碱性蛋白酶水解时间对玉米谷蛋白理化性质及抗氧化活性的影响

为探究碱性蛋白酶(alcalase)水解对玉米谷蛋白理化性质及抗氧化活性的影响,对不同水解时间获得的玉米谷蛋白水解物的表面疏水性、二硫键含量、热性能、分子质量分布、抗氧化活性等进行了评价。结果表明:碱性蛋白酶水解对玉米谷蛋白的性质有显著影响,分子质量和二硫键含量显著降低(P<0.05),与玉米谷蛋白相比其水解物具有较高的溶解性、起泡性、乳化性和热稳定性。此外,玉米谷蛋白水解产物具有良好的抗氧化性能,当水解时间为150 min时玉米谷蛋白水解物的DPPH自由基清除为(54.46±1.43)%,羟自由基(·OH)清除率为(74.06±1.49)%,Fe^(2+)螯合力为(86.69±1.35)%。

胎衣不下奶牛miRNA-185靶向调控血管内皮生长因子A表达的研究

【目的】通过体内和体外试验检测miRNA-185及血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)在胎衣正常排出和胎衣不下(RFM)奶牛胎盘组织中的差异表达情况及VEGFA在奶牛母体胎盘组织中表达分布,验证及明确miRNA-185和VEGFA与奶牛胎衣不下发生密切相关并存在靶向调节关系,为深入研究miRNA-185在奶牛胎衣不下发生过程中的作用提供理论依据和试验基础。【方法】采用实时荧光定量PCR法检测胎衣正常排出及胎衣不下奶牛母体胎盘组织中miRNA-185及VEGFA基因表达情况,采用荧光原位杂交技术(FISH)检测VEGFA在母体胎盘组织的表达分布及mRNA的差异表达情况;采用双荧光素酶明确miRNA-185与VEGFA的靶向调节关系,采用实时荧光定量PCR及Western blotting检测体外转染miRNA185 mimics、miRNA-185 inhibitor及miRNA-185 NC后VEGFA mRNA及蛋白的差异表达情况。【结果】实时荧光定量PCR结果显示,与胎衣正常排出奶牛相比,胎衣不下奶牛体内miRNA-185及VEGFA的表达水平均极显著下调(P<0.01);荧光原位杂交结果显示,VEGFA mRNA主要在奶牛子宫内膜上皮细胞中表达。VEGFA是miRNA-185的靶向调节蛋白。与阴性对照组相比,转染miRNA-185 mimics后VEGFA的mRNA及蛋白表达水平均极显著下调(P<0.01),转染miRNA-185 inhibitor后VEGFA的mRNA及蛋白表达水平均极显著上调(P<0.01)。【结论】胎衣不下奶牛母体胎盘组织内miRNA-185及VEGFA表达显著降低,VRGFA主要在子宫内膜上皮细胞中表达,miRNA-185可通过靶向调控VEGFA的表达参与奶牛胎衣不下的发生发展。

微生物发酵法纯化功能性大豆低聚糖工艺条件的研究

大豆低聚糖是一种功能性低聚糖,具有双歧杆菌增殖的作用。文章对微生物发酵法纯化功能性大豆低聚糖的工艺条件进行了研究,在不额外添加氮源的情况下,讨论了酵母属中不同的菌株、发酵时间、乳清浓度对纯化大豆低聚糖的影响,并采用HPLC法测定发酵液的糖组分。通过乳清浓度、发酵时间、接种量、转速的L9(34)的正交实验,确定了微生物发酵法纯化大豆低聚糖的最佳工艺条件为:乳清浓度6%、发酵时间5 h、接种量6%、转速150 r/min,在此条件下,蔗糖和葡萄糖已全部被消耗,而棉子糖和水苏糖几乎没有被消耗。

糖基化大豆蛋白体外消化产物的生物活性研究

为了分析体外消化作用及超滤处理对糖基化大豆蛋白抗氧化活性及抑菌活性的影响,分别利用胃蛋白酶及胰蛋白酶酶解糖基化大豆蛋白,在一定的条件下水解度分别达到了4.9%和6.4%,此时可溶性蛋白质含量分别为13.6、15.0 mg/m L;再经过超滤处理得到相对分子质量低于5 000的组分,两种超滤组分的可溶性蛋白质含量分别为9.65、10.65 mg/m L。糖基化大豆蛋白体外消化产物的抑菌活性没有发生显著变化,但是抗氧化活性下降;进一步的超滤处理能够获得具有较高生物活性的组分:胃蛋白酶消化产物超滤组分的亚铁离子螯合率提高了约1倍;胰蛋白酶消化产物超滤组分的还原力及羟基自由基清除率显著提高;同时,胃蛋白酶消化产物超滤组分对大肠杆菌具有抑制活性,而胰蛋白酶消化产物超滤组分则具有较强的抑制作用。结果表明,结合体外消化作用及超滤处理能够显著改善糖基化大豆蛋白的生物活性。

