骨成型蛋白-4参与糖尿病心肌病“高糖记忆”现象的机制

目的 研究骨成型蛋白-4(BMP4)在糖尿病心肌病(DCM)“高糖记忆”中的作用。方法 体外实验:原代培养C57BL/6小鼠乳鼠心肌细胞,随机分为正常浓度葡萄糖组(Normal glucose,NG)、高浓度葡萄糖组(High glucose,HG)、“高糖记忆”组(HGNG),分别采用NG(5.6 mM)、HG(33 mM)、HG培养4 d+NG培养4 d,每组均培养8 d。培养结束后采用Western Blotting(WB)法检测凋亡蛋白Caspase-3及BMP4在DCM心肌细胞中的表达情况。以BMPs受体抑制剂DMH1作用于DCM“高糖记忆”模型细胞,观察Caspase-3及BMP4表达变化。体内实验:注射链脲佐菌素(50 mg/kg)连续5 d建立糖尿病C57BL/6小鼠模型,每日给予二甲双胍(Metformin,MET,320 mg/kg)灌胃治疗,连续给药8周,血糖仪检测血糖、WB法检测caspase-3及BMP4在小鼠心脏组织中表达情况。结果 在HG组中,HG可明显诱导心肌细胞BMP4蛋白表达,与NG组比较差异显著(P<0.01);DCM“高糖记忆”模型(HGNG组)心肌细胞BMP4蛋白表达显著升高,与NG组比较差异显著(P<0.01),与HG组比较无统计学差异(P>0.05)。DMH1可明显抑制DCM“高糖记忆”模型细胞中BMP4及Caspase-3蛋白表达(P<0.01)。MET可降低糖尿病小鼠血糖及心体比指数,抑制Caspase-3蛋白表达(P<0.01),但并不抑制BMP4蛋白表达。结论 BMP4是产生DCM“高糖记忆”现象的机制之一,BMPs受体抑制剂DMH1改善DCM“高糖记忆”引起的心肌细胞损伤。

左归丸对围绝经期抑郁症模型小鼠海马组织结构的影响

目的:探讨左归丸对围绝经期抑郁症模型小鼠行为的影响和神经机制。方法:清洁级昆明小鼠按随机数字表法分为假手术组、围绝经期抑郁症模型组、氟西汀+雌激素组、左归丸低、中、高剂量组,每组10只。采用双侧卵巢切除(OVX)联合慢性不可预知性温和应激(CUMS)法制备围绝经期抑郁症小鼠模型,评价各组小鼠行为学变化。尼氏染色法观察海马CA1区神经元形态学变化,TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡,Western Blot法检测海马组织Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:左归丸低、中、高剂量治疗后,可改善围绝经期抑郁症模型小鼠抑郁样行为,表现为提高自发活动及探索活动能力、减少行为绝望程度、增加体质量;可减轻海马CA1区神经元损伤,减少海马神经元凋亡,增加海马组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达,减少Bax表达(P <0. 05)。结论:左归丸通过减轻小鼠海马组织神经元损伤、减少神经元凋亡而发挥抗围绝经期抑郁症作用。

岩大戟内酯A和岩大戟内酯B通过Akt信号通路影响MCF-7细胞的增殖和凋亡

观察岩大戟内酯A(Jolkinolide A,JA)和岩大戟内酯B(Jolkinolide B,JB)二萜类单体对MSC-7乳腺癌细胞的增殖、凋亡影响,并分析JA或JB的作用机制。若分别用40、60、80μg/m L浓度的JA(或JB)刺激MCF-7细胞,则为不同浓度的JA刺激组或JB刺激组,正常培养的MCF-7为对照组。分别用CCK-8细胞增殖实验检测JA刺激组或JB刺激组的细胞增殖OD值,Western Blot实验检测JA刺激组或JB刺激组MCF-7细胞中Caspase 9蛋白表达,Annexin V-FITC/PI双染检测MCF-7细胞凋亡,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测JA刺激组或JB刺激组细胞中Akt、STAT3蛋白的含量。结果发现,与40、60、80μg/m L的JA刺激组MCF-7细胞分别相比,相应浓度JB刺激组的MCF-7细胞增殖OD值均明显降低,但是JB刺激组MCF-7细胞的Caspase 9蛋白相对吸光度、凋亡率显著升高;相对于40、60、80μg/m L JA刺激组,相应浓度的JB-刺激组MCF-7细胞上清液中的VEGF含量分别均降低,相应浓度JB刺激组MCF-7细胞的Akt、STAT3蛋白表达均降低。实验结果表明:岩大戟内酯B明显地通过抑制Akt-STAT3信号通路而抑制MCF-7细胞增殖,促进MCF-7凋亡。

岩大戟内酯A下调T47D细胞分泌VEGF而抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖和迁移

目的阐明岩大戟内酯A(JA)刺激的T47D细胞上清液对人脐静脉血管内皮细胞作用效果和机制。方法分别收集20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml浓度JA刺激的T47D细胞上清液为条件培养基(CM),以各组CM分别培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为相应浓度的条件培养基组。利用CCK-8实验观察各组T47D细胞和HUVEC的OD值;细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验观察各组HUVEC迁移的变化;ELISA和Western blot检测各组T47D细胞Akt、mTOR和VEGF蛋白表达。结果条件培养基组HUVEC细胞OD值、迁移率和细胞划痕面积闭合率均明显下降;各组T47D细胞Akt、mTOR和VEGF蛋白表达显著降低。结论岩大戟内酯A抑制T47D细胞内的Akt-mTOR信号通路,下调VEGF表达而抑制HUVEC的增殖或迁移。