真核表达载体pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的构建及其在NIH 3T3细胞株中的表达

目的:构建pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的重组真核表达载体,并在NIH 3T3细胞株中表达。方法:采用DNA重组技术把pBULLET上的CD28-ζcDNA插入到已含anti-CD20scFv/IgGFc/CD80的真核表达载体pLNCX质粒上,转染NIH3T3细胞株,经G418筛选细胞,用RT-PCR、流式细胞术检测目的基因表达情况。结果:经菌落PCR、酶切及一次测序鉴定均证实pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的成功构建;经RT-PCR法,能够从转染的NIH 3T3细胞中扩增出1条与目的基因大小一致的DNA片段,流式细胞术检测显示该目的基因能够在NIH 3T3细胞中表达目的蛋白。结论:重组表达载体pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的构建,并在NIH3T3细胞株中的成功表达。