单克隆抗体及其抗感染作用的研究进展

骨髓瘤细胞和单个B细胞可融合形成杂交瘤细胞,这种细胞分离并克隆后可产生针对单一表位,且结构和功能相同的抗体,即单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。单克隆抗体发展历程经历了四个阶段。其制备技术也在不断革新与发展。目前单克隆抗体技术发展日益成熟,在疾病治疗与诊断中发挥着关键的作用。单克隆抗体与天然抗体不同,具有效价高、特异性强、交叉反应少、可大量制备,靶向性高等特点。mAb可用于诊断及治疗感染性疾病、自身免疫病以及癌症等。对mAb的发展历程及mAb在抗感染性疾病中的应用进行简要阐述。

融合肽抑制剂T20抵抗株包膜蛋白热变异位点547对人类免疫缺陷病毒-1生物学功能的影响

目的分析人类免疫缺陷病毒（HIV）的融合肽抑制剂T20抵抗突变株热变异位点547对病毒生物学功能的影响。方法采用PCR和定点突变方法构建HIV包膜蛋白（Env）突变体pSM-HXB2-DIV／DIM／SIM和PSM—LAI-DIV四种表达质粒，并构建了含有547D突变并置换HXB2或LAI株gp120部分的Env质粒，pSM-LAIgp120／HXB2gp41-DIV（L／H-DIV）和pSM-HXB2gp120／LAIsp4t—DIV（H／L-DIV）。假病毒感染实验和细胞融合实验分析Env的功能；Westernblot检测Env表达。圆二色谱（CD）分析6螺旋束（6HB）的稳定性；PyMOL软件分析含有547D的6HB结构。结果HXB2为骨架的547DIV、DIM及SIM和LAI为骨架的DIV假病毒的感染性低于其野生型（wt），前者的各变异Env的融合活性也明显降低；L／H—DIV假病毒感染性与HXB2wt相似，但融合活性明显低于wt；H／L—DIV假病毒的感染性低于两种野生型，融合活性与LAI叭相似，但低于HXB2wt。CD结果证明547D突变降低6HB的稳定性；结构分析显示，547D突变没有改变NHR中该位点与CHR中Q652位点之间的氢键，但可能通过增加NHR的负电荷从而减少病毒与T20的结合。结论547D突变降低LAI与HXB2株的感染性和HXB2株的融合活性；该突变通过降低6HB稳定性和增加gp41所带负电荷来减少病毒与T20的结合。

β-内酰胺酶抑制剂研究进展

β-内酰胺酶抑制剂能抑制耐药菌产生的β-内酰胺酶,常与β-内酰胺类抗生素联合使用,能使抗生素中的β-内酰胺环免遭水解,保护抗生素的抗菌作用。1976年,英国从链霉菌中发现第一个β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸,其能抑制部分广谱和超广谱β-内酰胺酶,常与阿莫西林联合应用,可使阿莫西林对某些细菌的MIC值降低。随着抗生素的大量使用以及具有β-内酰胺酶相关的耐药性的细菌的增加,许多β-内酰胺酶抑制剂相继被发现。根据β-内酰胺酶抑制剂的结构,主要将其分为含有β-内酰胺环结构的抑制剂和不含β-内酰胺环结构的抑制剂。本文就目前国内外β-内酰胺酶抑制剂的研究现状进行综述。

Gelsolin的生物学功能与其在疾病诊断及治疗中的作用

凝溶胶蛋白（Gelsolin）是一种激动蛋白结合蛋白,目前被认为在细胞运动、细胞吞噬中有重要的作用.近年,研究表明在许多疾病中血清Gelsolin水平下降,且其与疾病的严重程度、并发症的发生率和并发症的严重程度有关,能够预测并发症的发生和严重程度.Gelsolin还被发现有降糖和抗炎的作用,可以对疾病治疗起到一定作用.因而有必要对Gelsolin的生物学功能与其在疾病诊断及治疗中的作用进行研究.

