HPLC-DAD-ESI-MS/MS结合分子网络技术分析彭祖寿柑果肉的化学成分

以彭祖寿柑(Citrus reticulata Blanco)果肉为材料,采用高效液相色谱-二极管阵列检测器-电喷雾电离质谱(HPLC-DAD-ESI-MS/MS)结合分子网络技术对果肉成分进行分析。采用Thermo Hypersil GOLD C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱。在正负离子模式下采集质谱数据,并上传至全球天然产物社会分子网络(Global Natural Products Social Molecular Networking,GNPS)创建彭祖寿柑果肉分子网络。根据文献报道及在线数据库mzcloud、pubchem,比对二级质谱碎片信息及紫外吸收特征,排除分子网络假阳性结果,在果肉中共注释出70个成分,包括黄酮类7个、苯丙素类25个、二苯基庚烷类8个、有机酸类11个、脂肪酸类5个、氨基酸类4个、萜类4个、核苷酸类2个、生物碱类1个与其他类3个,其中8个二苯基庚烷成分和2个木脂素成分可能为其潜在的新成分。该研究将液相色谱-质谱联用技术与分子网络技术结合,能够快速、准确、较全面地注释彭祖寿柑果肉成分,为彭祖寿柑果肉进一步的开发与利用提供理论参考。

基于转录组学分析驴油生酮饮食下CT26^(+)结肠癌肿瘤的变化

该研究旨在通过转录组测序技术筛选出驴油生酮饮食(DonkeyOilKetogeniDiet,DOKD)影响CT26^(+)结肠癌肿瘤生长的相关基因,挖掘对DOKD响应的基因及其代谢通路,为解析驴油生酮饮食抑制肿瘤生长的机制提供依据。该研究选取一致性较好的CT26^(+)结肠癌BALB/c模型小鼠,随机分为2组,每组3个重复,分别饲喂驴油生酮饮食(DOKD)与正常饮食(ND)。饲喂10d后处死摘取肿瘤组织,测量肿瘤的质量及体积,并利用RNA-Seq技术和生物信息分析方法进行转录组测序及结果分析。DOKD组与ND组小鼠体质量无显著差异,肿瘤明显小于ND组。与ND组相比,DOKD组共18个基因差异表达,其中12个DEGs上调,6个DEGs下调。这些DEGs注释到170条GO条目,其中生物过程(BP)类别124条,细胞组成(CC)类别2条,分子功能(MF)类别44条;涉及18条KEGG通路,主要富集在IL-17信号通路、趋化因子信号通路、细胞因子受体相互作用信号通路、肿瘤坏死因子信号通路等重要通路。此外,该研究通过Western blot进一步研究了TLR4/NF-κB信号通路在在肿瘤中的作用。综上,DOKD对CT26^(+)结肠癌肿瘤有明显抑制作用,该作用可能与IL-17信号通路、趋化因子信号通路、细胞因子受体相互作用信号通路、TNF信号通路等通路密切相关。

Identification of a novel astrovirus from intestinal tissue of a donkey foal with severe diarrhea in China

DEAR EDITOR,Astroviruses are known to cause gastroenteritis and diarrhea symptoms in various hosts.However,no information is currently available on any donkey astrovirus genome.In this study,we collected six intestinal samples from donkey foals that died of severe diarrhea on a donkey farm in Shandong Province,China,in 2021.Based on metagenomic nextgeneration sequencing,a nearly complete donkey astrovirus 1(DAstV-1)sequence was detected as the only possible diarrhea-related mammalian virus.

