重组抗VEGF单抗工艺特异性宿主细胞蛋白质残留ELISA检测方法的建立与验证

目的建立重组抗VEGF单抗中CHO宿主细胞蛋白质(HCPs)残留的ELISA检测方法,并对方法进行验证。方法采用空载CHO细胞制备工艺特异HCPs,并进行二维电泳表征;采用二维电泳-Western blot(2D SDS-PAGE/Western blot)法对6种抗CHO HCPs多克隆抗体(C3、C6、C7、AB000103-A、AB000103-C、3G-0016-AF)识别重组抗VEGF单抗工艺特异性HCPs的覆盖率进行测定;选择覆盖率最高的多抗作为检测抗体,建立制品工艺特异性HCPs ELISA检测方法,并对方法的线性、基质干扰、稀释线性、灵敏度、精密度和准确性进行验证;此外对该方法与商业化通用检测方法进行了桥接对比研究。结果制备的工艺特异性HCPs蛋白质谱分布广泛;筛选得到覆盖率为59%的C6兔抗CHO HCPs多抗作为检测抗体,并建立了夹心ELISA检测法;该方法不受原液基质干扰,HCPs标准品在3.33~810 ng/ml浓度范围曲线拟合良好,原液在1~8倍范围内有良好的稀释线性;检测限0.075 ng/ml,定量限20 ng/ml;试验内和试验间变异系数均不超过10%;30、150及300 ng/ml浓度的HCPs标准品的回收率分别为107%、107%和95%;工艺特异性ELISA法测得的结果显著高于商业化通用检测方法。结论建立了重组抗VEGF单抗工艺特异性HCPs ELISA检测方法,该方法具有良好的检出率、灵敏度、精密度、准确性和线性,适用于该制品HCPs残留检测。