CVB对OL细胞和OL/BDV细胞I型IFN信号转导途径的影响

探讨柯萨奇病毒(coxsackievirus, CVB)对人类少突胶质细胞(oligodendrocyte, OL)和博尔纳病病毒(Borna disease virus, BDV)持续感染的OL细胞(OL/BDV)中I型干扰素(interferon, IFN)、microRNA-155(miR-155)表达以及干扰素调节因子(interferon regulatory factor, IRF)7细胞定位的影响。CVB感染OL细胞和OL/BDV细胞0、2、4、6、12和24 h,qPCR检测I型IFN mRNA和miR-155表达水平。OL细胞和OL/BDV细胞分别转染IRF7-EGFP质粒,CVB感染4 h,观察IRF7细胞定位情况。CVB感染OL细胞2、4、12和24 h,IFN-αmRNA和miR-155表达水平显著增加,IFN-βmRNA表达水平在4、12和24 h显著增加;CVB感染OL/BDV细胞IFN-α和IFN-βmRNA表达水平除0 h均显著增加,但miR-155表达仅在12和24 h显著增加。CVB感染OL细胞和OL/BDV细胞4 h,IRF7绿色荧光蛋白由细胞浆转移至细胞核内。综上所述,CVB可诱导OL细胞和OL/BDV细胞I型IFN、miR-155的表达,促进IRF7入核,从而激活I型IFN信号转导途径。

HIV感染者免疫重建不良发生的机制与相关性因素

在抗逆转录病毒治疗后,有9%~45%的人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者尽管达到了病毒学抑制,但其CD4+T细胞数水平没有恢复,这些感染者被称为免疫重建不良的HIV感染者或免疫无应答者(immunological non-responders,INRs)。免疫重建不良者发生AIDS和non-AIDS的风险更高,预期寿命更低,因此为感染者的治疗带来困难。本文针对免疫重建不良发生的可能相关因素及其与疾病进展的关系进行综述,探讨免疫重建不良发生的机制,为评估疾病预后以及有针对性的优化治疗方案提供参考。

哈尔滨地区男男性行为人群HIV-1感染未治疗者耐药基因变异分析

目的了解2016年至2017年哈尔滨地区男男性行为人群(men who have sex with men,MSM)流行的人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)的亚型分布及原发耐药流行特点。方法收集哈尔滨市传染病院和哈尔滨医科大学附属第四医院60的新诊断的MSM途径HIV-1感染者未经抗逆转录病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)的外周血样本,提取血浆中RNA,逆转录PCR和巢式PCR扩增HIV-1的gag、pol、int片段并纯化和测序。应用Mega 6.0软件构建系统进化树并分析病毒亚型。利用美国斯坦福大学HIV耐药检测系统分析耐药突变的种类和频率。结果成功获得50条gag基因序列、56条pol基因序列和44条int基因序列。亚型分析结果显示:CRF01_AE、CRF07_BC、B亚型和独特重组型(unique recombinant form,URF)分别占比为59.7%(34/57)、26.3%(15/57)、3.5%(2/57)和10.5%(6/57)。本研究共发现7份(12.5%)样本存在耐药突变,其中针对非核苷类逆转录抑制剂的耐药位点V179D/E/T频率最高为8.75%(5/56),此外还发现蛋白酶抑制剂耐药位点Q58E(1/56)和M46I(1/56)突变。未发现针对核苷类逆转录酶抑制剂和整合酶抑制剂的耐药突变位点。结论哈尔滨地区部分新诊断的MSM途径HIV-1感染者中以CRF01_AE亚型比例最多,其次为CRF07_BC和CRF01_AE与其他亚型重组株,耐药株所占比例较高,未发现整合酶抑制剂耐药突变。

程序性死亡受体1在HIV感染和防治中的作用研究进展

程序性死亡受体1(programmed cell death-1,PD-1)是细胞表面的一种免疫抑制分子,与配体PD-L1或PD-L2相互作用,负向调控细胞和体液免疫应答。人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染后,PD-1在感染者外周血淋巴细胞表面表达上调,高水平表达的PD-1不仅影响病毒对靶细胞的易感性和宿主的抗病毒免疫应答能力,还影响抗逆转录病毒治疗效果。体外阻断PD-1/PD-L通路可改善宿主细胞对HIV的特异性免疫应答水平,已作为辅助手段用于抗病毒治疗和HIV疫苗的研究中。本文概述了PD-1在HIV感染和防治中的研究进展。

人类免疫缺陷病毒-1包膜糖蛋白gp41的表达及优化

目的优化HIV．1本地流行株06044sp4t蛋白表达设计，为gp41免疫原的制备提供实验基础。方法以含HIV．106044gp41基因的质粒为模板，采用聚合酶链反应（PCR）扩增gp41目的基因，分别构建原核表达载体pET26b：gp41T（含546—683f1．a片段）及去掉N一端（NHR）和C一端（CHR）七价重复序列中间部分loop区（582～627aa）的pET26b—Sr41T（AL），经测序确认后，转化至大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）中，IPTG诱导表达。用聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）及Westernblot检测并鉴定重组表达蛋白。优化了重组蛋白的诱导表达条件。结果pET26b-gp41T和pET26b—gp41T（AL）重组表达质粒均能表达gp41蛋白，glMlT（△L）蛋白表达量高于gp41T；不同IPTG浓度诱导的蛋白表达量没有区别；用1mmol／LIPTG诱导后，37℃条件下表达量最高。Westernblot结果显示，gp41T（△L）与His抗体结合性能好。结论实验获得了稳定表达HIV-106044gp41的原核表达载体以及表达条件，为大量制备gp41蛋白免疫原奠定了基础。