微生物发酵产脂肪酶的研究进展

脂肪酶(EC3.1.1.3)能够催化多种反应的进行,微生物是脂肪酶的主要来源。对微生物发酵产脂肪酶菌株的筛选、发酵条件、酶的分离纯化及脂肪酶基因工程菌株的构建进行综述。

高效液相色谱-串联质谱法测定食品中的乙二胺四乙酸二钠

应用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定了食品中EDTA二钠盐。液态食品(5g)直接加水40mL提取;固态或酱状食品(5g)加水15mL及三氯甲烷20mL匀质后离心,取其上清液,残渣重复提取2次。合并上清液,在提取液中加入三氯化铁溶液超声10min衍生化后,定容至50mL。取样品溶液5mL,经MAX阴离子交换柱净化,用甲酸-甲醇-水(10+50+40)混合液6mL洗脱,洗脱液经80℃吹氮蒸干,用水溶解后进行HPLC-MS/MS分析。EDTA二钠盐的质量浓度在1.0~50.0mg·L-1范围内呈线性。方法的检出限(3S/N)为5mg·kg-1。应用提出的方法分析了4种食品样品并进行加标回收试验,测得回收率在88.3%~96.0%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)均小于10%。

双酶复合两步水解法制备玉米降血糖活性肽及其生物活性

以玉米黄粉为原料,以水解度和α-葡萄糖苷酶抑制率为指标,通过单因素和正交实验得到碱性蛋白酶和风味蛋白酶最适酶解条件,同时优化双酶复合两步水解法最佳酶解顺序。结果表明:首先添加风味蛋白酶,最适酶解温度50℃、pH 6.5、质量分数5.5%、反应时间4 h进行酶解;然后添加碱性蛋白酶,最适酶解温度50℃、pH 8.5、质量分数2%、反应时间2 h酶解完成得到的玉米蛋白水解液α-葡萄糖苷酶抑制率最高,为81.38%;对水解液进行超滤,得到<1 ku组分的α-葡萄糖苷酶抑制率最高,为90.87%,且该组分具有较高的抗氧化活性。

超声对小麦麸皮蛋白结构和功能性质的影响

以小麦麸皮蛋白为研究对象,考察超声时间(5、10、15、30 min)对蛋白结构和功能性质的影响。结果表明:超声对小麦麸皮蛋白结构具有显著修饰作用,10 min的短时间超声处理使蛋白的表面疏水性、内源荧光强度最大,说明超声使蛋白的结构更加舒展柔韧,更多的疏水性基团暴露在界面上,蛋白质功能性质的改善可能与此结构变化有关。与未超声处理蛋白相比,小麦麸皮蛋白的溶解性、乳化性、持水性均显著提高(P<0.05)。随着超声时间的延长,蛋白的起泡性、泡沫稳定性、吸油性和乳化稳定性均呈现先升高后降低的趋势。与未超声处理蛋白相比,超声处理10 min后小麦麸皮蛋白的乳化稳定性和泡沫稳定性分别提高了14.54%、464.95%;超声处理15 min后小麦麸皮蛋白的吸油性和起泡性分别提高了223.78%、225.00%;超声处理30 min后小麦麸皮蛋白的溶解性、乳化性、持水性分别提高了208.55%、66.41%、140.58%。研究表明,超声产生的空化效应对小麦麸皮蛋白具有显著的的解聚作用,促使蛋白分子结构展开,从而改善了小麦麸皮蛋白的功能性质。

体外模拟胃部消化对白芸豆α-淀粉酶抑制剂活性及结构的影响

为探究体外模拟胃部消化对α-淀粉酶抑制剂(α-AI)活性和结构特征的影响,实验以白芸豆为原料制备α-AI,探究体外模拟胃部消化不同时间产物的活性、粒径分布、Zeta电位、二级结构,以及巯基和二硫键含量。白芸豆中α-AI的分子质量约为34 ku,当消化时间大于90 min时产物对α-淀粉酶的抑制活性显著增加(P<0.05),粒径和Zeta电位绝对值显著降低(P<0.05);β-转角相对含量增加,无规则卷曲相对含量降低,总巯基、游离巯基含量均显著降低,二硫键含量显著升高。研究结果表明,体外模拟胃部消化过程中,白芸豆α-AI蛋白分子间的交互和聚集现象不断加剧,部分巯基发生氧化现象形成二硫键,形成稳定的蛋白质构象,能够在体内较好地发挥其抑制α-淀粉酶的活性。

