蜕膜间充质干细胞免疫调节作用及临床应用研究进展

蜕膜间充质干细胞除了具有间充质干细胞一般表型及分化潜能外,还具有低免疫原性等独特性质,是一种多能基质细胞。蜕膜间充质干细胞不但为妊娠期间胚胎植入提供适宜环境,而且通过表达免疫调控因子与多种免疫细胞相互作用,如T细胞、NK细胞及DC等,发挥其在胚胎植入、免疫耐受建立及正常妊娠维持中的重要作用。目前蜕膜间充质干细胞已经应用于造血干细胞移植、再生治疗等,具有较高的临床应用价值。本文就蜕膜间充质干细胞的来源、特征、功能及临床应用前景等进行综述。

骨髓来源免疫细胞对肿瘤血管生成的调节及临床应用研究进展

近年来研究发现髓系细胞在肿瘤血管生成中发挥关键的调控作用。髓系细胞可以通过多种途径促进血管生成,包括分泌VEGF及不依赖于VEGF的方式,后者参与介导了抗血管生成治疗中肿瘤抵抗性的形成。此外,髓系细胞还限制了放化疗的治疗效果,促进复发。最后,本文初步探讨了其临床应用前景。

上皮性卵巢肿瘤组织中端粒酶活性的表达及与临床病理因素相关性研究

目的:探讨端粒酶在卵巢癌发 生和发展中的作用,及端粒酶活性与临 床病理因素的相关性。方法:应用端粒 重复序列扩增技术(TRAP)检测45例卵 巢上皮性肿瘤及9例正常卵巢组织端粒 酶活性。结果:端粒酶阳性检出率在恶 性和交界性卵巢肿瘤组中分别为 83.33%(25/30)和5/7,差异无统计学意 义,P=0.5963;良性上皮性卵巢肿瘤及 正常卵巢上皮组织中未检测到端粒酶活 性,与前两组之间均差异有统计学意义 P<0.01。端粒酶的表达与临床病理因 素无明显相关性。结论:端粒酶在卵巢 癌发生和发展过程中可能具有重要作 用,并有望作为卵巢上皮性癌基因治疗 的靶点。

罗勒多糖抗卵巢癌侵袭转移的体外实验研究

目的:探讨罗勒多糖抗卵巢癌侵袭转移的作用机制及其肿瘤乏氧微环境对其效应的影响,为临床应用研究提供依据。方法:罗勒多糖分别在常氧(21%O2、5%CO2)和乏氧(1%O2、5%CO2和94%N2)环境中作用于人卵巢癌SKOV3细胞,形态学观察不同氧环境下各组细胞形态差异;Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭运动能力;明胶酶谱法分析各组细胞分泌的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)活性差异;RT-PCR技术检测骨桥蛋白(OPN)mRNA表达水平;免疫细胞化学法观察各组细胞胞内OPN表达情况。结果:与对照组相比,罗勒多糖在常氧和乏氧环境下都能够降低SKOV3细胞的侵袭运动能力,抑制细胞中MMP-2的分泌,抑制人卵巢癌SKOV3细胞中OPN的表达(转录水平、蛋白水平),且乏氧环境下罗勒多糖的上述作用更为显著。结论:低氧显著增强人卵巢癌SKOV3细胞的迁移能力,罗勒多糖可能通过下调骨桥蛋白表达及基质金属蛋白酶-2的分泌,抑制其侵袭运动能力。

罗勒多糖对荷NuTu-19卵巢癌大鼠模型的作用研究

目的:探讨罗勒多糖对荷NuTu-19卵巢癌大鼠模型的作用。方法:建立荷NuTu-19卵巢癌大鼠模型,体内观察罗勒多糖对荷瘤大鼠肿瘤生长及转移行为的影响,取大网膜瘤组织,提取总RNA,经逆转录、荧光标记后与R 20 s大鼠表达谱芯片杂交,经Gene P ix Pro 3.0图像处理软件分析。同时取肿瘤组织,进行常规病理学检测。结果:罗勒多糖处理组肿瘤的数量明显少于对照组,肿瘤体积小于、腹水量显著少于对照组(P<0.05);腹腔脏器转移程度积分与对照组有显著差异(P<0.01);同时采用表达谱芯片技术从药物组肿瘤组织中比较筛选出了268条差异表达基因。结论:罗勒多糖可能是一种抗卵巢癌转移的新型中草药,它对卵巢癌显现的独特效果可能是多个药效靶点综合作用的结果,本研究也显示了表达谱芯片技术在药物效应靶点研究中的优势和价值。

