双氢青蒿素对宫颈癌小鼠放疗的增敏作用观察及机制探讨

目的观察双氢青蒿素(DHA)对宫颈癌小鼠放疗的增敏作用,并探讨其作用机制。方法选取小鼠宫颈癌细胞株U14常规培养、消化传代,取对数生长期U14细胞备用。取50只昆明小鼠,建立宫颈癌小鼠模型,将建模成功的小鼠随机分为模型组、放疗组、低剂量组(Low-dose,L)、中剂量组(Middle-dose,M)、高剂量组(High-dose,H)、DHA组。除模型组和DHA组均给予放疗,其中L组、M组、H组分别取5、10、20 mg/kg小鼠体质量的DHA+0.01 ml/g小鼠体质量的生理盐水混合均匀,DHA组给予5 mg/kg DHA+0.01 ml/g小鼠体质量的生理盐水混合均匀,均给予腹腔注射;放疗组和模型组给予0.01 ml/g小鼠体质量的生理盐水腹腔注射,均于照射前30 min干预。对比各组1周、2周、3周后抑瘤率变化;末次放疗次日将小鼠处死,以苏木精-伊红法(HE)染色观察各组肿瘤组织病理表现;以末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)检测肿瘤组织细胞凋亡率;以荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)信使核糖核酸(mRNA)表达;以蛋白质免疫印迹(WB)检测PI3K、AKT蛋白及磷酸化-AKT(p-AKT)表达,计算p-AKT/AKT。结果共有46只小鼠建模成功;抑瘤率时间、组间、交互作用上差异均有统计学意义,各组抑瘤率均随时间的延长显著升高(P<0.05),L组、M组和H组抑瘤率均高于放疗组和DHA组(P<0.05),M组和H组抑瘤率均高于L组(P<0.05),H组抑瘤率高于M组(P<0.05),放疗组和DHA组差异均无统计学意义;模型组可见肿瘤细胞排列紊乱、大小不均、染色深浅不同,偶见细胞轻度水肿,间质存在少量的炎性细胞浸润;放疗组和DHA组均可见部分肿瘤细胞坏死且细胞呈水肿状态,核固缩,深浅不同,间质有明显水肿;L组可见肿瘤细胞区域性坏死,接近坏死处的肿瘤细胞体积变小,核固缩,有明显的间质水肿,可见炎性细胞浸润;M组可见大片肿瘤细胞坏死,且坏死间隙有轻微液化,边界部分肿瘤细胞崩解为颗粒状间质水肿;H组可见区域性肿瘤细胞坏死,大量肿瘤细胞崩解,且间质有明显水肿;各组细胞凋亡率对比差异有统计学意义,放疗组、L组、M组、H组和DHA组均高于模型组(P<0.05),L组、M组和H组均高于放疗组和DHA组(P<0.05),M组和H组均高于L组(P<0.05),H组高于M组(P<0.05),放疗组和DHA组差异无统计学意义;各组肿瘤组织PI3K mRNA及蛋白、p-AKT/AKT表达对比差异有统计学意义,且放疗组、L组、M组、H组和DHA组均低于模型组(P<0.05),L组、M组和H组均低于放疗组和DHA组(P<0.05),M组和H组均低于L组(P<0.05),H组低于M组(P<0.05),放疗组和DHA组对比差异均无统计学意义,各组AKT mRNA对比差异无统计学意义。结论DHA能够抗宫颈癌,且能够增强宫颈癌小鼠放疗敏感性,促进肿瘤细胞坏死和凋亡,推测与调控PI3K/AKT信号通路,下调PI3K mRNA及蛋白,抑制AKT的磷酸化有关。