玉米降血糖活性肽结构分析及对糖尿病斑马鱼糖脂代谢的影响

以玉米蛋白粉为原料,经酶解、超滤分级得到不同分子质量分布的玉米降血糖活性肽,分析各超滤组分的粒径、结构,并研究其对糖尿病斑马鱼体内糖脂代谢影响。结果显示,玉米降血糖活性肽随超滤分级(>10 ku、10~5 ku、5~1 ku、<1 ku)平均粒径不断减小,其中<1 ku组分粒径最小,为563.6 nm。二级结构变化为低分子质量组分的β-折叠和无规则卷曲含量增加,β-转角含量则降低,α-折叠无显著变化。各超滤组分使糖尿病模型组斑马鱼的BMI指数降低,并改善其糖脂指标。其中<1 ku组分的玉米降血糖活性肽可使其葡萄糖浓度由0.662 mmol/L降低至0.547 mmol/L,并使其总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白质量分数分别下降34.65%、28.82%和26.62%,高密度胆固醇增加96.67%,均接近正常组的糖脂水平。同时,除葡萄糖含量外,其他指标均受喂养剂量影响。<1 ku组分的玉米降血糖活性肽氨基酸组成分析结果表明,其具有调节血糖作用的亮氨酸和谷氨酸含量较高,占比分别为24.84%和11.09%。

基于黄原胶糖基化改性玉米醇溶蛋白胶囊壁材的性能研究

目的 通过黄原胶糖基化改性玉米醇溶蛋白(Zein)提升胶囊壁材的抗拉强度、阻隔性能及肠溶性。方法 以Zein为原料,黄原胶作为羰基供体,进行干法糖基化反应,得到玉米醇溶蛋白-黄原胶改性产物(zein xanthan gum conjugates,Zein-xg),将其制备成膜,并通过机械性能、阻隔性能等指标研究糖基化改性对膜的性能的影响,考察胶囊壳外观性状、干燥失重、松紧度、炽灼残渣、脆碎度指标,并进行模拟体外释放研究。结果 与玉米醇溶蛋白相比,玉米醇溶蛋白-黄原胶膜的抗拉强度提高至21.59 MPa,提高了3.6倍,水蒸气透过系数提高了34.79%,过氧化值降低19.51%,吸水率由45.70%升高至47.03%,透油系数为0 g·mm/(cm^(2)·d)。在模拟胃液中胶囊壳装载的小分子罗丹明B和大分子牛血清白蛋白3 h累积释放率为0,转至肠液累积释放率分别达到了98.03%和77.14%。结论 改性后的玉米醇溶蛋白-黄原胶膜的机械性能、阻隔性能等均得到显著改善。改性后的胶囊壳外观性状、干燥失重、松紧度、炽灼残渣、脆碎度等指标均符合《中华人民共和国药典(第四部)》(2015版)规定,且属于肠溶性胶囊。

燕麦蛋白理化性质研究

以燕麦为原料,对碱提酸沉法提取的燕麦蛋白进行理化性质研究,分析了燕麦蛋白的溶解性、起泡性质、乳化性质、分子量分布、氨基酸组成和热变性。结果表明,在接近燕麦蛋白等电点处,溶解度最低,随pH增大溶解度逐渐升高。在等电点处,燕麦蛋白的起泡性最差,泡沫稳定性最好;偏离等电点燕麦蛋白的起泡性随着pH的增大先增加后减小,而泡沫稳定性稍有下降。燕麦蛋白的乳化性随pH的升高先减小后增大,在等电点附近乳化性最低;而乳化稳定性的变化规律正好相反。燕麦蛋白分子量分布主要集中在18.4~25.0 kDa和25.0~35.0 kDa 2个区间。燕麦蛋白氨基酸种类齐全,配比合理,是一种优质植物蛋白。运用DSC测出了燕麦蛋白的变性温度为102℃。

玉米胚芽蛋白的分离及物化特性研究

采用碱溶酸沉法提取玉米胚芽分离蛋白,利用氨基酸分析和电泳分析胚芽蛋白的氨基酸组成和有效亚基组成。凝胶层析分离玉米胚芽蛋白组分,并对各组分进行热变性温度及圆二色谱分析。氨基酸分析结果表明,玉米胚芽蛋白中谷氨酸和赖氨酸含量较高,其它氨基酸含量较均衡。还原的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)图主要有九条谱带,其分子量依次为87.988、76.320、69.650、53.649、48.546、38.164、34.337、32.294和24.483 kDa。凝胶层析分离获得两个蛋白组分。差示扫描量热仪(DSC)分析表明分离所得两个组分的干粉变性温度分别为97.37℃和98.95℃,圆二色谱(CD)分析表明两个蛋白组分的二级结构主要为β-折叠和无规卷曲。