骨桥蛋白及其信号通路对肿瘤侵袭调控的研究进展

骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种分泌型磷酸化糖蛋白,其分子结构中含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)的受体结合序列。OPN主要通过与其受体整合素和CD44相互作用,参与肿瘤转移的多个过程。近年来,骨桥蛋白及其调控肿瘤侵袭与转移的信号通路倍受关注。OPN通过与整合素ανβ3和CD44结合作用,使多种激酶(PI3K、NIK、PLC、PKC和MAPK)磷酸化激活,从而发挥抑制凋亡和激活多种基质降解蛋白酶(uPA和MMPs)的功能,促进肿瘤细胞转移。

卵巢肿瘤患者自然杀伤细胞活化性受体NKG2D与其配体MICA表达的初步研究

目的:研究卵巢癌、良性卵巢肿瘤患者外周血NK细胞表面活化性受体NKG2D的表达及局部组织中相应配体MICA的表达情况,并结合临床病理因素分析探讨宿主NK细胞受体NKG2D在抗卵巢癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法:对4 2例卵巢癌、2 3例良性卵巢肿瘤及2 0例正常妇女,采用流式细胞术检测外周血NK细胞NKG2D的表达状况,RT PCR技术检测在上述部分相应组织标本中MICA的表达。结果:恶性、良性卵巢肿瘤患者及正常人外周血NK细胞NKG2D的表达水平分别为( 94 2 3±6 0 2 ) %、( 98 70±0 98) %、( 98 6 1±1 5 9) % ,恶性组与另两组之间比较,差异有统计学意义(P <0 0 5 ) ;相应配体MICA在卵巢癌组织中的表达率较良性卵巢肿瘤中明显增高,差异有统计学意义(P <0 0 1) ;在卵巢癌病人是否绝经、不同组织类型、分化程度、手术分期及是否淋巴转移等各组临床病理情况下,其表达率未见明显差异(P >0 0 5 )。结论:卵巢恶性肿瘤患者外周血NK细胞活性降低,其活化性受体NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一。NKG2D的配体MICA的基因表达可能与卵巢癌的恶性转化有一定的相关性,卵巢癌的免疫逃逸可能与NKG2D表达下调及其配体MI

卵巢肿瘤患者外周血NK细胞受体NKG2A、NKG2D及NK活性检测的临床意义

通过研究卵巢癌及良性卵巢肿瘤患者外周血NK细胞表面受体的表达情况及NK活性的变化,分析探讨宿主NK细胞受体与肿瘤免疫逃逸的关系及其临床价值。分离受检者外周血单个核细胞,应用MTT法检测NK细胞的细胞毒活性,流式细胞术检测NK细胞受体NKG2D和NKG2A的表达,并结合临床病理因素作比较分析。结果显示,与良性卵巢肿瘤组和正常组相比,卵巢癌患者外周血NK细胞的细胞毒活性降低,NK细胞表面NKG2D的表达水平降低,而NKG2A的表达水平明显升高,其变化与卵巢癌的病情进展有关。此结果表明,卵巢癌患者机体NK细胞杀伤活性下降,NKG2D与NKG2A二者之间的平衡表达可能对NK细胞的功能状态起着重要的调节作用。

妊娠期子宫NK细胞功能的研究进展

目前的研究资料表明妊娠子宫中最主要的淋巴细胞是子宫NK细胞,即uNK细胞,它的表型为CD56brightCD16-,现普遍认为uNK细胞在胚胎的正常生长、分化和植入等过程中发挥了重要作用。文章主要介绍了uNK细胞的独特性及妊娠期激素对uNK细胞的影响,重点论述妊娠期uNK细胞在维持母-胎界面的血管重建及免疫平衡过程中的重要作用以及与病理性妊娠的关系。

妊娠期uNK、pNK细胞NKG2A与NKG2D的表达及其生物学意义的研究

目的:研究妊娠期妇女子宫NK细胞(uNK细胞)与外周血NK细胞(pNK细胞)表面NKG2A和NKG2D及其相应配体的表达,探讨uNK细胞表面NKG2A和NKG2D的不平衡表达与母胎界面所形成的免疫耐受关系。方法:采用流式细胞术检测30例孕6～9周的正常妊娠妇女uNK细胞和pNK细胞NKG2A、NKG2D的表达状况;RTPCR技术检测绒毛膜组织HLAE、MICA的表达。结果:子宫NK细胞NKG2A的表达显著高于外周血NK细胞,二者分别为(97.86±1.75)%与(33.35±10.92)%;子宫NK细胞NKG2D的表达水平与外周血NK细胞相近,分别为(93.21±4.52)%与(97.80±1.72)%,滋养层组织仅检测到HLAEmRNA的表达。结论:妊娠期子宫NK细胞表面高表达抑制性受体NKG2A,同时滋养层组织表达相应的配体HLAE,这可能是维持母胎界面免疫耐受的重要因素。

