质膜微区对土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞的影响(英文)

目的评估土拉弗朗西斯菌LVS入侵鼠巨噬细胞过程中质膜微区的作用。方法用电穿孔法将穿梭质粒pFNLTP6 gro-gfp导入土拉弗朗西斯菌LVS。细胞膜用FM4-64染色,结合单抗的微囊蛋白-1用键合了Alexa594荧光素的羊抗鼠二抗显色。用Z轴电动聚焦的荧光显微镜分析土拉弗朗西斯菌LVS感染。用甲基-β-环式糊精干扰富含脂质的胞膜损耗胆固醇,以评估质膜微区的损伤对弗朗西斯菌入侵的影响。菲律平Ⅲ用以检测胆固醇损耗的效果。结果土拉弗朗西斯菌疫苗株可以诱导膜结构域伸出伪足将细菌吸收进入巨噬细胞。质膜微区相关成分微囊蛋白-1与含有弗朗西斯菌的囊泡一同进入宿主。弗朗西斯菌入侵巨噬细胞需要胆固醇丰富的膜结构域。结论胆固醇丰富的质膜微区和微囊蛋白-1在弗朗西斯菌早期进入巨噬细胞期间发挥重要作用。

转铁蛋白受体1表达在弗朗西斯菌入侵巨噬细胞中的作用(英文)

目的评估土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞期间获取铁的影响因素。方法用表达绿色荧光蛋白(GFP)的土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞J774A.1。结合单抗的转铁蛋白受体-1用键合了Alexa594的羊抗鼠二抗显色。用实时定量PCR法检测5个铁代谢相关基因在土拉弗朗西斯菌LVS感染或未感染J774A.1鼠巨噬细胞中的表达。用活的弗朗西斯菌和灭活菌分别感染巨噬细胞,免疫印迹分析比较Tfr1表达水平。用小干扰RNA下调转铁蛋白受体-1的表达,进而用土拉弗朗西斯菌LVS分别感染转铁蛋白受体-1表达下调的细胞和转染无关siRNA的细胞,并进行细菌计数。结果土拉弗朗西斯菌疫苗株可以诱导转铁蛋白受体-1在宿主巨噬细胞中表达。基因表达分析显示土拉弗朗西斯菌LVS随着时间的增加通过诱导转铁蛋白受体1(Tfr1)和铁调节蛋白(Irp1和IRP2)主动获取铁。免疫印迹结果表明小干扰RNA对转铁蛋白受体-1的表达下调了大约75%。细菌入侵试验显示,在感染1h时,转铁蛋白受体-1表达下调的细胞内细菌数量等同于对照(F=1.06,P=0.3265);而在感染24h时,Tfr1下调样本中的细菌数量明显低于对照样本(F=24.12,P=0.0006)。结论在感染早期Tfr1的上调是由翻译后调节介导的,并随着Irp1和IRP2表达的增加而增加。Tfr1表达的增加通过转铁蛋白介导的铁运输扩充了细胞内动态铁池,使弗朗西斯菌易于获取铁。转铁蛋白受体-1的下调不影响细菌与其他膜蛋白的结合而入侵,但抑制细菌在细胞内的增殖。