煮制时间对驴肉不同部位食用品质的影响

以三粉驴的不同部位为研究对象,比较煮制时间对其色泽、剪切力、质构特性及感官等食用品质的影响。结果表明:煮制时间对驴肉4个部位的食用品质产生了不同的影响。煮制7 min时,4个部位均具有较好的质构特性和较高的感官评价,腿肉、脖肉和脊肉表现出了较小的剪切力;同时,肋肉的感官评价得分相对较高,而脊肉得分相对较低。因此,为满足不同的需求,应根据不同肌肉的内在特性来选择合适的烹调方法。

酱驴肉辐照贮藏技术研究

目的:分析探讨γ-射线辐照处理对酱驴肉的贮藏效果,建立适宜的辐照加工工艺参数。方法:采用不同剂量的60 Coγ-射线对铝箔袋真空包装酱驴肉进行辐照处理,分析测定室温贮藏过程中,样品菌落总数、挥发性盐基氮等品质指标的变化。结果:2.0k^10.0kGy的不同辐射剂量处理能够有效杀死肉品表面污染微生物,抑制贮藏过程中菌落总数的增加,剂量越大杀菌效果越好,同时减缓了样品pH值上升和挥发性盐基氮含量的增加,但是对样品的色泽指标(L*值、a*值、b*值)和质构指标硬度、粘聚性的影响作用不明显。

秃疮花药材质量标准研究

目的建立甘肃省地方习用药材秃疮花的质量标准。方法采用性状鉴别、显微鉴别及薄层色谱法建立秃疮花的定性鉴别方法,采用高效液相色谱法建立秃疮花中异紫堇碱含量测定方法,按《中国药典》(2015年)附录方法测定秃疮花中水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物及醇溶性浸出物。结果优化的薄层色谱条件,可以特征性地实现12批秃疮花药材的定性鉴别,且样品均显示有异紫堇碱的斑点。12批秃疮花药材的异紫堇碱在1.9~406.0 mg/mL内呈良好的线性关系(r=0.9999),加样回收率为94.15%~102.54%,RSD=0.39%~1.42%;水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、异紫堇碱分别为2.22%~7.63%、6.29%~10.51%、0.23%~0.76%、17.12%~23.34%、9.04%~14.32%、0.118%~0.940%。结论建立的薄层色谱法可以实现甘肃省地方习用药材秃疮花的定性鉴别,高效液相色谱法简便、可行,可用于秃疮花中异紫堇碱的含量测定,为秃疮花质量标准的建立提供依据。

毛细辛药材质量标准研究

目的建立甘肃省地方习用药材毛细辛的质量标准。方法采用性状鉴别、显微鉴别法建立毛细辛的定性鉴别方法;考虑到毛细辛药材中含有马兜铃酸,采用高效液相色谱法建立毛细辛中毒性成分马兜铃酸Ⅰ的限量测定方法。按《中国药典》(2015年)附录方法测定毛细辛中水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物及醇溶性浸出物。结果10批毛细辛药材的马兜铃酸Ⅰ在0.08~10.10μg/mL内呈良好的线性关系(r=0.9994),加样回收率为93.27%~104.56%,RSD=1.19%~3.44%;水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、马兜铃酸Ⅰ含量分别为8.28%~12.30%、12.77%~17.55%、1.52%~2.68%、18.14%~30.28%、16.63%~27.53%、0.001%~0.002%。结论建立的高效液相色谱法简便、可行,可用于毛细辛药材中的马兜铃酸Ⅰ的限量测定。显微鉴别方法为毛细辛定性鉴别提供依据,马兜铃酸Ⅰ的限量测定方法为毛细辛的安全性评价提供依据,所建立的方法可以用作毛细辛药材的质量标准。

德州驴生产性能的初步研究

德州驴是优秀的皮肉兼用驴,包括“三粉驴”和“乌头驴”两个品系,但是关于德州驴的研究较少。为了向驴产业提供可靠的德州驴生产性能数据,该研究以40头三粉驴和9头乌头驴为研究对象,系统研究了德州驴的体尺性状、屠宰性能、脏器系数及胸腰椎数等性状特点。结果表明,三粉驴的屠宰率为54.02%,净肉率为42.43%,净皮率为8.12%;乌头驴的屠宰率为53.71%,净肉率为40.32%,净皮率为9.41%。表明三粉驴更适合于向肉用驴品系进行培育,乌头驴更适合于向皮用驴品系进行培育。与乌头驴相比,三粉驴的肝脏系数较高,并且小肠、盲肠显著较长(P<0.01),说明三粉驴具有更加优良的消化及代谢能力,可能是其具有更优异产肉性能的原因之一。调查发现,德州驴群体内存在胸腰椎数的变异,胸椎数为17~19个,腰椎数为5~6个;胸椎数与腰椎数存在不同形式的组合,18胸椎5腰椎占比为73.47%,18胸椎6腰椎占比为12.24%,19胸椎5腰椎占比为2.04%,17胸椎6腰椎占比为12.24%。统计发现,多一个胸椎或者腰椎可使驴皮产量增加。该试验结果可为德州驴产业健康可持续发展提供重要理论支撑,为品种及新品系培育提供数据支持。

