榆荚仁黄酮对慢性睡眠剥夺小鼠体内抗氧化酶活性及相关基因表达的影响

本试验旨在探究榆荚仁黄酮对慢性睡眠剥夺小鼠的抗氧化作用。将42只4周龄无特定病原体(SPF)级雄性ICR小鼠按体质量随机分为7组,分别为空白对照组、模型对照组、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)对照组、阳性对照组以及榆荚仁黄酮高、中、低浓度组,每组6只,组间体质量差异不显著(P>0.05)。除空白对照组外,其他6组小鼠使用改良多水平台睡眠剥夺法构建慢性睡眠剥夺模型,造模成功后按照如下设计灌胃4周:榆荚仁黄酮低、中、高浓度组分别灌胃30、60和120 mg/(kg BW·d)的榆荚仁黄酮;空白对照组灌胃等量的生理盐水;阳性对照组灌胃300 mg/(kg BW·d)的褪黑素;模型对照组灌胃等量的生理盐水;CMC-Na对照组灌胃等量的0.5%CMC-Na溶液。采用相关试剂盒测定小鼠肝脏、大脑以及十二指肠中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性和总抗氧化能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)含量,实时荧光定量PCR法测定小鼠肝脏、大脑及十二指肠中抗氧化基因SOD-1、SOD-2、GPX-1、GPX-4的mRNA相对表达量。结果显示:高、中、低浓度的榆荚仁黄酮均可显著增强慢性睡眠剥夺小鼠大脑、肝脏、十二指肠中SOD、GPX活性和T-AOC(P<0.05),显著降低大脑、肝脏及十二指肠中MDA含量(P<0.05),显著提高大脑、肝脏及十二指肠中SOD-1、SOD-2、GPX-1、GPX-4的mRNA相对表达量(P<0.05)。综上所述,榆荚仁黄酮可显著提高慢性睡眠剥夺小鼠体内抗氧化酶的活性及相关基因表达,减轻慢性睡眠剥夺小鼠的氧化应激损伤。

利用CRISPRi技术沉默MRP1基因增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性

目的:采用CRISPRi技术沉默人肺癌A549/DDP细胞MRP1基因表达,观察细胞对顺铂敏感性的变化。方法:采用生物信息学软件分析MRP1启动子序列,设计合成3对sgRNA干扰片段,定向克隆到pSPgRNA载体中,构建靶向MRP1的干扰表达载体,分别与dCas9表达载体共转染A549/DDP细胞。实验共分为5组,分别为A549/DDP细胞组,Scrambled组,sgRNA-MRP1-1组,sgRNA-MRP1-2组和sgRNA-MRP1-3组,每组设置3个复孔,处理48 h后进行后续实验。通过qRT-PCR和Western blot检测MRP1 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞对药物的敏感性,激光共聚焦显微镜下观察细胞的形态变化。结果:成功构建了sgRNA-MRP1-1、sgRNA-MRP1-2和sgRNA-MRP1-33种干扰载体,分别与dCas9表达载体共转染A549/DDP细胞后,均能显著降低细胞MRP1基因表达(P<0.01),其中sgRNA-MRP1-2干扰效果最好,MRP1 mRNA水平降低了72%,蛋白水平降低了53%。将sgRNA-MRP1-2转染细胞后,细胞对顺铂的敏感性显著增加,IC值由74.26±3.71降低至34.29±2.51,细胞形态由梭形变为椭圆形,染色质高度凝聚、边缘化,产生凋亡小体。结论:成功构建3种靶向MRP1的干扰表达载体,均能有效沉默A549/DDP细胞中MRP1基因表达,可增强细胞对顺铂的敏感性。

CRISPRi技术沉默MRP1基因表达增强A549/DDP细胞对TSN的敏感性

利用CRISPRi技术构建靶向MRP1的干扰载体,采用生物信息学分析MRP1的启动子序列,设计并合成3对sgRNA干扰片段,构建3种靶向MRP1的干扰表达载体,分别转染A549和A549/DDP细胞后,通过qRT-PCR和Western blot方法检测MRP1 mRNA和蛋白的表达情况,MTT法检测细胞对川楝素的敏感性,激光共聚焦显微镜下观察细胞的形态学变化.结果表明,基因测序证实成功构建了3种干扰载体,分别转染干扰载体至A549/DDP细胞48 h后MRP1 RNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),其中sgRNA-MRP1-2干扰效果最好;将sgRNA-MRP1-2转染并使用60 nmol/L川楝素处理后,细胞对川楝素的敏感性显著增加,IC50值显著降低(P<0.01),细胞形态由梭形变为椭圆形,染色质高度凝聚、边缘化.

