亚马逊利什曼原虫无鞭毛体的体外培养及其抗原性分析

目的建立亚马逊利什曼原虫无鞭毛体体外培养方法,并用间接免疫荧光法分析其抗原特异性。方法小鼠皮损组织处获得的无鞭毛体(Al)、由前鞭毛体转化来的无鞭毛体(Ap)、J774.G8巨噬细胞来源的无鞭毛体(Aj)置于改良后的Schneider’sDrosophila培养基,pH4.6、33℃条件下培养,取培养物光镜下观察并用间接免疫荧光法分析。结果三种不同来源无鞭毛体体外培养物光镜检查形态相似,均与纯培养获得的无鞭毛体一样。与无鞭毛体特异性蛋白P-8和P-4特异性单克隆抗体进行间接免疫荧光分析显示,三种不同来源的无鞭毛体均出现阳性,且浓度与部位相似。而前鞭毛体与抗P-8单克隆抗体(mAb)染色呈弱阳性反应,与抗P-4单克隆抗体呈阴性反应。相反,GP-46/M-2McAb与前鞭毛体染色呈强阳性反应,与无鞭毛体仅呈弱阳性反应。结论在33℃条件下,用改良的Schneider’sDrosophila培养基进行无鞭毛体体外培养获得成功。用阶段特异性单克隆抗体,进行间接免疫荧光分析法可鉴定亚马逊利什曼原虫的无鞭毛体。