阿胶开发为化妆品原料的有效成分及安全性分析

以东阿阿胶作为研究对象,采用高分辨质谱技术对其主要功效成分进行鉴定,同时对其进行较为系统的化妆品安全性评估研究。结果显示,阿胶中含有较为丰富的氨基酸、维生素、糖类和脂质等功效营养活性成分,具有良好的开发价值。当阿胶溶液的料液比在1∶100(g∶mL)以下时,其对表皮及真皮细胞均无明显细胞毒性作用,无光毒性作用,无眼刺激性/腐蚀性作用,无皮肤刺激性/腐蚀性作用。结果表明东阿阿胶具有开发为化妆品原料的功效价值且具有作为化妆品原料所必须具备的基础安全性。

影响马胚胎移植成功率的关键因素分析

旨在探讨影响马胚胎移植效率的几种关键因素。本研究统计了国内北京马场、河北马场和山东马场2013-2018年胚胎移植数据,3个马场供体马数量分别为15、21和25匹,受体母马数量分别为56、50和75匹。所有母马年龄为3~12岁。统计供体马冲胚时间对胚胎回收率的影响;胚胎日龄对移植后受体马妊娠率的影响;供、受体母马排卵同期化程度对移植后妊娠率的影响;受体母马居住移植基地时间对移植后妊娠率的影响。结果显示,母马在配种季节注射前列腺素(PG)+GnRH类似物或PG+hCG诱发排卵,发情周期分别为(14.5±0.8)和(14.3±1.1)d,显著低于对照组的((20.5±2.6)d,P<0.05);排卵后第8天冲洗子宫的胚胎回收率均高于第7天,但差异不显著;8日龄胚胎移植后受体马的妊娠率均高于7日龄,差异不显著;供体母马排卵比受体母马早1 d时,胚胎移植后的妊娠率最高;受体母马在移植基地居住时间大于1年时,移植后妊娠率高于居住时间小于0.5年的受体马。根据以上结果,本研究得出如下结论,PG与hCG或GnRH类似物联合使用可缩短母马发情周期,母马排卵后第8天的胚胎回收率和移植后妊娠率较高,胚胎移植时选择居住时间大于1年且排卵时间比供体晚1 d的母马作受体。

阿胶对丙烯酰胺诱导的斑马鱼胚胎氧化应激损伤的保护作用

丙烯酰胺(AA)被国际癌症研究中心列为2A类致癌物,在油炸、烘烤食品中普遍存在。目前研究大多数聚焦于如何减少加工过程中丙烯酰胺的产生,以及植物化学物对丙烯酰胺产生危害的保护作用,而对动物性食品方面的研究甚少。本文探讨了阿胶对丙烯酰胺诱导的斑马鱼胚胎氧化应激损伤的保护作用。本试验中设1个空白对照组,1个AA组和3个阿胶处理组(0.05,0.10,0.50 mg/mL),在胚胎7~9 hpf(受精后小时数)时用不同浓度阿胶溶液处理1 h,然后与AA组一起用3 mmol/L AA溶液处理至24 hpf,并都改用普通培养液进行培养。培养至72 hpf,测定各组胚胎的存活率、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,以及氧化应激相关基因表达情况。结果表明,与对照组相比,AA组显著降低了胚胎存活率和抗氧化酶活性(P<0.05),提高了ROS和MDA含量(P<0.05);与AA组相比,用阿胶进行预处理能显著提高胚胎存活率和抗氧化酶活性(P<0.05),显著抑制ROS和MDA的生成量(P<0.05)。基因检测结果表明,与AA组相比,阿胶处理提高了137.19%的Nrf2(NF-E2-related factor)水平及其下游抗氧化酶基因的表达量(P<0.05)。结论:阿胶通过调节抗氧化酶的活性以及氧化应激相关基因的表达,对丙烯酰胺诱导的斑马鱼胚胎氧化应激损伤起到保护作用。

