黑龙江省首次发现汉坦病毒家鼠型的分子生物学证据

目的 测定从疫区捕获的宿主动物 -褐家鼠肺中分离的汉坦病毒 Pf2 6株的 S基因片段的全基因序列。方法 选择汉坦病毒 S基因序列保守区设计引物 ,用 RT- PCR方法将 S基因分两段扩增 ,再将扩增片段连接到 PU C19载体上 ,然后进行测序和分析。结果 Pf2 6株的 S基因片段的全序列长为 1776 nt。只有一个主要的编码 N蛋白的 ORF,起始位置为第 43 nt,终止于1332 nt,编码的蛋白长为 42 9aa。 Pf2 6株的 S基因片段核苷酸序列与 SEO型中的病毒株的同源性最高 ,而与汉坦病毒其他型的同源性较差。从种系发生树分析来看 ,Pf2 6株归结于汉坦病毒的SEO型。在 SEO型之内 ,从 S基因的种系发生树 (A)上看 ,Pf2 6株与 sr- 11株的亲缘关系比较近。但是 ,从编码的 N蛋白的种系发生树 (B)上看 ,Pf2 6株与 Z37株、Guo3株的亲缘关系比较近。Pf2 6株的 S基因和 N蛋白序列与汉坦病毒 SEO型分离株 sr- 11,Z37,Guo3株的同源性最高 ,分别为 :核苷酸同源性 ,97% ,96 % ,88% ;氨基酸同源性 ,97% ,98% ,98%。Pf2 6株与 sr- 11株 ,Guo3株 ,Z37株 N蛋白氨基酸变异主要发生在 N蛋白的前半部分。中国分离到的 Pf2 6 ,Guo3,Z37株与 sr- 11株氨基酸变异主要集中在 aa6 9- aa75位之间。结论 Pf2 6株为一株新的汉坦病毒 SEO型病毒株。

汉坦病毒HTN261株S基因片段的核苷酸序列测定及分析

黑龙江省是肾综合征出血热 (HFRS)的重疫区。近年来HFRS年的发病人数曾超过万人。流行病学和血清学研究表明黑龙江省HFRS疫区主要是姬鼠型 ,但目前尚缺乏病毒的分子生物学资料。我们对从疫区捕获的宿主动物 黑线姬鼠肺中分离的汉坦病毒HTN2 6 1株的S基因片段的全基因序列进行了测定和初步分析。结果如下 ,HTN2 6 1株的S基因片段的全序列长为 16 97nt。只有一个主要的编码N蛋白的ORF ,起始位置为第 37nt,终止于132 6nt,编码的蛋白长为 42 9aa。没有发现存在ORF2。HTN2 6 1株的S基因片段核苷酸序列与HTN型中的病毒株的同源性很高 ,而与汉坦病毒其他型的同源性较差。从种系发生树分析来看 ,HTN2 6 1株归结于汉坦病毒的HTN型。在HTN型之内 ,HTN2 6 1株和HTN76 118株在一个分枝内。就其核苷酸和蛋白的同源性来说 ,HTN2 6 1株和HTN76 118株的同源性分别是 89% (全S基因 )和 98% (蛋白 )。而与中国境内发现的其他汉坦病毒株Z10 ,HU ,Chen4,NC16 7等基因和蛋白的同源性相对较差。汉坦病毒除具有其宿主的依赖性外 ,还具有其地理的簇集性。HTN2 6 1株和HTN76 118株之间S基因和N蛋白序列的变异性的差异分别为 11%和 2 % ,表明HTN2 6 1株和HTN76 118株还有不同 ,可能是不同的亚型。不过 。

马传染性贫血病病毒核心蛋白基因的克隆和表达

根据美国马传染性贫血病病毒（EIAV）Wyoming株基因序列，设计扩增EIAVgag和p26基因的引物，用PCR法能忠实的分别扩增出全长gag和p26基因。经用杆状病毒表达系统对所获gag和p26基因进行克隆和重组，获得了高效稳定表达Gag和p26蛋白的重组杆状病毒（rBVs）。含有gag和p26基因的重组杆状病毒感染昆虫Sf21细胞，经无血清昆虫细胞培养基增殖和纯化，每升培养物能获得2mgCag或12mgp26蛋白。

大兴安岭地区高寒冻土地带流感后病毒性心肌炎病因研究

Coxsackie B组病毒是人类心肌炎的重要病原已被公认。流感后病毒性心肌炎发病明显增多,但对病原的具体分析则较少。特别是对北方高寒冻土地带病毒性心肌炎病原学的具体分析国内外尚未见报道。为此。

100例暴露者狂犬病毒抗体水平监测

本文应用斑点酶免疫试验对１００例暴露者进行血清学监测，并同间接免疫荧光（ＩＦＡ）法进行了比较，符合率１００％，实验结果再一次表明了暴露者的狂犬病毒血清学监测的重要性。

应用斑点酶免疫法检测狂犬病毒抗体的研究

本文通过特异性试验、重复性试验、稳定性试验,建立了斑点酶免疫试验(DEIA)检测狂犬病毒抗体的方法,其结果与间接免疫荧光(IFA)法进行了比较,符合率100％,实验结果表明本法不但简便、稳定而且敏感特异,不需要特殊仪器设备及昂贵的荧光显微镜,是一种值得推广的检测狂犬病毒抗体的方法。

