活骨灌注液干预骨坏死的病理形态学、血管新生和成骨分化的实验研究

目的探讨活骨灌注液干预骨坏死的病理形态学、血管新生和成骨分化的实验研究。方法雄性新西兰大白兔随机分为空白组、模型组和活骨组。模型组给予甲基强的松龙和马血清联合诱导骨坏死模型,活骨组在模型组基础上给予活骨灌注液髋关节注射。为了控制变量,其余两组动物均给予等量生理盐水髋关节注射。9周时取股骨头行HE染色观察骨细胞情况,股骨头行蛋白免疫印迹检测血管新生标志物VEGF、IGF-1和骨新生标志物BMP2蛋白表达水平。分离提取骨髓间充质干细胞,随机设立空白组、模型组和活骨组,空白组给予成骨诱导条件培养,模型组在空白组基础上给予10;mol/L的地塞米松;活骨组在模型组基础上给予10;(V/V,原液稀释)活骨灌注液。成骨诱导6天时检测培养液上清ALP活性,qPCR检测成骨标志物RUNX2、ALP和OPG mRNA表达水平;成骨诱导14天时,茜素红染色观察并统计矿化结节数量。结果与空白组比较,模型组骨细胞相对比例、VEGF、IGF-1和BMP2蛋白表达量明显降低(P<0.05),而活骨组较模型组骨细胞相对比例、VEGF、IGF-1和BMP2蛋白表达量明显增加(P<0.05);模型组ALP活性、钙化结节数、RUNX2、ALP和OPG mRNA表达水平均较空白组显著降低(P<0.05),活骨组ALP活性、钙化结节数、RUNX2、ALP和OPG mRNA表达水平均较模型组显著增高(P<0.05)。结论活骨灌注液可能通过促进VEGF和IGF-1蛋白表达来促进血管新生,同时通过促进BMP2蛋白表达和RUNX2、ALP和OPG mRNA表达、增加ALP活性和钙化结节数目来促进骨形成,进而对骨坏死起积极治疗作用。