妊娠子宫微环境中uNK细胞NKG2A和NKG2D及其配体表达的研究

目的:研究妊娠子宫微环境中子宫自然杀伤细胞(uNK细胞)NKG2A和NKG2D及其相应配体的表达,探讨NKG2A与NKG2D的不平衡表达在母胎免疫耐受形成中的作用。方法:选择30例孕6-9周的正常妊娠妇女,分离其新鲜蜕膜组织,除去绒毛,分离蜕膜和外周血单个核细胞,采用流式细胞仪测定NK细胞的数量及NKG2A与NKG2D的表达;采用RT-PCR技术检测滋养层组织NKG2A与NKG2D配体人类白细胞抗原-E(HLA-E)、主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子相关蛋白A(M ICA)mRNA的表达。结果:妊娠子宫蜕膜淋巴细胞中NK细胞约占70%,流式细胞分析的结果显示,子宫自然杀伤细胞NKG2A的表达显著高于外周血NK细胞,分别为97.86%±1.75%与33.35%±10.92%(x-±s),两者差异显著(P<0.05),在滋养层细胞中检测到其配体HLA-E的表达;而与外周血相比,uNK细胞表面NKG2D的表达与之较为相近,分别为93.21%±4.52%与97.80%±1.72%,但两者仍有显著差异(P<0.05)。在滋养层组织未检测到其相应配体M ICA mRNA的表达。结论:蜕膜中的淋巴细胞主要为NK细胞,其免疫学表型与外周血NK细胞有较大的区别,妊娠期子宫自然杀伤细胞表面高表达抑制性受体NKG2A,同时滋养层组织表达相应的配体人类白细胞抗原-E,这可能是维持母胎界面免疫耐受的重要因素。

生物信息学在医学研究中的应用进展

随着高通量技术的出现及其在疾病基因组、蛋白组学研究中的应用,生物信息学在解读基因组、转录组及蛋白质组学分析产生的海量数据中发挥着越来越重要的作用。生物信息学在致病基因寻找、药物有效靶点筛选等医学研究各领域的发展日益深入。现就生物信息学在基础医学、临床医学及药物开发研究中的应用进展进行综述。

OPN在口腔扁平苔藓中的表达及作用初步研究

目的:检测骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)在口腔扁平苔藓(Orallichen planus,OLP)局部粘膜和外周血中的表达水平,探索其在OLP免疫发病机制中的作用。方法:免疫组化法检测OPN在局部粘膜组织的表达;ELISA检测外周血清OPN和白细胞介素12(Interleukin-12,IL-12)的蛋白浓度;分离正常人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),分OPN刺激组和对照组,体外活化72小时,流式细胞学检测淋巴细胞的凋亡率。结果:OPN在OLP患者局部病变粘膜组织的表达较健康对照组明显增强(P<0.01);OPN和IL-12在OLP患者血清中的浓度均明显高于健康对照组(P<0.01),而且二者存在显著正相关(r2=0.6585,P<0.0001);体外活化淋巴细胞的凋亡率,OPN刺激组明显低于对照组(P<0.05)。结论:OPN在OLP局部粘膜和外周血中的表达水平明显升高,并且可以抑制体外活化淋巴细胞的凋亡,提示OPN在OLP的发病发展中可能起着重要的促进作用。

生物信息学在新基因HCA520研究中的作用

利用生物信息学对新基因HCA5 2 0的基因和蛋白序列进行分析 ,探讨生物信息学在新基因研究中的作用。以人类基因组数据库为基础 ,利用电子PCR和SAGE对HCA5 2 0进行染色体定位和组织表达分布分析 ;BLAST程序进行HCA5 2 0的基因结构分析和相似序列搜索 ;ORFfinder和GeneRunner3.0 5程序对HCA5 2 0编码蛋白进行序列预测和功能分析。RT PCR检测HCA5 2 0的组织表达谱。通过以上分析得出HCA5 2 0的全长cDNA为 2 396bp ,定位于染色体 16 p12 .2 ,其最长的开放读码框架为 5 91bp ,编码 196个氨基酸。编码氨基酸含有典型的EF hand保守序列 ,与CHP具有很高的同源性 ,为一胞内蛋白。在多种组织中有表达。提示HCA5 2 0可能是新的钙离子结合蛋白家族成员 ,可能通过调节Na+ /H+ 交换子的活性影响细胞的生物学功能。

