刺五加黑木耳酸性多糖化学组成及免疫活性研究

利用离子交换色谱与凝胶色谱纯化获得刺五加黑木耳酸性多糖(EAP),使用高效液相色谱(HPLC)、傅里叶红外光谱(FT-IR)等方法分析其组成结构;通过噻唑蓝(MTT)实验、Griess法及酶联免疫吸附法测定一氧化氮(NO)释放量和IL-6、IL-10、TNF-α等细胞因子含量,评价EAP对小鼠巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。结果表明:EAP是一种分子量为925.9 k Da的β型酸性杂多糖,主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、木糖、葡萄糖及半乳糖以摩尔比例64.8∶14.7∶14.2∶3.2∶2.0组成。EAP在50~250μg/m L浓度下对小鼠巨噬细胞RAW264.7未产生明显毒性,且可极显著提高巨噬细胞的活性(p<0.01);在EAP处理浓度为50μg/m L时,巨噬细胞的NO释放量和细胞因子IL-10分泌量极显著提高(p<0.01),分别为17.2μmol/L和171.5 pg/m L;当浓度200μg/m L时,EAP可极显著提高TNF-α和IL-6的分泌量(p<0.01)。结论:刺五加黑木耳酸性多糖具有增强免疫活性的潜力。

刺五加栽培基质对黑木耳多糖化学组成及抗氧化性的影响

为探讨刺五加栽培基质对黑木耳及其多糖化学组成、抗氧化性的影响。以刺五加基质栽培的黑木耳为原料,以非刺五加栽培的黑木耳为对照,测试了2种黑木耳总糖、总蛋白、脂肪、总酚和灰分的含量;通过纤维素酶酶解、Na OH提取和水洗连续提取黑木耳多糖,并对提取物的化学组成与抗氧化性进行了分析。结果表明,2种黑木耳的总糖含量均超过55%,其多糖均由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖和岩藻糖组成。然而,与对照相比,刺五加黑木耳的多酚含量明显提高,含有蛋白质7.9%,单糖组成中的葡萄糖含量明显降低,半乳糖含量明显增加。其中,含蛋白的刺五加黑木耳多糖中半乳糖的摩尔百分含量为32.4%,是对照的4.8倍,其氧自由基和ABTS自由基清除能力也分别提高了3.2倍和2.7倍。刺五加栽培基质的使用,能改变黑木耳化学成分的合成代谢途径,对黑木耳活性成分的产量与功能提升具有重要作用。

刺五加水提液对黑木耳发酵及其胞内多糖的影响

在摇瓶试验优化黑木耳菌株HA-1液体发酵最适pH、接种量和发酵时间的基础上,向培养基中添加不同量的刺五加水提液,考察其对菌体生长与菌体形态、胞内多糖组成及活性的影响。发现在培养优化条件(初始pH5.5、接种量8%、发酵时间9 d)下,刺五加水提物的添加不仅能促进黑木耳菌株HA-1的菌体生长和菌球直径增长;还能改变胞内多糖的单糖组成与抗氧化性。其综合效果以0.5 g/L的添加量最佳:菌丝体干重为10.75 g/L,增长1.23倍,大型菌球(2 mm<D≤3 mm)的百分比例为94.47%;单糖组成中的半乳糖摩尔比例为18.15%,葡萄糖摩尔比例为56.66%。抗氧化性测试的TEAC值(50.61 μmol Torolox/g)和ORAC值(2 047.54 μmol Torolox/g)最高。