中草药饲料添加剂发酵工艺优化及安全性试验

为了解复合益生菌对复方中草药饲料添加剂的最佳发酵条件,并考察发酵复方中草药饲料添加剂对小鼠的急性毒性和亚慢性毒性,试验以发酵中草药中总黄酮得率(亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定)为指标,采用单因素试验和正交试验对混合菌种比例、菌液接种量、发酵温度、发酵时间进行了优化,并在最佳发酵工艺条件下测量发酵中草药中总黄酮质量浓度。在急性毒性试验中,将40只小鼠随机均分为高(按体重20 mg/kg灌胃)、中(按体重15 mg/kg灌胃)、低(按体重10 mg/kg灌胃)剂量组和对照组(按体重10 mL/kg灌胃无菌生理盐水),灌胃后连续观察7 d,每天记录小鼠的精神状态、饮食、行为及死亡情况;在亚慢性毒性试验中,将40只小鼠随机均分为高(按体重15 mg/kg灌胃)、中(按体重10 mg/kg灌胃)、低(按体重5 mg/kg灌胃)剂量组和对照组(按体重10 mL/kg灌胃无菌生理盐水),每天灌胃1次,连续90 d,给药结束后继续观察28 d,最后1天采集小鼠血液及器官,计算脏器系数,检测血清生化指标及观察组织病理学变化。结果表明:最佳发酵工艺条件为解淀粉芽孢杆菌与干酪乳杆菌接种比例(V/V)1∶4、接种量1.0%、发酵温度37℃、发酵时间72 h。在此工艺条件下发酵后中草药总黄酮质量浓度平均值为3.032 g/L,符合预期。在小鼠急性毒性试验中未能检测出半数致死剂量(LD50)。在亚慢性毒性试验中,在停药后第28天各组小鼠脏器系数均差异不显著(P>0.05),血清生化指标(除天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶外)差异不显著(P>0.05)。说明发酵中草药饲料添加剂安全性好,无毒副作用。