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丙型肝炎NS5A基因多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 刘秀财 李耕慧 郭伟华 《中国医药导报》 CAS 2010年第15期20-22,共3页
目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5A蛋白原核表达载体,获得高产量的纯化目的蛋白,并制备其多克隆抗体。方法:应用聚合酶链反应技术,PCR扩增获得NS5A基因,将NS5A基因插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌DH5α提取质粒,验证正确后... 目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5A蛋白原核表达载体,获得高产量的纯化目的蛋白,并制备其多克隆抗体。方法:应用聚合酶链反应技术,PCR扩增获得NS5A基因,将NS5A基因插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌DH5α提取质粒,验证正确后,转化大肠埃希菌BL21中,以IPTG诱导,获得NS5A融合蛋白的可诱导性表达,通过SDS-PAGE电泳、Western blot免疫印迹分析证实融合蛋白表达的特异性。利用Ni+亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。纯化蛋白免疫新西兰兔,利用Western blot和ELISA法对多克隆抗体进行特异性和效价检测。结果:NS5A融合蛋白表达成功,成功获得了融合蛋白及兔抗NS5A多克隆抗体。结论:成功表达NS5A基因融合蛋白,获得高特异性、兔抗NS5A多克隆抗体,为研究NS5A基因的生物学功能提供了重要制剂。 展开更多
关键词 HCV—NS5A基因 原核表达 蛋白纯化
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