人类腹泻粪便中小圆形病毒的电子显微镜研究

我们在研究婴幼儿急性胃肠炎和腹泻及成人流行性腹泻的病原学时,用直接电镜和免疫电镜技术,从患者粪便标本中检出了4种小圆形病毒颗粒。粪便标本用生理盐水制成20～50％的悬液(水样便可不稀释),经超声波粉碎处理(振幅4μ,每次30秒钟,共3～5次),3000rpm离心30分钟,上清为被检样品。被检样品制备直接电镜或免疫电镜标本,用3％磷钨酸(pH6.4)做负染色。

戊型肝炎病毒抗体I_gM酶联试剂盒的研制

为建立更适用于临床急性戊型肝炎的诊断试剂 ,利用重组杆状病毒在昆虫细胞中表达ORF2 基因 ,获得在体外自动组装的病毒样颗粒 ,以此为主要包被抗原 ,并配以单项检测意义的ORF3 表达产物 ,采用间接酶联免疫试验 (ELISA) ,建立了检测抗HEVIgM的酶联诊断试剂盒。检测 3～ 4岁儿童、中学生、散发急肝病人、临床确诊的戊肝病人的抗HEVIgM ,阳性率分别为 1 0 %、0 7%、10 8%、10 0 %。将 2份戊肝急性期血清分别稀释至 1∶6 40 0和 1∶12 80 0时 ,尚可检出。利用该试剂盒检测调试血清 ,批内、批间变异系数小于 10 %。 37℃放置3天后 ,试剂盒的检测结果不受影响。表明该试剂盒具有良好的诊断价值 。

轮状病毒腹泻电镜检查判断指标的研究

轮状病毒所致的婴儿腹泻和流行性成人腹泻是一组流行最广泛的病毒性腹泻。在实际防治工作中常需要得到最快的病原学诊断,以便及时采取有效的防治措施。电镜检查仍是一项最快、最准确的简易检测方法,特别是到目前,国内绝大多数省份均设有电子显微镜,开展电镜诊断技术具有广泛的应用前景。我们总结本室十余年利用电镜对婴儿腹泻、流行性成人腹泻的粪便标本的检查结果,确定了轮状病毒腹泻的判断指标:

二氧化氯对乙肝表面抗原的灭活效果

应用酶联免疫吸附(ELISA)试验研究了二氧化氯(ClO2)在各种条件下对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的灭活效果,并与液氯进行了对比。结果表明,在投量为25mg L、作用时间为20min、pH值为3.0～7.0时ClO2对HBsAg有很好的灭活效果。与Cl2(液态)相比,ClO2对HB sAg的灭活效果好、速率快,且pH值适应范围广。

一种防止和清除杂交瘤细胞真菌污染的有效方法

一种防止和清除杂交瘤细胞真菌污染的有效方法孙成群，孙荣芳，陶清晨，刘学礼（黑龙江省卫生防疫站病毒病防治研究所，哈尔滨１５００３６）使用含咪康唑（５μｇ／ｍｌ）的培养基挽救受真菌污染的杂交瘤细胞，用药后３ｄ，污染真菌消失．培养基中加人２．５旭／ｍｌ的咪...

42例狂犬疫苗免疫后抗体水平监测

尽管人类对狂犬病的认识已有两千多年的历史,但至今尚无特效的治疗方法,因此,应用狂犬疫苗免疫接种预防仍是有效的措施之一,为探求狂犬病疫苗免疫后的抗体水平,减少疾病的发生,本文报告了42例血清中抗狂犬病毒抗体水平的监测。

洪涝灾后防治甲型肝炎大流行

甲型肝炎是病毒性肝炎的一种,在各类急性病毒性肝炎病例中,占80％以上。甲型病毒性肝炎是一种常见病、多发病。我国不少地区不断发生甲肝的局部流行,当前仍为严重的传染病之一。据报道,我国12亿人口中有7亿人感染过甲型肝炎。

斑点酶免疫实验检测流行性出血热抗体方法的研究

本文应用斑点酶免疫试验(DEIA),检测流行性出血热病人血清42份,其结果与间接免疫荧光(IFA)进行了比较,符合率100％,其DEIA几何干均滴度为1:880,IFA为1:580,同类风湿因子阳性血清[RF(+)]无交叉反应,证明本方法具有较高的敏感性和特异性,本文还对不同方法处理组织内源酶的效果和不同阻断剂的阻断效果进行了比较。试验结果表明本法不但敏感、特异,而且简单、快速、安全、经济、易于推广。

内蒙古大兴安岭林区森林脑炎自然疫源地调查报告

１９９２～１９９３年，我们对内蒙古大兴安岭林区进行森林脑炎自然疫源地调查。选择南、北、中三个方位，共捕蜱９８２只，分离到３株森林脑炎病毒（编号９３０２、９３０５、９３０８）。并从可疑森脑死亡者脑组织中分离到１株森林脑炎病毒（９３Ｈ）。从而证实内蒙古大兴安岭为森林脑炎自然疫源地。

斑点酶免疫试验检测流行性出血热抗体的研究

本文应用斑点酶免疫试验(DEIA),检测流行性出血热(EHF)病人血清42份,其结果与间接免疫荧光(IFA)进行了比较,符合率100%,其DEIA 几何平均滴度为1:880,IFA 为1:580,与类风湿因子阳性血清[RE(+)]无交叉反应,证明本方法具有较高的敏感性和特异性。本文还对不同方法处理组织内源酶的效果和不同阻断剂的阻断效果进行了比较。试验结果表明本法不但敏感、特异,而且简单、快速、安全、经济、易于推广。