抗肝癌单链抗体融合TNFα导向作用的初步实验研究

目的获得有效果的抗肝癌基因工程单链免疫细胞因子（ＴＮＦα）。方法将抗肝癌单克隆抗体（ｍＡｂ）ＨＡｂ２５的单链抗体（ｓｃＦｖ２５）与人ＴＮＦα基因偶联，构建抗肝癌免疫细胞因子（ｓｃＦｖ２５－ＴＮＦα），亚克隆人原核ＧＳＴ融合表达载体ｐＧＥＸ ４Ｔ－１中，在大肠杆菌中进行表达。对肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１涂片进行间接免疫荧光染色，测定纯化后目的蛋白的活性。通过对荷肝癌（ＳＭＭＣ－７７２１）裸鼠进行的初步抑瘤实验，检测ｓｃＦｖ２５－ＴＮＦα的导向治疗效果。结果ｓｃＦｖ２５－ＴＮＦα具有与亲本抗体ＨＡｂ２５类似的抗原结合特异性。 ｓｃＦｖ２５－ＴＮＦα对荷肝癌裸鼠体内直径２ｍｍ左右的肿瘤具有明确的导向杀伤作用，达到３／３完全缓解，明显强于ＴＮＦα对照组，该组有效者只有２／３，且无完全缓解。结论ｓｃＦｖ２５－ＴＮＦα为具有一定效果的抗肝癌双功能抗体。

二硫键稳定的抗肝癌人源化Fv-突变体人TNFα融合基因的构建与表达

利用引物PCR和重叠延伸PCR法,将抗肝癌人源化抗体hscFv25重链可变区和轻链可变区各定点突变出一个半胱氨酸,将hTNFα改造成高抗肿瘤活性的突变体,分别原核表达重链可变区突变体、轻链可变区突变体-突变体hTNFα融合基因,然后将两种表达的产物混合进行复性,目的获得具有高稳定性和高抗肿瘤活性的抗肝癌靶向细胞因子。结果重链可变区突变体和轻链可变区突变体-突变体hTNFα融合基因在大肠杆菌中均获得高效表达表达产物以包涵体形式存在,混合复性结果未获得活性产物。

恶性转化试验及其相关试验体系在致癌机理研究中的应用

肿瘤的发生以细胞的恶性转化为基础 ,本文就以细胞恶性转化为基础的恶性转化试验及其相关试验体系用于致癌机理的研究近况作一综述 ,并分别介绍了各研究体系所揭示的结果。