诱导广谱中和抗体的人类免疫缺陷病毒-1疫苗

由于人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）包膜糖蛋白的高度变异性及较弱的免疫原性,研制HIV疫苗遇到了极大的困难,目前还没有有效疫苗.包膜糖蛋白是诱导中和抗体的主要抗原.如何针对包膜蛋白设计出合理的免疫原,诱导具有交叉保护功能的广谱中和抗体已经成为研究HIV疫苗的主要目标.

基于病毒样颗粒的免疫原研究进展

病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)是一类不同于可溶性重组抗原的亚单位疫苗,具有较强的免疫原性。与亲本病毒一样,VLP既可以是无包膜的,也可以是带包膜的。根据VLP的复杂性,它可以在原核或真核表达系统中使用重组载体生产。到目前为止,针对各种疾病的VLP候选疫苗已经在不同的表达系统中生产出来。一些VLP已经进入临床试验阶段,少数已经获得许可和商业化。文章综述了各类VLP疫苗、各种表达系统的表达效果以及嵌合类VLP的构建及其免疫原性。

单克隆抗体在抗病毒感染中的研究进展

单克隆抗体(monoclonal antibody, m Ab),指同一种抗原决定簇的细胞克隆所产生的均一性抗体。m Ab已成功应用以诊疗各种疾病,尤其是癌症和免疫性疾病。近些年来,m Ab逐渐用于治疗病毒性疾病,针对急性和慢性病毒感染研发的抗病毒m Ab数量逐渐增长。m Ab的组合疗法可同时靶向病毒多个表位,从而克服病毒免疫逃逸的问题,多价m Ab的设计开发能够更加有效的作用于病毒。本文比较了不同m Ab制备方法的优缺点,总结了m Ab近期在抗病毒感染领域的研究进展,并讨论了m Ab作为治疗病毒性疾病药物的前景。

TRIM21胞内免疫功能与治疗应用

三基序蛋白21(tripartite-motif protein 21,TRIM21)是一种存在于细胞胞质内的泛素连接酶,也是一类胞内抗体受体或者感应器,成为抵御病毒入侵的固有免疫防线。对于在细胞外已经逃逸了中和抗体作用,并被非中和抗体吸附而通过细胞膜侵入细胞内的病毒,TRIM21可以通过与病毒-抗体复合物中的抗体Fc段结合,发挥阻止病毒复制和诱导细胞免疫的抗病毒作用。TRIM21的降解病毒颗粒与激活免疫信号的双重效应功能,受自身的泛素化和磷酸化的严格调控。此外,TRIM21还能够与补体系统协同发挥作用。文章对TRIM21细胞内抗病毒和激活免疫功能的机制,病毒载体介导的基因治疗、抗体工程和TRIM-AWAY技术进行综述。

疫苗佐剂对免疫细胞的激活机制

预防性疫苗是控制感染性疾病流行最有效的手段之一。疫苗佐剂可以增强疫苗抗原的免疫原性,提高特异性抗体的滴度。佐剂通过与不同种类Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)、NOD样受体(NOD-like receptors,NLRs)或环磷酸鸟苷-腺苷合酶(cyclic-GMP-AMP synthase,cGAS)作用,增强抗原提呈细胞(antigen presenting cells,APCs)对抗原的摄取及提呈能力。但是由于不同种类佐剂诱导活化的模式识别受体种类不同,因此在诱导CD4^(+)T细胞分化成不同类型的T细胞反应中具有一定的偏向性。文章总结了佐剂激活免疫细胞的作用及机制,为疫苗佐剂的选择及合理应用提供依据。

细菌产铁载体的结构、功能及其研究进展

铁载体（siderophore）是由微生物（细菌、真菌）产生的对铁具有高亲和性的小分子化合物。微生物需要铁合成细胞代谢所需物质,所以铁对于微生物来说至关重要。但三价铁离子及其衍生物溶解性较低,故大多数微生物难以直接利用。