湿法糖基化改性玉米醇溶蛋白的物化特性及其在胶囊壳中的应用

利用麦芽糖浆对玉米醇溶蛋白进行湿法糖基化改性,以抗张强度为指标,考察改性后蛋白膜的机械性能,通过SDS-PAGE、DSC、傅里叶红外和扫描电子显微镜等手段考察蛋白改性前后的物化性质。结果表明:改性后蛋白膜较传统的明胶膜和纯玉米醇溶蛋白膜机械性能有较大提高。对SDS-PAGE电泳谱图分析可知玉米醇溶蛋白与麦芽糖浆进行了有效的糖基化接合。经傅里叶红外光谱扫描,可知改性后的玉米醇溶蛋白的化学结构发生了变化。差示量热扫描仪分析表明湿法改性的产物zein-MS膜热变性温度从由为改性前的188. 47℃提高到了206. 87℃,增加了膜的稳定性。扫描电子显微镜发现改性后膜的表面较改性前更加平整,孔洞基本消失。将玉米醇溶蛋白改性产物制成胶囊壳,以常规明胶胶囊壳作对照,参考《中华药典》(2015版)的相关检测指标进行检测,各项指标均合格。

盐类和酶在鹅肉嫩化中的比较研究

主要研究NaCl、CaCl2、Na4P2O7盐类和酶在肉类嫩化中的应用。通过选择NaCl、CaCl2、Na4P2O7盐、不同浓度、不同腌制时间来比较、确定哪种盐在什么样的条件下,处理的鹅肉嫩化最好,并与酶嫩化效果进行比较,为以后把鹅肉加工成经济价值更高的工业产品提供一定的试验依据和技术支持。

生姜汁在鹅腿肉嫩化中的应用研究

以剪切力为指标研究生姜汁对鹅腿肉的嫩化效果,通过单因素实验对生姜汁浓度、pH、处理温度进行了研究,并且进一步通过正交实验选择出最佳嫩化工艺。结果表明:生姜汁对鹅腿肉的嫩化效果十分显著(P<0.01),生姜汁对鹅腿肉嫩化的最佳工艺条件是:生姜汁浓度6%、pH6.0、处理温度为50℃。

壳聚糖修饰对玉米黄色素纳米脂质体稳定性的影响

采用壳聚糖(CS)修饰玉米黄色素纳米脂质体,对其粒径和微观结构进行了测定和分析,并研究了CS修饰对玉米黄色素纳米脂质体稳定性的影响。结果表明:经CS修饰的玉米黄色素纳米脂质体形态圆整、分散均匀,平均粒径为74.37±13.56nm。与未修饰的脂质体相比,CS修饰的玉米黄色素纳米脂质体在光、热和不同p H条件下能有效提高玉米黄色素的保存性能,增强其稳定性。通过CS修饰可明显改善脂质体结构性能进而提高玉米黄色素的稳定性,为玉米黄色素的纳米化改性修饰提供了科学依据。

利用马铃薯渣生产能量饲料菌种选择的研究

通过平板培养和混菌发酵相结合的方法选择发酵马铃薯渣生产能量饲料的最佳菌种。以筛选的单菌株为基础,采用平板点种刺激圈法选育共生良好的配伍菌株,并将已证明共生良好的菌株分别与嗜酸乳杆菌进行共生发酵试验,通过测定发酵产物的蛋白质含量,以确定嗜酸乳酸菌与其他菌种的共生发酵情况。试验结果表明,嗜酸乳杆菌、白地霉、啤酒酵母和热带假丝酵母为发酵马铃薯渣生产能量饲料的最佳菌株。

金属络合法纯化玉米须黄酮工艺研究

黄酮类化合物的纯度是影响黄酮类化合物发挥其生物活性的关键所在。为了寻找一种方便快捷、成本低、效果好且有利于保护黄酮类化合物活性的纯化黄酮的方法,本文以玉米须提取物为研究对象,采用金属络合法研究了玉米须黄酮的纯化工艺,通过单因素试验研究了不同黄酮浓度、金属络合时间、乙酸锌浓度、p H和EDTA用量对纯化效果的影响,并通过正交试验优化得到金属络合法纯化玉米须黄酮的最佳工艺条件为:黄酮浓度为0.045mg/m L,络合时间25min,乙酸锌溶液浓度6.5mmol/L,反应液p H为8.5,解络剂EDTA用量为2.5g/g黄酮。在此纯化条件下,玉米须黄酮纯度由粗提物的3.02%增加到35.32%,提高了10.7倍。实验结果表明,金属络合法是一种简单、纯化效果好、价格低廉的纯化玉米须黄酮的方法,具有实际应用前景。

离子交换色谱在蛋白质分离中的应用

离子交换色谱法是生物工业下游技术领域常用的分离纯化目的产物的手段。从色谱填料、色谱柱的选择和样品处理等方面对离子交换色谱在蛋白质分离纯化中的分离策略进行总结,并列举成功的分离案例。