PRP通过NRF2/HO-1通路对LPS诱导的BV2小胶质细胞神经炎症的保护作用

目的 探究富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的BV2细胞炎症反应保护作用与机制。方法 BV2小胶质细胞分成正常对照组、10%PRP对照组、LPS组(LPS诱导)、3%PRP+LPS组(LPS诱导,3%PRP预处理)、5%PRP+LPS组(LPS诱导,5%PRP预处理)和10%PRP+LPS组(LPS诱导,10%PRP预处理),CCK-8测定BV2细胞增殖。共聚焦显微镜测定BV2细胞线粒体膜电位水平,荧光法检测ROS生成情况,Griess法测定NO水平。Western blot检测IL-6、TNF-α、BACH1、GPX4、NRF2和HO-1蛋白表达。此外,用HO-1抑制剂处理BV2小胶质细胞后实验分为正常对照组,LPS组,ZnPP+LPS组,10%PRP+LPS组,ZnPP+LPS+10%PRP,Western blot检测HO-1、IL-6和TNF-α蛋白表达。结果 与正常对照组相比,PRP促进BV2细胞增殖(P<0.01);LPS组线粒体膜电位下降,ROS生成增多,NO、IL-6、TNF-α、BACH1水平升高(P<0.01),而GPX4、NRF2、HO-1表达水平下降(P<0.01)。与LPS组相比,3%PRP+LPS组、5%PRP+LPS组、10%PRP+LPS组BV2细胞增殖活性升高,线粒体膜电位升高;ROS、NO、IL-6、TNF-α、BACH1水平降低(P<0.01);GPX4、NRF2、HO-1在不同浓度PRP(3%、5%、10%)组表达升高(P<0.01)。另外,使用HO-1抑制剂结果显示,与LPS组比较,ZnPP+LPS组IL-6和TNF-α表达增高;与10%PRP+LPS+ZnPP组比较,HO-1抑制剂能够逆转PRP对LPS诱导下BV2细胞IL-6和TNF-α表达的影响(P<0.01)。结论 PRP可以通过激活NRF2/HO-1信号通路来抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症反应。

富血小板血浆通过抑制P53/Caspase-3途径改善脂多糖诱导的BV2细胞凋亡

目的探讨富血小板血浆(PRP)对脂多糖(LPS)诱导的BV2细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法BV2小胶质细胞分成正常组、10%PRP组、LPS组和10%PRP+LPS组。用LPS(1μg/ml)激活后,光学显微镜查看细胞形态变化,TUNEL法测定细胞凋亡水平。Western印迹检测p-磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、p-蛋白激酶B(AKT)、P53、B细胞淋巴瘤(Bcl)-相关X蛋白(Bax)、Bcl-2、Cleaved-胱天蛋白酶(Caspese)-9、Cleaved-Caspese-3和自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ蛋白表达。结果与正常组相比,LPS组BV2细胞因被激活而呈现明显的阿米巴样改变,TUNEL阳性细胞数明显增加(P<0.01)。与LPS组比较,不同浓度PRP(3%、5%、10%)显著降低了BV2细胞的活化和凋亡水平(P<0.01)。与正常组相比,10%PRP组p-PI3K和p-AKT表达明显增加(P<0.01);LPS组P53、Bax、Cleaved-Caspese-9、Cleaved-Caspese-3和LC3Ⅱ表达明显升高,p-PI3K、p-AKT和Bcl-2表达显著下调(P<0.01)。与LPS组比较,10%PRP+LPS组P53、Bax、Cleaved-Caspese-9、Cleaved-caspese-3和LC3Ⅱ表达明显降低,p-PI3K、p-AKT和Bcl-2表达明显升高(P<0.01)。结论PRP能通过P53/Caspase-3途径改善LPS诱导的BV2小胶质细胞凋亡。