德州驴NCAPG-DCAF16基因区域多态性与生长性状的关联分析

旨在探讨NCAPG-DCAF16基因区域在德州驴群体中的遗传多态性以及与生长性状的关联性,进而得到显著相关的遗传标记,为德州驴的分子标记辅助选择提供理论基础。本研究采用DNA混池测序技术对NCAPG-DCAF16基因区域的多态性进行检测;基于DNA混池测序结果,运用质谱分型技术对227头德州驴群体中的SNPs位点进行基因型检测,分析基因型与初生、3月龄、6月龄3个时期相关生长性状的关联性。结果表明:1)通过DNA混池测序发现,NCAPG基因上的SNPs位点包括第9内含子上rs1(T>C),第11内含子上rs2(A>G),第19内含子上rs4(C>G),第8内含子上rs5(C>G);DCAF16基因第2外显子发现一个同义突变,即位点rs008(A>G)。2)初生时期的关联分析显示,rs1位点基因型CC个体的平均尻长显著高于CT型个体(P<0.05);3月龄时期各基因型的表型平均值无显著差异(P>0.05);在6月龄阶段,基因型为TT个体的平均胸宽与CC个体相比差异极显著(P<0.01),TT和CT基因型个体的平均管围均显著高于CC个体(P<0.05)。3)rs4位点的关联分析揭示了GG基因型个体在初生时期的平均胸深显著高于GC基因型(P<0.05),3月龄时期各基因型之间的平均表型值无显著差异(P>0.05);CC基因型个体6月龄时期的平均胸宽和管围显著高于GG基因型(P<0.05)。4)rs008位点关联分析结果表明,各基因型之间初生时期的表型值无显著差异(P>0.05);AA、GA基因型个体3月龄时期的体重、体高和尻高都显著高于GG基因型(P<0.05);AA、GA基因型个体6月龄时期的体高和胸围都极显著高于GG基因型个体(P<0.01),GA基因型与GG基因型个体间的胸深、尻高的差异达到极显著水平(P<0.01),GA基因型个体的尻宽显著高于GG和AA基因型(P<0.05)。5)根据连锁不平衡分析结果,rs1、rs2、rs4和rs5的组合基因型在德州驴群体中有5种。关联分析结果揭示了TTAACCCC组合基因型个体6月龄时期的平均胸宽显著高于CCGGGGGG组合基因型(P<0.05)。综上,德州驴群体中NCAPG-DCAF16基因区域5个SNPs位点对生长性状均有显著影响,特别是rs008位点与德州驴体重、体高等重要生长性状极显著相关,可用于德州驴的分子标记辅助选择,提高德州驴育种效率。

生长期公母驴生产性能、血清生化指标、胴体性状和肉品质的比较

本试验旨在比较生长期公母驴生产性能、血清生化指标、胴体性状和肉品质的差异性。选取体重(149.50±7.20)kg、胎次相近的7~8月龄健康的断奶德州改良公母驴各10只,按性别分为2组,每组各2个重复,每个重复5头。试验驴按体重的1.5%饲喂精料,粗饲料均为豆秸,精粗比为4∶6。预试期7d,正试期270d。结果表明:1)母驴干物质采食量和平均日增重略高于公驴,但差异不显著(P>0.05);母驴体长、胸宽、出皮率和皮中胶原蛋白含量显著或极显著低于公驴(P<0.05或P<0.01),但母驴胸围显著高于公驴(P<0.05)。2)母驴血清白球比显著高于公驴(P<0.05),而血清碱性磷酸酶活性极显著低于公驴(P<0.01)。母驴和公驴其他血清生化指标差异不显著(P>0.05)。3)母驴胴体率和腹脂率显著高于公驴(P<0.05),肌肉剪切力、大理石花纹评分和游离脂肪酸含量极显著高于公驴(P<0.01)。母驴和公驴其他胴体性状和肉品质指标均差异不显著(P>0.05)。由此可见,在本试验条件下,母驴生产性能、胴体性状和肉品质均优于公驴,但公驴出皮率和皮中胶原蛋白含量高于母驴。

