sMiMi-CKcDNA的克隆、表达及活性检测

目的本实验拟通过ＲＴ－ＰＣＲ技术，克隆及表达大鼠心肌线粒体ｓＭｉＭｉ－ＣＫ基因。方法从大鼠心肌线粒体总ＲＮＡ中扩增出ｓＭｉＭｉ－ＣＫＤＮＡ片段（１３３ｋｂ），将该片段克隆到载体ｐＵＣ１９上，对其进行酶切和测序，然后将其克隆到ＰＢＶ２２０上，经温度诱导，使其在大肠杆菌中得以表达，并用ＮＡＤＨ法测其活性。结果ｓＭｉＭｉ－ＣＫ基因序列与国外报导的序列完全一致，表达的ｓＭｉＭｉ－ＣＫ分子量为４５８ＫＤ，占菌体总蛋白的１０７％，其活性为２７４×１０５ＩＵ／Ｌ菌液。结论ｓＭｉＭｉ－ＣＫ基因的克隆及表达，为今后从基因水平上研究心肌缺血性损伤的机制及治疗提供了依据。