精子相关抗原6与速激肽1相互作用关系的探讨

目的:构建速激肽1(Tac1)基因真核表达载体并探讨其与精子相关抗原6(SPAG6)之间的相互作用。方法:提取10只昆明雄性小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、睾丸8个组织的RNA,逆转录成c DNA后,用RT-PCR法观察Tac1在各组织中的表达。构建Tac1/p GADT7、Tac1/p EGFP-N2重组质粒,将Tac1/p EGFP-N2转染至CHO和COS-1细胞,采用免疫荧光染色及Western印迹检测TAC1在细胞中的定位和蛋白表达。将Tac1/p GADT7与Spag6/p GBKT7进行酵母双杂交实验,提取酵母蛋白用Western印迹检测TAC1与SPAG6之间是否存在相互作用。结果:Tac1主要在睾丸、脑、心脏中表达。酶切和测序鉴定表明Tac1重组质粒构建成功,酶切鉴定片段390 bp。TAC1单独转染时,定位于CHO细胞的整个胞体,与SPAG6质粒共转染后,TAC1被募集至细胞微管中表达,用Western印迹检测到相对分子质量约为40 000的融合蛋白表达。与SPAG6的酵母双杂交实验显示TACl/SPAG6在缺少3种氨基酸(Leu、Trp、His)的培养板上有菌落生成,经Western印迹证实酵母融合蛋白中含有TAC1和SPAG6。结论:成功构建Tac1重组质粒,并利用该质粒证实了TAC1与SPAG6之间存在相互作用关系。

BC022687基因真核表达质粒的构建及在CHO细胞内的蛋白表达和定位

目的:BC022687可能是调节纤毛形成的蛋白。本研究构建BC022687基因真核表达载体并探讨融合蛋白在细胞内表达及定位。方法:以小鼠睾丸cDNA文库为模板,PCR扩增全长BC022687编码序列,测序后亚克隆至携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的pEGFP-C1真核表达载体中。将构建的重组质粒转染到CHO细胞中,提取细胞蛋白进行Western印迹检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察BC022687/GFP融合蛋白在CHO细胞内定位。结果:翻译BC022687蛋白的cDNA序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小950 bp。Western印迹检测到相对分子质量约为64 000的融合蛋白表达。BC022687/GFP融合蛋白在细胞内定位以细胞质为主,并在中心体、纤毛形成的模板表达。结论:成功构建BC022687全长基因真核表达载体,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。

精子相关抗原6与肿瘤早期诊断的研究进展

精子相关抗原6（SPAG6）为新发现的癌睾丸抗原（cancer-testis antigens, CTA）家族的一员，是一种具有巨大肿瘤早期诊断的前景蛋白。SPAG6基因是1999年Neilson等[1]在用男性不育患者的高滴度抗精子抗体血清来筛选睾丸表达基因文库时克隆出来的。目前发现SPAG6在肿瘤组织中的特异性表达，以及其能引起特异性的体液免疫应答的特点，均符合肿瘤生物标记物的筛选标准。因此该基因可能适用于肿瘤早期诊断。本文就国内研究相对较少的SPAG6的基本特征、功能以及其与肿瘤早期诊断作一下概述。

精子发生和运动相关蛋白的研究新进展

近年来男性不育症的发病率有不断上升趋势，在男性不育的各种原因中，精子发生障碍是一个重要因素，其中遗传因素缺陷导致的精子发生障碍是一个重要机制。男性精子发生是一个复杂的细胞分化过程，受到诸多有序表达基因的调控，其中任何一个基因发生缺失、突变或表达异常都可能引起精子生成障碍，导致男性不育。近年来随着小鼠基因敲除技术的广泛运用，越来越多调节精子发生的基因被发现，据报道目前有超过2300个基因参与。