纳升级反相液相色谱-串联质谱法分析麦氏弧菌蛋白质组

[目的]较系统地研究分析麦氏弧菌提取蛋白质。[方法]利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和纳升级反相液相色谱-串联质谱(nano-RPLC-MS/MS)法系统分析了来源于美国龙虾的一株麦氏弧菌F5-1提取总蛋白和总蛋白直接酶解产物,并进行数据库检索鉴定蛋白质。纳升级反相液相色谱分析条件为:上样量为5μl,经C18预柱(200μm×0.5 mm,3μm,120)脱盐10 min,再经过Chrom XP C_(18)-CL毛细管柱(75μm×15 cm,3μm,120)分析,2%乙腈(0.1%甲酸)-98%乙腈(0.1%甲酸)梯度洗脱90 min,采用ESI-Q-TOF MS,在IDA采集模式下分析鉴定麦氏弧菌提取总蛋白酶解产物。[结果]直接酶解鉴定到1 538种蛋白质,通过Gene Ontology分析了麦氏弧菌F5-1提取总蛋白的分子功能、生物进程和细胞组分。提取的麦氏弧菌蛋白具有催化、结合、结构分子、转录调节因子等功能活性,其中催化活性的蛋白比例较大,且多为参与代谢进程的相关酶类。[结论]研究可为麦氏弧菌蛋白质组学的深入研究奠定基础。