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抗菌肽在家蝇胚胎细胞中的表达及活性测定
被引量:
3
1
作者
王灵军
王鑫
+3 位作者
贺莉芳
马元芬
生燕
刘晖
《遵义医学院学报》
2017年第1期53-58,共6页
目的在原核表达家蝇抗菌肽Attacin基因的研究基础上,为进一步提高抗菌肽的活性,利用重组杆状病毒Bacmid-pFastBac^(TM)-Attacin表达系统转染家蝇胚胎细胞系MDEC-07114,对其活性进行探索研究。方法构建pFastBac^(TM) HTA质粒,将重组质粒...
目的在原核表达家蝇抗菌肽Attacin基因的研究基础上,为进一步提高抗菌肽的活性,利用重组杆状病毒Bacmid-pFastBac^(TM)-Attacin表达系统转染家蝇胚胎细胞系MDEC-07114,对其活性进行探索研究。方法构建pFastBac^(TM) HTA质粒,将重组质粒转化Escherichia coli(E.coli)DH10细胞,通过蓝白斑筛选,挑取阳性克隆。构建抗菌肽Attacin的家蝇胚胎细胞真核表达系统。构建Bacmid-pFastBac^(TM)-Attacin表达系统并转染家蝇胚胎细胞,提取培养上清和细胞裂解物粗蛋白,纯化,SDS-PAGE和Western-Blot对蛋白表达情况进行检测、鉴定。结果重组杆状病毒Bacmid DNA成功转染家蝇胚胎细胞,细胞出现分离、停止生长、直径变大等现象;培养上清和细胞裂解物蛋白经SDS-PAGE检测,在22 KD出现了1条特异性条带;通过Western-Blot实验检测目的蛋白在家蝇胚胎细胞中成功表达;通过细菌实验测得其产物有较好的抑菌活性。结论与E.coli BL21(DE3)原核表达系统相比,家蝇胚胎细胞系灵敏度较好,但仍有较大提升空间。
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关键词
抗菌肽
家蝇胚胎细胞
杆状病毒表达载体
真核表达
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职称材料
贵州省不同地理株中华按蚊mtDNA-COⅠ基因遗传多态性分析
2
作者
梁秋果
杨茜
+1 位作者
程金芝
吴家红
《中国媒介生物学及控制杂志》
CAS
北大核心
2023年第1期14-20,共7页
目的了解贵州省不同地理株中华按蚊种群线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(mtDNA-COⅠ)基因序列的多态性,探讨其遗传多样性、遗传分化和种群扩张情况以及遗传距离与地理距离及其相关关系等种群遗传特征。方法于2017年7月-2018年8月采用灯...
目的了解贵州省不同地理株中华按蚊种群线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(mtDNA-COⅠ)基因序列的多态性,探讨其遗传多样性、遗传分化和种群扩张情况以及遗传距离与地理距离及其相关关系等种群遗传特征。方法于2017年7月-2018年8月采用灯诱法在贵州省东、西、南、北、中5个方位的12个采样点采集稻田周边的成蚊,经过形态学确认为中华按蚊后,用试剂盒法提取单只蚊虫DNA样本并对mtDNA-COⅠ基因扩增后测序,测序结果用DNAStar 5.0软件进行拼接,在美国国立生物技术信息中心经BLAST比对进行蚊种的分子鉴定,对确认为中华按蚊mtDNA-COⅠ的基因序列使用DnaSP 5.1软件分析其单倍型多样性、核苷酸多样性,并计算各种群间分化系数(Fst)和基因流(Nm)大小,进行中性检验,以明确各种群之间的分化程度和种群扩张情况。使用MEGA 7.1软件计算各种群间和种群内的遗传距离,判断种群之间的遗传变异程度;根据采样点经纬度计算种群间的地理距离,与对应的遗传距离进行相关性检验,以分析两者的相关关系。结果经分子生物学鉴定,共获得贵州省12个地理株中华按蚊mtDNA-COⅠ基因序列551条,长度为709 bp,其中,碱基(A+T)和(G+C)平均含量分别为68.57%和31.43%,709个位点中保守位点有586个,变异位点有123个,单态位点有189个,简约性信息位点有278个,无插入和缺失位点。