血清乙型肝炎病毒RNA定量分析系统的建立

目的 :建立针对血清乙型肝炎病毒 (hepatitisBvirus,HBV)转录体的定量分析系统 .方法 :从血清中提取病毒DNA和RNA ,采用竞争性PCR技术、Southern blotting及分子克隆等技术 ,建立循环病毒DNA和RNA(转录体 )的定量分析系统 ,并应用其对抗病毒药物Lamivudine干预治疗后HBV感染患者血清中HBVDNA和RNA结构和数量的变化进行分析 .结果 :建立了两个针对X区RNA的定量分析系统 ,可检测带有全长型和顿挫型 3′端结构的转录体 .我们还建立了HBVX ,Core和X PreCore区段的DNA/RNA定量分析系统 ,三者分别与HBV基因复制的早、中、晚期对应 .此研究初步阐明了Lamivudine治疗期间患者血清中HBVDNA和转录体结构和数量的变化 .治疗 8wk以后 ,在Core和X PreCore区DNA拷贝数从 10 9·mL-1下降为 10 5·mL-1,下降幅度明显高于X区(下降至 10 7·mL-1) ,其比率更准确地反映了Lamivudine的作用效率 ,可用于疗效的评估 .转录体的拷贝数仅有小幅下降 ,采用锚定的Oligo(dT)引物检测的两种全长和顿挫型Ploy(A)RNA (10 5·mL-1)明显低于X区 (10 7·mL-1)RNA的拷贝数 ,提示在基因复制过程中前基因组RNA的Ploy(A)尾被去除 .结论 :这一分析系统可显示血清中HBV转录体含量及定量不同 3′端结构 。