光捕获叶绿素a/b结合蛋白基因在植物逆境胁迫中的研究进展

光合作用是植物最基本的生命活动之一,逆境胁迫可通过影响光合作用抑制植物生长.光捕获叶绿素a/b结合蛋白(light-harvesting chlorophyll a/b-binding proteins,Lhc)是光合作用中的一个重要成员,有大量研究表明,Lhcs及其编码基因在植物的抗逆性方面起到了不可忽视的作用,如在干旱胁迫下使抗氧化酶活性增加,通过激活脱落酸信号通路来促进耐寒性,在不同的逆境胁迫下通过表达量上调或者下调影响相关功能的蛋白质以达到最终的抗逆效果.因此,Lhc基因对于植物的生长乃至生存具有重要的意义.对近年来Lhc基因在分类、功能以及在环境胁迫中的作用等方面的研究结果进行概括总结,为进一步研究Lhc基因提供理论基础.

采收期对紫花苜蓿生长和营养特性的影响

以紫花苜蓿“龙牧801”植株为实验材料,对采集的5~9月份植株进行生长指标、营养成分测定和变化规律分析,并利用隶属函数法对各指标变化进行综合评价.结果表明,随着苜蓿植株生长周期的延长,苜蓿生长指标中的株高逐渐增加,鲜质量和干质量呈现先增加后降低的变化趋势,鲜干比逐渐降低;不同采收期苜蓿的粗纤维、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分含量随着苜蓿采收月份的增加呈现先增加后降低的变化趋势,磷和钾含量呈现降低的变化趋势.应用隶属函数法对10项指标变化进行综合评价,隶属函数值大小为7月份>8月份>6月份>5月份>9月份,7月份苜蓿生长和营养指标的隶属函数值最高,为苜蓿刈割进行青贮的最适时期.

小鼠肌肉损伤修复不同时间内miR-206及其靶基因PAX7的变化规律

为研究小鼠肌肉损伤修复不同时间内miR-206及其靶基因PAX7的变化规律,以雄性8周龄昆明鼠为实验对象,利用盐酸布比卡因注射小鼠胫骨前肌制备肌肉损伤及修复模型,通过qRT-PCR技术检测肌肉组织中PAX7 mRNA和miR-206表达,利用Western-blot技术检测PAX7蛋白质表达变化水平.结果表明,与对照组相比,注射盐酸布比卡因后,在修复4~8 h小鼠肌肉组织中,miR-206表达逐渐降低.随着时间的延长,在修复24~72 h范围内,miR-206表达量逐渐增高.生物信息学预测发现,PAX7是miR-206调控的靶基因.检测小鼠肌肉损伤修复过程中PAX7表达发现,在肌肉修复4~8 h PAX7基因表达水平逐渐升高;而在修复24~72 h范围内其表达水平显著下降.由此可见,在小鼠肌肉修复过程中,PAX7基因表达先升高,可以满足损伤修复时骨骼肌卫星细胞的激活及增殖所需,随着修复时间的延长,miR-206的高表达可加快肌肉修复进程.研究结果可为miR-206和PAX7在肌肉损伤修复中的作用提供实验基础.

RSL3对胰腺癌细胞中TRIM2基因表达的影响

利用不同浓度铁死亡诱导剂RSL3作用于人胰腺癌细胞PANC-1,以探究RSL3对胰腺癌中癌基因TRIM2表达的影响.利用MTT,光学显微镜拍照,qRT-PCT以及Western Blot等检测手段,分析细胞的存活率以及TRIM2基因表达的变化.随着RSL3浓度的增加,PANC-1细胞的存活率降低,呈现剂量依赖性,RSL3的半致死浓度为4.73μmol·L^(-1);与对照组细胞相比较,细胞中加入半致死浓度的RSL3后,细胞存活率降低了50%,光学显微镜下细胞形态基本丧失;而与对照组相比,在细胞中同时加入RSL3和Fer-1后,对细胞的存活率基本没有影响,光学显微镜下细胞边界清楚.与对照组细胞相比,RSL3作用24 h后的细胞中,TRIM2基因的表达在mRNA水平以及蛋白质水平都被抑制,但是与对照组相比较,细胞中同时加入RSL3和Fer-1后,TRIM2基因的表达被恢复.铁死亡诱导剂RSL3可以抑制癌基因TRIM2的表达.

普通高校生物师范生和教育硕士教学实践能力调查分析

采用问卷调查法,针对生物本科师范生及教育硕士的教学实践能力进行调查和分析,对生物本科生和生物学教育硕士在教育实习期间的教学能力、实验技能、专业知识等方面进行对比分析.根据研究结果提出了几点思考,以期为师范院校在生物专业师范生及教育硕士培养方面提供参考.