551条序列共检出329种单倍型,单倍型多样性指数为0.992,核苷酸多样性为0.01522以上,12个种群的Fst值在0.0008~0.4207,Nm值在0.0861~75.2392,中性检验统计值均为负值,种群内遗传距离范围在0.0071~0.0529,种群间的遗传距离范围在0.0079~0.0522,织金种群和都匀种群内遗传距离较其他种群大;遗传距离和地理距离之间无相关关系,不同种群之间可能存在一定的地理隔离,但种群之间遗传距离的大小与地理距离不相关。结论贵州省不同地理株中华按蚊种群遗传多样性丰富,在历史上经历了区域性的种群扩张,可能存在一定程度的遗传分化和地理隔离,但在一定范围内种群间也有基因交流,呈现出交流与隔离并存的分布格局。
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关键词
中华按蚊
线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因
多态性
种群遗传
原文传递
贵州白纹伊蚊感染沃尔巴克氏体以及WO噬菌体的初步调查
被引量:
4
3
作者
王政艳
梁秋果
+5 位作者
杨茜
陈玲玲
张霞
胡容
程金芝
吴家红
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2020年第1期69-73,77,共6页
目的了解贵州白纹伊蚊种群中沃尔巴克氏体(Wolbachia)以及WO噬菌体的感染情况。方法于2017年在贵州省贵阳市、都匀市、铜仁市、凯里市、遵义市、兴义市、贵安新区、毕节市采用勺舀法采集白纹伊蚊幼虫标本,实验室饲养至成蚊。提取雌蚊基...
目的了解贵州白纹伊蚊种群中沃尔巴克氏体(Wolbachia)以及WO噬菌体的感染情况。方法于2017年在贵州省贵阳市、都匀市、铜仁市、凯里市、遵义市、兴义市、贵安新区、毕节市采用勺舀法采集白纹伊蚊幼虫标本,实验室饲养至成蚊。提取雌蚊基因组DNA,PCR扩增沃尔巴克氏体表面蛋白基因(Wolbachia surface protein,wsp)和WO噬菌体衣壳蛋白的核糖体S7基因(Ribosomal S7 gene,orf7)。分别从8个地区的阳性检测标本中随机选取10个样品进行测序,使用DNAStar 7.0软件分析基因的基本特征;采用MEGA 4.0软件对所获基因序列进行分析比对,并构建系统进化树;采用SPSS 20.0软件对WO噬菌体侵染wAlbA、wAlbB株沃尔巴克氏体的检测结果进行关联性分析。结果贵州省8个地区的白纹伊蚊wAlbA和wAlbB株沃尔巴克氏体超感染率为84.30%(322/382),wAlbA株、wAlbB株沃尔巴克氏体单感染率分别为4.97%(19/382)和3.66%(14/382),WO噬菌体的感染率为76.44%(292/382)。通过测序获得沃尔巴克氏体的wsp序列,其中wAlbA株(379 bp)80条,wAlbB株(501 bp)78条;获得WO噬菌体的orf7序列(263 bp)73条。比对分析显示贵州省8个地区获得所有wAlbA株、wAlbB株的wsp序列、orf7序列的同源性均为100%。确切概率法分析WO噬菌体侵染与wAlbA和wAlbB株沃尔巴克氏体超感染有关联性(P<0.05)。结论贵州白纹伊蚊种群普遍感染WO噬菌体和沃尔巴克氏体,且以超感染wAlbA和wAlbB株沃尔巴克氏体为主。WO噬菌体主要侵染的对象是超感染wAlbA和wAlbB株的沃尔巴克氏体。
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关键词
白纹伊蚊
沃尔巴克氏体
WO噬菌体
原文传递
题名
抗菌肽在家蝇胚胎细胞中的表达及活性测定
被引量:
3
1
作者
王灵军
王鑫
贺莉芳
马元芬
生燕
刘晖
机构
遵义
医学
院
基础医学
院寄生虫学
教研室
眉山市彭山区人民医院普外科
黔南民族医学高等专科学校基础医学部病原生物学教研室
遵义
医学
院
基础医学
院形态学实验室
出处
《遵义医学院学报》
2017年第1期53-58,共6页
基金
卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室开放课题(NO:WSBKTKT201101)
