电穿孔转染法提高基因表达效率的电场强度优化探索

目的采用监测荧光报告基因表达的策略,探索应用电穿孔法进行稳定转染的适合悬浮淋巴细胞的电场强度。基因转染技术广泛应用于基因表达调控,基因功能,信号转导和药物筛选研究,已经成为当前生命科学的基本操作之一。外源性DNA导入哺乳动物或人细胞有两种类型:瞬时转染和稳定转染。天生趋于悬浮的细胞非常难转染,多种方法都效率低下。而电穿孔法理论上可用于各种细胞,尤其对于悬浮细胞十分有效。本文就悬浮生长的T淋巴细胞的电穿孔法转染条件之一(电场强度)进行优化探讨。方法用荧光报告基因质粒转入急性白血病T淋巴细胞系,根据报告荧光活性单位值和蛋白浓度判断不同电场强度(250,270,290V/cm)对悬浮细胞的最佳电穿孔转染条件。结果随电压升高,原始荧光报告基因表达加强,270和290V无明显差异,存活细胞数量依次降低。相对荧光单位,表明相同细胞数量存活时,转染效率按照250,270,290V顺序依次升高。中等强度的270V电压,既保证了足够多的转染体存活,又可得到满意的高表达基因荧光信号。结论根据荧光蛋白表达和蛋白吸光度判断,950μF电容和0.4cm的放电杯中转染淋巴细胞,电场强度270 V/cm的效率最佳。