烟草角斑病菌拮抗细菌筛选及抗菌活性物质研究

研究从黑龙江省健康烟草植株及其根际土壤和海南三亚采集的20种杂草中分别分离到287和98个细菌分离物，筛选出对烟草角斑病菌有拮抗活性的菌株22个，其中来自三亚稗草叶片中的一株细菌PA-2的抑菌效果最好，抑菌效果稳定。经形态学、生理生化及分子生物学鉴定， PA-2为铜绿假单胞杆菌（Pseudomonas aeruginosa）。筛选出最佳实验室发酵配方：氮源1%（牛肉膏？？蛋白胨=5？？3），葡萄糖0.3%， NaCl 0.5%， KNO30.3%；最佳培养条件：发酵温度28℃，培养基pH 7.0~7.5，接种量4%，装液量为250 mL三角瓶中装液50 mL。PA-2优化发酵液的田间防效达69.77%，比农用链霉素防效提高24.47%。采用硫酸铵分级沉淀法分离抑菌活性物质，结果表明，在（NH4）2SO4浓度为30%~90%各浓度梯度下均有抑菌活性物质沉淀，其中60%~70%（不含60%）是抑菌活性物质的最适盐析饱和度。抑菌活性物质具有较强的热稳定性、较好的蛋白酶耐受性、较好的耐碱性、较差的耐酸性，能溶于部分有机溶剂，经乙醇、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和丙酮萃取后，该抑菌活性物质抑菌活性下降范围为1.4%~4%。确定该抑菌活性物质为小分子碱性、水溶性脂肽类物质。