高中生物教学中渗透职业生涯规划的实践教学分析

从职业生涯规划的角度审视高中生物教学实践,明确高中生物教学渗透职业生涯规划的必要性,并结合高中生物学教材的职业生涯规划内容,通过3个典型教学案例创造问题情境,在生物教学和实践活动中教师向学生渗透职业生涯规划,使职业生涯规划能力的培养与生物学知识更好地融合.

高中生物教学中结构与功能生命观形成分析

生命观念为生物学科素养之一,通过挖掘高中生物教材中的生命观念教学内容和对典型案例进行结构与功能生命观念渗透的分析,明确教材体现的生命观念,并在生物课程学习过程中逐渐形成结构与功能生命观念,有助于培育学生的生命观念和提高学生的生物学科核心素养.

普通高中生物教学中渗透职业生涯规划教育

职业规划主要是为学生提供有效的安排,以确定未来的最佳职业目标,高中生需要做出合理的职业规划.但在普通高中生涯规划教育中,存在学校重视程度不够,父母指导能力有限,学生自我理解不足等问题.因此,在普通高中生物教学中通过教材资源的挖掘,组织生涯规划研学活动等渗透职业生涯规划教育,对高中生做好职业生涯规划有着重要的意义.

贵州省少数民族地区A县高中生物教师探究式教学应用现状调查与分析

对少数民族地区高中生物教师探究式教学应用现状进行调查,分析该地区生物教师探究式教学应用现状和存在的问题,并针对A县高中生物教师探究式教学应用提出对策,对少数民族地区高中生物教学中探究式教学的应用具有一定的意义.

中学生物教学中渗透职业生涯规划教育的调查与分析

初中阶段生物学科课程学习渗透职业生涯规划教育的研究极其匮乏,为明确初中阶段学生对于职业生涯规划教育的重要性,以齐齐哈尔讷河市2所初中的学生为调查对象,采用问卷调查法对初中生物教学中渗透职业生涯规划教育的现状进行调查与分析.调查显示,学生对职业知识与技能要求方面的信息关注度最高,需要通过生物课程学习了解更多与生物学相关的职业信息,以便通过生物课程的学习对学生未来的职业规划提供参考.

ARCS动机设计模式在细胞生物学教学中的应用——以物质的跨膜运输为例

细胞生物学课程是生物技术专业的专业基础必修课,学习动机的激发在细胞生物学课程学习中起到至关重要的作用,是提高生物技术专业本科生学习兴趣的关键.ARCS动机设计模式说明影响学生学习动机的因素主要有4种,即注意、切身性、自信心和满意度.结合动机设计模式中的4个因素,提出了物质的跨膜运输的教学策略,最终达到增强本科生对细胞生物学学习动机的目标,提升课程的教学效果.

白花蛇舌草对人胃癌细胞MNK-45线粒体膜电位及凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨白花蛇舌草(注射液)对人胃癌细胞MNK-45线粒体膜电位及凋亡相关基因表达的影响。方法:将人胃癌细胞MNK-45分成4组,每组设置3个复孔,对照组为未加入白花蛇舌草的MNK-45细胞,3组实验组分别加入终浓度为20、30、40μg/ml白花蛇舌草的MNK-45细胞,各组在5%的CO2培养箱中孵育48 h后,利用激光共聚焦显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测线粒体膜电位,qRT-PCR检测Cytochrome C(Cyt c)、caspase3和caspase9基因的表达变化,Western blot检测Cytochrome C(Cyt c)、caspase3和caspase9蛋白的表达变化。结果:与对照组相比,终浓度为20、30、40μg/ml的各白花蛇舌草处理组,其MNK-45细胞的线粒体膜电位均明显降低(P<0.01),Cyt c、caspase3和caspase9的基因表达均明显上调(P<0.01)、蛋白表达也均显著升高(P<0.05或P<0.01),40μg/ml的白花蛇舌草处理组的表现最佳。结论:在终浓度为20~40μg/ml的范围内,白花蛇舌草能够降低人胃癌MNK-45细胞线粒体膜电位,诱导细胞凋亡,并可上调Cyt c、caspase3和caspase9基因表达。

混合苏打盐碱胁迫对苜蓿幼苗叶片可溶性蛋白和酶活性的影响

以苜蓿幼苗叶片为材料,对其进行50,100,150,200,250 mmol·L-1混合苏打盐碱胁迫,分析苏打盐碱胁迫对苜蓿幼苗叶片可溶性蛋白和5种酶活性的变化,并利用隶属函数法综合分析苜蓿幼苗适宜的模拟混合苏打盐碱浓度.结果表明,随着混合苏打盐碱浓度增加,幼苗叶片中可溶性蛋白含量、苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶活性呈先升后降的趋势,过氧化氢酶和抗坏血酸过氧化物酶活性呈逐渐上升的趋势,150 mmol·L-1混合苏打盐碱浓度为LM807幼苗模拟最适处理浓度.