都匀毛尖茶浸提液对人肝星状细胞增殖的影响及其机制

目的探讨都匀毛尖茶浸提液对人肝星状细胞增殖的影响及其机制。方法体外培养人肝星状细胞LX-2,分别予0、5、10、20、40、80、160、320、640μg/mL都匀毛尖茶浸提液处理24 h,收集细胞,采用CCK-8法检测细胞活性,选择低于LX-2细胞半数抑制活性(IC50)时都匀毛尖茶浸提液浓度进行后续实验。另取LX-2细胞,随机分为空白对照组、模型组以及茶浸提液低、中、高浓度组和阳性对照组,空白对照组不予任何处理,常规培养26 h;模型组予0.5μg/mL脂多糖(LPS)预处理2 h后常规培养24 h;茶浸提液低、中、高浓度组予0.5μg/mL LPS预处理2 h后分别加入低、中、高浓度都匀毛尖茶浸提液处理24 h;阳性对照组予0.5μg/mL LPS预处理2 h后加入5μmol/L水飞蓟宾处理24 h。收集各组细胞,采用RT-qPCR法检测炎症因子IL-6、TNF-α、COX-2 mRNA表达,采用Western blotting法检测炎症因子IL-6、TNF-α、COX-2及NF-κB信号通路NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκBα、p-IκBα蛋白表达。结果0、5、10、20、40、80、160、320、640μg/mL都匀毛尖茶浸提液呈浓度依赖性抑制LX-2细胞活性(F=60.160,P<0.01)。LX-2细胞IC_(50)时都匀毛尖茶浸提液浓度为170.9μg/mL。5、10、20μg/mL都匀毛尖茶浸提液干预时LX-2细胞活性虽然呈下降趋势,但与0μg/mL都匀毛尖茶浸提液干预时比较P均>0.05。因此,选择40、80、160μg/mL都匀毛尖茶浸提液分别作为茶浸提液低、中、高浓度组进行后续实验。与空白对照组比较,模型组炎症因子IL-6、TNF-α、COX-2 mRNA和蛋白表达显著升高(P均<0.05);与模型组比较,茶浸提液低、中、高浓度组炎症因子IL-6、TNF-α、COX-2 mRNA和蛋白表达显著降低(P均<0.05)。与空白对照组比较,模型组NF-κB信号通路p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达显著升高(P均<0.05);与模型组比较,茶浸提液低、中、高浓度组p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达显著降低(P均<0.05)。结论都匀毛尖茶浸提液能够抑制人肝星状细胞增殖,其机制可能与抑制NF-κB信号通路活化而减少炎症因子产生有关。

脊髓损伤中差异表达基因的生物信息学分析及其在神经炎症细胞内的变化水平研究

目的 使用生物信息学方法筛选参与脊髓损伤发展过程中的差异表达基因(DEGs),并于体外实验探索脂多糖(LPS)激活的BV2细胞DEGs的变化情况,以期为脊髓损伤的治疗提供新靶点。方法 从GEO数据库下载基因芯片数据,并将数据集中的样本分为脊髓损伤Day2组和Day5组,应用R软件处理来自不同数据集样本间的批次效应,对基因芯片的表达数据进行标准化处理,应用R软件分析标准化后的基因表达矩阵,以得到差异基因。将差异基因导入DAVID数据库进行基因本体论(GO)分析,并通过KEGG数据库进行通路分析。应用STRING蛋白数据库构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,并通过Cytoscape软件分析得到10个Hub基因。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析LPS激活后BV2小胶质细胞Hub基因中分值高的前2个基因。结果 与Day2组比较,Day5组有340个DEGs,对其生物信息分析发现,DEGs富集于细胞炎症反应和物质代谢中。通过STRING软件进行模块分析得出10个中心节点,10个基因经KEGG再次分析后发现CXCL10、CCR3、CCR10和CCL2基因显著富集于趋化因子信号通路和细胞因子-细胞因子受体相互作用。体外实验中,与正常组比较,LPS组炎性细胞因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]表达水平及趋化因子CXCL10、CCR9/10和CCL2 mRNA表达量均增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CXCL10、CCR3、CCR10和CCL2趋化因子信号通路和细胞因子-细胞因子受体相互作用等可能与脊髓损伤发展机制关系密切。CXCL10、CCR9/10和CCL2介导了BV2细胞炎症反应。

眩晕宁联合阿司匹林对短暂性脑缺血发作性眩晕患者血液黏度及血脂的影响

目的探讨眩晕宁联合阿司匹林对短暂性脑缺血发作(TIA)性眩晕患者血液黏度及血脂的影响。方法选取2018年5月至2020年4月黔南州人民医院收治的TIA性眩晕患者114例作为研究对象,随机分为单一组和联合组,各57例。单一组予以阿司匹林,联合组在单一组基础上予以眩晕宁治疗,比较两组疗效、血液流变学(血液黏度、全血高切黏度、全血低切黏度)、血脂(总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C))、血压(收缩压、舒张压)水平及不良反应发生情况。结果联合组治疗有效率96.49%较单一组84.21%高(P<0.05);治疗后联合组血液黏度、全血高切黏度、全血低切黏度低于单一组(P<0.05);治疗后联合组TC、LDL-C低于单一组(P<0.05);治疗后联合组舒张压、收缩压低于单一组(P<0.05);联合组不良反应发生率3.51%较单一组14.04%低(P<0.05)。结论采用眩晕宁和阿司匹林联合治疗TIA性眩晕患者能提高疗效,改善血液流变学,稳定血压和血脂,且能显著减少恶心、头晕等不良反应,安全性良好。