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一种大规模制备双链RNA的简单方法及其在斑节对虾中的应用
被引量:
3
1
作者
梁艳
Vanvimon Saksamerprome
+1 位作者
Kallaya Sritunyalucksan
黄倢
《水产学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第7期1011-1017,共7页
RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)诱发的特异性沉默目的基因表达的过程,一种大规模制备双链RNA的方法可以便利RNAi技术的应用。以斑节对虾kazal型蛋白激酶抑制剂(KPI)基因为例,详细介绍了一种以体内载体表达大量制备dsRNA(>300nt)的...
RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)诱发的特异性沉默目的基因表达的过程,一种大规模制备双链RNA的方法可以便利RNAi技术的应用。以斑节对虾kazal型蛋白激酶抑制剂(KPI)基因为例,详细介绍了一种以体内载体表达大量制备dsRNA(>300nt)的方法。使用商业载体pGEMT和pDRIVE,以2步克隆法构建含有发夹环(hairpin loop)dsRNA表达载体,转化RNA酶Ⅲ缺陷的大肠杆菌HT115(DE3)进行体内转录制备dsRNA。构建的发夹RNA表达载体含有494bp的正向靶序列和403bp的反向互补靶序列,其中正向靶序列多出的91bp即可成为loop环,而无需再次克隆加入。培养30mL的细菌,即可得到1mg纯化的dsRNA,而其成本仅为使用商业化体外转录试剂盒的四分之一。为评估RNAi效果,按照每1克虾体肌肉注射2μg dsRNA的剂量,在dsRNA注射后0,6,12和24h采集血淋巴,RT-PCR检测KPI mRNA的基因转录水平。与对照组GFP-dsRNA和NaCl注射组相比,KPI-dsRNA注射组可以在24h内沉默血淋巴中的KPI基因。结果表明该方法是可大规模制备长的dsRNA的方法。
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关键词
斑节对虾
RNA干扰
双链RNA
体内转录
大肠杆菌HT115
kazal型蛋白激酶抑制剂
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职称材料
题名
一种大规模制备双链RNA的简单方法及其在斑节对虾中的应用
被引量:
3
1
作者
梁艳
Vanvimon Saksamerprome
Kallaya Sritunyalucksan
黄倢
机构
中国水产科学研究院黄海水产研究所
center of excellence for shrimp molecular biology and biotechnology
National
center
for
Genetic Engineering
and
biotechnology
(BIOTEC)
出处
《水产学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第7期1011-1017,共7页
基金
国家"九七三"项目(2006CB101801)
国家"八六三"高技术研究发展计划(2006AA100312)
+1 种基金
泰国BIOTEC
基本科研业务费专项经费(2060302/2)
文摘
RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)诱发的特异性沉默目的基因表达的过程,一种大规模制备双链RNA的方法可以便利RNAi技术的应用。以斑节对虾kazal型蛋白激酶抑制剂(KPI)基因为例,详细介绍了一种以体内载体表达大量制备dsRNA(>300nt)的方法。使用商业载体pGEMT和pDRIVE,以2步克隆法构建含有发夹环(hairpin loop)dsRNA表达载体,转化RNA酶Ⅲ缺陷的大肠杆菌HT115(DE3)进行体内转录制备dsRNA。构建的发夹RNA表达载体含有494bp的正向靶序列和403bp的反向互补靶序列,其中正向靶序列多出的91bp即可成为loop环,而无需再次克隆加入。培养30mL的细菌,即可得到1mg纯化的dsRNA,而其成本仅为使用商业化体外转录试剂盒的四分之一。为评估RNAi效果,按照每1克虾体肌肉注射2μg dsRNA的剂量,在dsRNA注射后0,6,12和24h采集血淋巴,RT-PCR检测KPI mRNA的基因转录水平。与对照组GFP-dsRNA和NaCl注射组相比,KPI-dsRNA注射组可以在24h内沉默血淋巴中的KPI基因。结果表明该方法是可大规模制备长的dsRNA的方法。
关键词
斑节对虾
RNA干扰
双链RNA
体内转录
大肠杆菌HT115
kazal型蛋白激酶抑制剂
Keywords
Penaeus monodon
RNAi
dsRNA
in vivo transcription
Escherichia coli HT115
kazal proteinase inhibitor
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
S917 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种大规模制备双链RNA的简单方法及其在斑节对虾中的应用
梁艳
Vanvimon Saksamerprome
Kallaya Sritunyalucksan
黄倢
《水产学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
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职称材料
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参考文献
引证文献
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