大肠杆菌表达白喉毒素突变体CRM197高密度发酵工艺研究

本文对具氨苄抗性编码白喉毒素突变体CRM197基因质粒的的大肠杆菌BL-21/pET25b的发酵条件进行了研究,获得了CRM197高效表达的最佳条件。在IPTG诱导作用下,CRM197以包含体的形式存在。采用变速补料分批发酵工艺,经10 h发酵菌体收获量可达50 g/L(湿重),目的蛋白表达量约占总蛋白的18%以上。

rhSCF在大肠埃希菌中的高效表达及纯化

干细胞因子（SCF）是一种重要的造血生长因子，它在自体造血干细胞动员、肿瘤放疗化疗的辅助治疗以及其它血液病的治疗上具有良好的应用前景。为了制备高纯度、活性的重组人SCF，将人工合成的SCF的cDNA序列，克隆入原核表达载体pET43．1a中，转化大肠埃希菌BL21（DE3），获得了高效表达菌株。SCF通过诱导表达形成包涵体，包涵体经洗涤、变性和初步纯化后，进行直接稀释复性，复性液经离子交换层析、分子筛层析等分离除去共价二聚体和异构体，获得纯度大于95％的重组人SCF样品，生物学比活性在7．0×10^5U／mg以上。结果表明：建立了有效的rhSCF制备工艺，且产物具有较高的纯度和生物学活性。