周1次,连续8周。用TdT介导原位缺口末端标记法观察卵巢细胞AI;用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢Caspase-3、FasmRNA及蛋白的表达情况。结果:高、中、低剂量左归饮煎剂可显著降低围绝经期大鼠卵巢细胞AI(P<0.01或P<0.05),显著降低围绝经期大鼠卵巢Caspase-3与Fas的表达(P<0.01)。结论:左归饮煎剂可通过抑制围绝经期大鼠卵巢细胞过度凋亡来改善卵巢功能,这种抑制作用可通过下调围绝经期卵巢Fas和Caspase-3的表达实现。