贵州省教育厅医学昆虫资源开发利用创新团队资助项目(NO:黔合教人才团队字[2014]39)
文摘
目的在原核表达家蝇抗菌肽Attacin基因的研究基础上,为进一步提高抗菌肽的活性,利用重组杆状病毒Bacmid-pFastBac^(TM)-Attacin表达系统转染家蝇胚胎细胞系MDEC-07114,对其活性进行探索研究。方法构建pFastBac^(TM) HTA质粒,将重组质粒转化Escherichia coli(E.coli)DH10细胞,通过蓝白斑筛选,挑取阳性克隆。构建抗菌肽Attacin的家蝇胚胎细胞真核表达系统。构建Bacmid-pFastBac^(TM)-Attacin表达系统并转染家蝇胚胎细胞,提取培养上清和细胞裂解物粗蛋白,纯化,SDS-PAGE和Western-Blot对蛋白表达情况进行检测、鉴定。结果重组杆状病毒Bacmid DNA成功转染家蝇胚胎细胞,细胞出现分离、停止生长、直径变大等现象;培养上清和细胞裂解物蛋白经SDS-PAGE检测,在22 KD出现了1条特异性条带;通过Western-Blot实验检测目的蛋白在家蝇胚胎细胞中成功表达;通过细菌实验测得其产物有较好的抑菌活性。结论与E.coli BL21(DE3)原核表达系统相比,家蝇胚胎细胞系灵敏度较好,但仍有较大提升空间。
关键词
抗菌肽
家蝇胚胎细胞
杆状病毒表达载体
真核表达
Keywords
antibacterial peptide
housefly embryos cells
baculovirus expression vector
eukaryotic expression
分类号
R384.2 [医药卫生—医学寄生虫学]
下载PDF
职称材料
题名
贵州省不同地理株中华按蚊mtDNA-COⅠ基因遗传多态性分析
2
作者
梁秋果
杨茜
程金芝
吴家红
机构
黔南民族医学高等专科学校基础医学部病原生物学教研室
/
黔
南
州人体寄生虫病研究重点实验室
贵州医科大学
基础医学
院现代
病原
生物学
特色重点实验室/人体寄生虫学
教研室
出处
《中国媒介生物学及控制杂志》
CAS
北大核心
2023年第1期14-20,共7页
基金
贵州省科技厅基础平台建设(黔科平台[2012]4006号)
黔南州科技计划项目(黔南科合[2021]26号)。
文摘
目的了解贵州省不同地理株中华按蚊种群线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(mtDNA-COⅠ)基因序列的多态性,探讨其遗传多样性、遗传分化和种群扩张情况以及遗传距离与地理距离及其相关关系等种群遗传特征。方法于2017年7月-2018年8月采用灯诱法在贵州省东、西、南、北、中5个方位的12个采样点采集稻田周边的成蚊,经过形态学确认为中华按蚊后,用试剂盒法提取单只蚊虫DNA样本并对mtDNA-COⅠ基因扩增后测序,测序结果用DNAStar 5.0软件进行拼接,在美国国立生物技术信息中心经BLAST比对进行蚊种的分子鉴定,对确认为中华按蚊mtDNA-COⅠ的基因序列使用DnaSP 5.1软件分析其单倍型多样性、核苷酸多样性,并计算各种群间分化系数(Fst)和基因流(Nm)大小,进行中性检验,以明确各种群之间的分化程度和种群扩张情况。使用MEGA 7.1软件计算各种群间和种群内的遗传距离,判断种群之间的遗传变异程度;根据采样点经纬度计算种群间的地理距离,与对应的遗传距离进行相关性检验,以分析两者的相关关系。结果经分子生物学鉴定,共获得贵州省12个地理株中华按蚊mtDNA-COⅠ基因序列551条,长度为709 bp,其中,碱基(A+T)和(G+C)平均含量分别为68.57%和31.43%,709个位点中保守位点有586个,变异位点有123个,单态位点有189个,简约性信息位点有278个,无插入和缺失位点。551条序列共检出329种单倍型,单倍型多样性指数为0.992,核苷酸多样性为0.01522以上,12个种群的Fst值在0.0008~0.4207,Nm值在0.0861~75.2392,中性检验统计值均为负值,种群内遗传距离范围在0.0071~0.0529,种群间的遗传距离范围在0.0079~0.0522,织金种群和都匀种群内遗传距离较其他种群大;遗传距离和地理距离之间无相关关系,不同种群之间可能存在一定的地理隔离,但种群之间遗传距离的大小与地理距离不相关。结论贵州省不同地理株中华按蚊种群遗传多样性丰富,在历史上经历了区域性的种群扩张,可能存在一定程度的遗传分化和地理隔离,但在一定范围内种群间也有基因交流,呈现出交流与隔离并存的分布格局。
