大豆内生细菌种群多样性PCR-DGGE分析方法的优化研究

建立了一种适合研究大豆内生细菌种群结构的PCR-DGGE分析方法,筛选适合分析大豆内生细菌的引物,采用巢氏PCR方法获得内生细菌16S rDNA的V6、V7、V8三个高变区,通过优化DGGE技术的变性梯度范围、电泳时间和上样量的大小来获得最佳的DGGE条带图谱。经过优化确定了适合大豆内生细菌研究的引物为968F-1378R,变性剂梯度为40%～60%,且在电压180 V时电泳时间6 h最为合适,上样量为15μL时可获得高分别率的DGGE条带。

响应面法优化枯草芽孢杆菌B91发酵培养基

[目的]采用响应面法对枯草芽孢杆菌B91的发酵培养基进行了优化,提高其发酵产物中芽孢的浓度。[方法]利用Plackett-Burman设计筛选出培养基中影响芽孢浓度的显著因子,即葡萄糖、酵母膏和Mn SO4;通过爬坡试验逼近显著因子对应最大响应值的稳定区域,并采用响应面法的中心组合试验确定各显著因子的最佳水平。[结果]优化后的培养基组成为:葡萄糖9.35 g/L,酵母膏6.93 g/L,氯化钠3 g/L,K2HPO42 g/L,Mg SO40.2 g/L,Mn SO410.16 mg/L,Ca CO30.2 g/L。菌株B91在优化后培养基中的芽孢浓度达到41.89×108cfu/ml,与优化前(24.83×108cfu/ml)相比提高了68.7%。[结论]实现了该菌株高密度培养的同时提高了芽孢形成率,为其工业化生产提供支撑。

枯草芽孢杆菌B91产芽孢发酵条件优化

在三角瓶培养条件下,采用单因素实验对枯草芽孢杆菌B91发酵条件装液量、起始p H值及温度进行了优化。在此基础上进行了响应面分析,获得了响应面回归模型,模型拟合良好,确定了菌株B91最佳的产孢发酵条件为装液量44.7 mL、初始pH8.3、温度31.5℃。在最优条件下发酵培养,芽孢浓度为44.89亿±0.29亿/mL,较优化前提高了36.4%。