骨形成蛋白-2基因转染对成纤维细胞表型影响的实验研究

目的探讨腺病毒载体介导的骨形成蛋白-2(Ad-BMP-2)基因转染人胚肺成纤维细胞(HELFs)后,对HELFs的表型特别是矿化能力的影响。方法原代培养HELFs,并用Ad-BMP-2进行转染。观察转染前后HELFs的形态学变化;用四唑盐比色法、碱性磷酸酶染色、蛋白印迹以及体外矿化实验,检测转染BMP-2基因后HELFs增殖活性、碱性磷酸酶活性、BMP-2蛋白表达和矿化能力的变化。结果HELFs经Ad-BMP-2转染后,胞体变大,由单一细长梭形转变为多种形态,由单层生长变为复层生长;转染后HELFs增殖受到明显抑制;碱性磷酸酶染色见大部分细胞呈现阳性反应;蛋白印迹检测到明显的BMP-2蛋白条带;细胞经茜素红S染色后出现桔红色的矿化结节。结论经Ad-BMP-2转染后,HELFs向成骨细胞表型转变,具有了矿化能力。

MMP-25在早孕绒毛和蜕膜中的表达及意义的研究

目的研究基质金属蛋白酶-25(matrix metalloproteinase-25,MMP-25)在正常早期妊娠和自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达特点,探讨其在胚胎植入中的作用及其与自然流产的关系。方法采用半定量RT-PCR和免疫组化法检测60例正常早期妊娠和40例自然流产患者绒毛及蜕膜组织中MMP-25mRNA及蛋白的表达。结果①MMP-25mRNA在正常早期妊娠的绒毛及蜕膜组织中均有表达,且绒毛组织中MMP-25mRNA表达水平随妊娠周数的增加逐渐上升,各孕周组间相比差异有统计学意义(P<0.05)。自然流产组绒毛及蜕膜组织中MMP-25mRNA的表达明显低于正常妊娠组(P<0.05)。②正常妊娠组的绒毛组织中,MMP-25主要定位于细胞滋养细胞和合体滋养细胞,并且随妊娠周数增加表达逐渐增强,与RT-PCR结果吻合;自然流产组仅在合体滋养细胞中有表达,两组平均光密度分别为0.21±0.02和0.13±0.04,差异有统计学意义(P<0.05)。蜕膜组织中MMP-25主要在腺上皮细胞表达,自然流产组的表达微弱,两组平均光密度分别为0.25±0.13和0.21±0.12,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MMP-25表达变化与滋养细胞浸润能力相吻合,且蜕膜组织中呈阳性表达,推测其参与胚胎植入及胎盘形成过程中滋养细胞浸润活性调控及子宫内膜组织重构;自然流产患者MMP-25表达水平降低,造成滋养细胞浸润能力下降,可能与自然流产的发生有关。

妊娠期uNK细胞与pNK细胞的生物学特性研究

目的:研究妊娠期子宫NK细胞(uNK细胞)与外周血NK细胞(pNK细胞)的生物学特性,比较两者在生理学功能上的差异。方法:用免疫磁珠(MACS)技术分离并纯化pNK细胞与uNK细胞,流式细胞仪检测其纯度,MTT法检测两者的杀伤功能与增殖活性,RT-PCR技术检测uNK细胞与pNK细胞趋化、侵袭、促血管形成等生物学活性。结果:通过MACS技术可得到纯度较高的NK细胞,pNK细胞对K562的杀伤活性高于uNK细胞,但其增殖活性较uNK细胞低。uNK细胞与pNK细胞均能分泌一些血源性生长因子,并能表达某些趋化因子受体,其中PIGF及AngⅡmRNA仅在uNKcells检测到。结论:uNK细胞的功能与pNK细胞相比具有某些独特性,这可能是由于妊娠子宫独特的微环境所致。

腺苷及腺苷受体与败血症关系的研究进展

败血症是人体免疫系统对感染产生的全身性炎性反应,反应过度可引起休克及多器官衰竭现象产生,最后导致死亡。腺苷是一种嘌呤核苷,能通过其细胞表面的相应受体调控机体的炎性免疫应答的强度,并与多种免疫细胞炎性介质的释放有关。研究发现,腺苷及其受体通过调控炎性免疫应答在败血症的发生及发展中起重要作用,对其作用机制的揭示将为败血症的防治提供新的策略。

子宫NK细胞与妊娠关系的研究

子宫NK(uNK)细胞是妊娠子宫最主要的淋巴细胞,它参与了母胎界面免疫平衡的维持。本文简要介绍了uNK细胞的来源、分化和分布特征,重点论述了uNK细胞受体库的组成、功能以及与妊娠的关系。