HIV诱导产生广谱中和抗体的记忆B细胞的BCR特征

成功建立体液免疫记忆反应至少取决于两层防御机制:抵抗再感染病原体的第一道防线为既有体液免疫记忆,其依赖于长寿浆细胞(plasma cells,PCs)分泌的预存的保护性抗体;第二道防线为反应性体液免疫记忆,即病原体经历的记忆B细胞迅速重新激活以产生抗体。其中后者在防御同源病毒的再次感染时起到至关重要的作用。由于人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)破坏免疫系统及病毒高变异特性对预防性疫苗的研发提出了挑战。因此,了解HIV诱导产生广谱中和抗体的记忆B细胞受体(B cell receptors,BCR)的特点为HIV-1预防性疫苗的设计提供新的思路和方向。

乙型肝炎病毒新型治疗方式的研究进展

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染可以导致严重的肝脏疾病,是肝纤维化、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)病死率高的主要原因。尽管已经拥有有效的疫苗,但三联乙肝疫苗的全球覆盖率为84%,未达100%,现有感染人数与新增人数仍然很多。目前主要的抗HBV药物为核苷/核苷酸类似物(nucleotide analogues,NAs)以及干扰素(interferon,IFN)。但二者对病毒持续存在的根本因素——共价、闭合、环状DNA分子(covalently closed circular DNA,cccDNA)无效,故现有的抗病毒药物并不能彻底治愈HBV感染。HBV的新型治疗方法可以通过靶向cccDNA而使其失效,为治愈慢性HBV感染带来了希望。文章对当前新型治疗方法中研究较多的RNA干扰、基因编辑和表观遗传修饰方法在治疗HBV感染中的作用和新发展进行概述。

TRIM21的抗病毒作用研究进展

TRIM(tripartite motif)家族因具有相似的N端结构又被称为RBCC家族,其成员在诸多与固有免疫相关的生物学过程中发挥重要作用.近年来的研究发现,TRIM家族参与宿主的胞内抗病毒作用,其中一些TRIM家族蛋白被认为是病毒的限制因子.最近,TRIM21作为E3泛素连接酶的抗病毒作用相继被报道,其可通过抗体依赖的细胞内抗病毒作用(antibody dependent intracellular neutralization,ADIN)及参与固有免疫通路发挥抗病毒作用,现就TRIM21的结构、表达分布、抗病毒作用及其机制的研究进展进行总结和综述.

外源性IFN-β对OL细胞和OL/BDV细胞中内源性Ⅰ型IFN的诱导作用

目的探讨外源性干扰素(interferon,IFN)-β对人类少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL)和博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)持续感染的OL细胞(OL/BDV)中内源性Ⅰ型IFN表达和干扰素调节因子(interferon regulatory factor,IRF)7细胞定位的影响。方法外源性IFN-β处理OL细胞和OL/BDV细胞0、0.5、2、4、8、24 h,根据细胞是否加入外源性IFN-β,分为外源性IFN-β未刺激组和刺激组。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测Ⅰ型IFN mRNA表达。OL细胞和OL/BDV细胞分别转染IRF7-EGFP质粒,外源性IFN-β刺激4 h,观察IRF7细胞定位情况。结果外源性IFN-β刺激OL细胞,在2、4、24 h,IFN-αmRNA表达显著增加(P值分别为0.008,0.0001,0.004);在0.5、4、8、24 h,IFN-βmRNA表达显著增加(P值分别为0.0004,0.0002,0.011,0.012),两者均在4 h增加最为显著。外源性IFN-β刺激OL/BDV细胞4 h和24 h,IFN-αmRNA表达显著增加(P值分别为0.0004,0.022),IFN-βmRNA表达仅在刺激4增加(P=0.002)。外源性IFN-β刺激OL细胞和OL/BDV细胞4 h,IRF7绿色荧光蛋白均转移至细胞核内。结论外源性IFN-β可诱导OL细胞和OL/BDV细胞中内源性I型IFN表达,参与解除BDV对I型IFN应答的抑制过程,并促进IRF7的活化入核。

外泌体作为小干扰RNA递送载体的研究进展

外泌体(exosomes)是细胞内源性的小囊泡,大多数哺乳动物细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。外泌体已成为细胞间通讯的重要介质,用于传递膜和细胞溶质蛋白、脂质和RNA的载体。近年来,小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)已经成为病理生理疾病治疗的潜在选择,但是不良的生物利用度限制了其治疗潜力。为了实现RNA药物的治疗潜力,必须开发有效的、组织特异性的和非免疫原性的递送技术。目前已经研究了几种载体,其中外泌体被认为是有效递送siRNA的可行的载体,这里将主要对外泌体及外泌体能作为siRNA递送的天然载体进行概述。