鸭子α-干扰素基因表达及多样性分析

目的 :采用分子杂交及PCR方法 ,分析鸭α 干扰素基因的表达及多态性。方法 :从鸭外周血分离出的单核细胞在体外经PHA(5 μg/ml)刺激不同时间后 ,提取总RNA。以RT PCR方法检测鸭α 干扰素 (DuIFN α)mRNA表达状况。引物根据最近公布的DuIFN α基因序列设计。从鸭外周血单核细胞中提取的基因组DNA经限制性内切酶BamHI,HindIII,PstI,XbaI消化后 ,以公布的DuIFN α序列为探针 ,采用Southern杂交分析DuIFN α基因的多样性。结果 :在未经PHA刺激的鸭外周血单核细胞 (PBMCs)中 ,未检测到DuIFN α表达 ;PHA刺激 4h后 ,即可检测到DuIFN α表达 ,一直持续到 2 4h。基因组DNA限制性内切酶多态性分析表明 ,PstI酶切后 ,出现片段大小各异的杂交信号 ,提示DuIFN α存在多样性。结论 :鸟类α 干扰素基因与哺乳动物类似 。

鸭IL-2cDNA及基因组序列的初步分析

从鸭外周血分离的单核细胞在体外经PHA (5 μg/ml)刺激 2 0h后 ,提取总RNA及mRNA并通过逆转录制备cDNA。采用最近克隆的鸡白细胞介素 2 (ChIL 2 )cDNA序列为探针对cDNA进行Southernblot杂交 ,以识别鸭白细胞介素 2 (DuIL 2 )特异的cDNA序列。从鸭外周血单核细胞中提取的基因组DNA经限制性内切酶BamHI、EcoRI、XbaI消化后 ,以上述探针进行杂交 ,分析DuIL 2基因组序列。结果表明 ,无论是鸭cDNA或基因组DNA ,经Southern杂交后 ,均得到特异性杂交条带 ,证实ChIL 2与DuIL 2具有较高序列同源性。DuIL 2mRNA表达时形成两种转录子 ,大小分别为 95 9bp、 780bp。同鸡γ 干扰素(ChIFN γ )探针产生的杂交信号比较 ,ChIL 2产生的杂交信号相对较弱 ,推测可能和DuIL 2mRNA在上述条件下拷贝数相对较少以及ChIL 2与DuIL