温度驯化对树麻雀糖原含量及脱支酶活性影响

为了研究温度驯化对树麻雀糖原含量及脱支酶活性的影响,将野外捕获的树麻雀按体质量随机分为高温组(35℃)、低温组(5℃)和对照组(25℃),驯化4周,探讨不同温度对树麻雀体质量、器官质量、基础代谢率、体脂质量分数(索氏抽提法)、糖原含量(硫酸蒽酮法)和脱支酶活性等生理生化指标的影响.结果表明,(1)低温组随着驯化的进行,体质量逐渐下降,至驯化结束共下降0.80g,与对照组比较差异极显著(p<0.01);而高温组的体质量随着驯化的进行逐渐上升,驯化结束后共增长了0.60g,与对照组比较差异极显著(p<0.01).(2)高温组的基础代谢率逐渐降低,在驯化0~1周内基础代谢率急剧下降,第4周驯化结束时与初始相比减小了0.39mLO2/(g·h),和对照组相较差异极显著(p<0.01);低温组的基础代谢率逐渐增高,在驯化1~3周内基础代谢率大幅增加,第4周驯化结束时与初始相比增加了0.51mLO2/(g·h),与对照组比较差异极显著(p<0.01).(3)低温组体脂质量分数比对照组低3.17%,高温组体脂质量分数比对照组高1.46%,3组间的差异极显著(p<0.01).(4)3组间肌肉内脱支酶活性均无显著性差异(p>0.05);而肝脏内脱支酶活性低温组与高温组差异极显著(p<0.01).(5)低温组、高温组与对照组比较肌糖原含量差异均极显著(p<0.01);3组间肝糖原含量差异均极显著(p<0.01).(6)高温组和低温组肾、胰、脾的干质量与对照组无显著性差异(p>0.05).揭示温度是影响树麻雀产热特征性变化的一个主要环境因素,高温环境下,树麻雀通过降低代谢率和对食物的消化吸收速率,降低体内脱支酶活性来减少能量耗费,以适应环境温度的变化.

苏打盐碱胁迫对紫花苜蓿叶片渗透调节和膜透性的影响

为了探究苏打盐碱对紫花苜蓿幼苗叶片渗透调节物质和膜透性物质累积的影响,采用不同浓度的苏打盐碱对紫花苜蓿幼苗进行胁迫处理,测定苜蓿叶片的可溶性糖、可溶性蛋白和脯氨酸、MDA含量以及相对电导率的变化.结果表明,可溶性糖、可溶性蛋白和脯氨酸含量均随苏打盐碱浓度的增加呈先升高后降低的变化趋势,在150mmol·L^(-1)处理组达到最高,MDA含量和相对电导率随苏打盐碱浓度的增加呈逐渐上升的变化趋势,在250mmol·L^(-1)处理组达到最高.隶属函数综合分析,苏打盐碱浓度在150mmol·L^(-1)时,渗透调节物质大量积累,生物膜损伤最小.

CRISPR/Cas9基因编辑技术在C2C12细胞中的研究进展

Cas9蛋白(CRISPR相关蛋白9)源自Ⅱ型CRISPR(簇状有规律间隔的短回文重复序列)细菌免疫系统,其正在成为在各种生物体中工程基因组的强大工具.自该技术创立以来,就被广泛用于将供体DNA靶向插入动物基因组.在C2C12细胞中,CRISPR/Cas9系统参与许多方面研究,包括基因特异性敲除/敲入、基因突变载体的构建以及分子作用机制探索.通过阐述C2C12细胞基因编辑方面的研究进展,对CRISPR/Cas9系统在C2C12细胞中基因编辑方面的应用进行了综述,为各种骨骼肌增殖分化研究提供参考.

小鼠肌肉损伤修复过程中CTPS及细胞周期相关基因表达变化

为研究小鼠肌肉损伤修复过程中CTPS基因及细胞周期相关基因CCND1的变化规律,以8周龄雄性昆明小鼠为实验材料,采用注射盐酸布比卡因制备肌肉损伤及修复模型,通过qRT-PCR,Western Blot检测CTPS和CCND1基因的表达变化.结果表明,与对照组相比,注射盐酸布比卡因2~8 h小鼠肌肉组织中CTPS和CCND1基因表达快速增高,且CTPS表达升高早于CCND1;在修复24~72 h过程中,随着时间的延长CTPS和CCND1基因表达量逐渐增高,CTPS基因48 h后增加变缓,CCND1基因在48 h时达到最高.综上所述,在小鼠肌肉修复72 h时间范围内,CTPS和CCND1基因表达升高以满足细胞增殖的需要.研究结果为明确CTPS在肌肉损伤修复中的作用提供实验基础.