关键词
中华按蚊
线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因
多态性
种群遗传
Keywords
Anopheles sinensis
Mitochondrial DNA cytochrome c oxidase subunitⅠgene
Polymorphism
Population genetics
分类号
R384.1 [医药卫生—医学寄生虫学]
原文传递
题名
贵州白纹伊蚊感染沃尔巴克氏体以及WO噬菌体的初步调查
被引量:
4
3
作者
王政艳
梁秋果
杨茜
陈玲玲
张霞
胡容
程金芝
吴家红
机构
贵州医科大学
基础医学
院现代
病原
生物学
特色重点实验室
贵州医科大学
基础医学
院寄生虫学
教研室
黔南民族医学高等专科学校基础医学部病原生物学教研室
贵州医科大学公共与卫生学院
出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2020年第1期69-73,77,共6页
基金
国家自然科学基金项目(No.81760374,81260260)。
文摘
目的了解贵州白纹伊蚊种群中沃尔巴克氏体(Wolbachia)以及WO噬菌体的感染情况。方法于2017年在贵州省贵阳市、都匀市、铜仁市、凯里市、遵义市、兴义市、贵安新区、毕节市采用勺舀法采集白纹伊蚊幼虫标本,实验室饲养至成蚊。提取雌蚊基因组DNA,PCR扩增沃尔巴克氏体表面蛋白基因(Wolbachia surface protein,wsp)和WO噬菌体衣壳蛋白的核糖体S7基因(Ribosomal S7 gene,orf7)。分别从8个地区的阳性检测标本中随机选取10个样品进行测序,使用DNAStar 7.0软件分析基因的基本特征;采用MEGA 4.0软件对所获基因序列进行分析比对,并构建系统进化树;采用SPSS 20.0软件对WO噬菌体侵染wAlbA、wAlbB株沃尔巴克氏体的检测结果进行关联性分析。结果贵州省8个地区的白纹伊蚊wAlbA和wAlbB株沃尔巴克氏体超感染率为84.30%(322/382),wAlbA株、wAlbB株沃尔巴克氏体单感染率分别为4.97%(19/382)和3.66%(14/382),WO噬菌体的感染率为76.44%(292/382)。通过测序获得沃尔巴克氏体的wsp序列,其中wAlbA株(379 bp)80条,wAlbB株(501 bp)78条;获得WO噬菌体的orf7序列(263 bp)73条。比对分析显示贵州省8个地区获得所有wAlbA株、wAlbB株的wsp序列、orf7序列的同源性均为100%。确切概率法分析WO噬菌体侵染与wAlbA和wAlbB株沃尔巴克氏体超感染有关联性(P<0.05)。结论贵州白纹伊蚊种群普遍感染WO噬菌体和沃尔巴克氏体,且以超感染wAlbA和wAlbB株沃尔巴克氏体为主。WO噬菌体主要侵染的对象是超感染wAlbA和wAlbB株的沃尔巴克氏体。
关键词
白纹伊蚊
沃尔巴克氏体
WO噬菌体
Keywords
Aedes albopictus
Wolbachia
WO phage
分类号
R384.1 [医药卫生—医学寄生虫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗菌肽在家蝇胚胎细胞中的表达及活性测定
王灵军
王鑫
贺莉芳
马元芬
生燕
刘晖
《遵义医学院学报》
2017
3
下载PDF
职称材料
2
贵州省不同地理株中华按蚊mtDNA-COⅠ基因遗传多态性分析
梁秋果
杨茜
程金芝
吴家红
《中国媒介生物学及控制杂志》
CAS
北大核心
2023
0
原文传递
3
贵州白纹伊蚊感染沃尔巴克氏体以及WO噬菌体的初步调查
王政艳
梁秋果
杨茜
陈玲玲
张霞
胡容
程金芝
吴家红
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2020
4
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