冻干驴乳粉全成分分析

为从分子水平阐明驴乳粉的功效物质基础和表征我国特有德州驴乳粉的成分,本实验采用UPLC-Orbitrap MS技术定性分析驴乳粉的有效成分。共鉴定出87种代谢物,主要有氨基酸及其衍生物类、糖类、有机酸类、脂质类和其他5大类。驴乳粉不仅含有6种必需氨基酸,而且含有γ-氨基丁酸、牛磺酸、焦谷氨酸等活性氨基酸。首次在驴乳粉中鉴定出海藻糖、尿酸、马尿酸、杜鹃花酸、尿囊素和肌肽等成分。这些活性成分从分子基础上揭示了驴乳防治糖尿病和美容养颜的潜在功效。为驴乳的深层次开发提供理论依据。

椒目质量标准研究

目的建立甘肃省地方习用药材椒目的质量标准。方法采用性状鉴别、显微鉴别及薄层色谱法建立椒目的定性鉴别方法,高效液相色谱法建立椒目中α-亚麻酸的含量测定方法,按《中国药典》(2015年)附录方法测定椒目中水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物及醇溶性浸出物含量。结果优化的薄层色谱条件,可以特征性地实现11批椒目药材的定性鉴别,且11批样品均显示有α-亚麻酸的斑点。α-亚麻酸在0.011~1.344 mg/mL内呈良好的线性关系(r=0.9991),加样回收率为93.57%~110.88%,RSD=0.43%~2.93%;水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物及α-亚麻酸含量分别为5.86%~8.74%、5.28%~6.65%、0.28%~1.22%、6.15%~9.45%、12.79%~25.48%、1.61%~4.42%。结论建立的薄层色谱法可以实现甘肃省地方习用药材椒目的定性鉴别,高效液相色谱法简便、可行,可用于椒目中α-亚麻酸的含量测定,为建立椒目质量标准提供依据。

高通量测序技术探究驴乳粉对皮肤细胞的影响

基于RNA-seq技术探究驴乳与角质形成细胞和成纤维细胞的相互作用。驴乳分别与角质形成细胞、成纤维细胞共孵育后,采用RNA-seq筛选差异表达基因(DEGs),进行GO和KEGG富集分析。驴乳作用角质形成细胞后共筛选出819个DEGs,其中420个上调基因,399个下调基因。GO富集分析显示,差异表达基因参与与表皮发育、角质细胞分化、角化等生物学过程。KEGG富集分析显示,驴乳作用角质形成细胞涉及的分子机制包括IL-17信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用、金黄色葡萄球菌感染等。驴乳作用成纤维细胞后共筛选出507个DEGs,其中298个基因上调,209个基因下调。GO富集分析显示,驴乳参与成纤维细胞的细胞黏附的正调控、脂质定位的调节、脂质转运的调节等生物学过程;KEGG结果显示,驴乳作用成纤维细胞涉及的分子机制包括细胞因子-细胞因子受体相互作用和cGMP-PKG信号通路等。为阐明驴乳对皮肤细胞功能的分子作用机制提供了科学依据。

阿胶对皮肤屏障损伤的修复作用

探讨阿胶在皮肤屏障损伤方面的作用。通过八肽胆囊收缩素(CCK-8)法测定细胞存活率,酶联免疫吸附检测方法(ELISA)法测定Ⅰ型胶原蛋白和IL-1α含量水平,划痕法测定细胞迁移率,采用四唑盐比色法(MTT)法测定屏障指数(ET_(50)),评价阿胶在皮肤屏障损伤修复方面的作用。结果表明,1%以下浓度的阿胶对成纤维细胞无毒性作用,且可显著促进成纤维细胞增殖。阿胶能够显著促进成纤维细胞的迁移和I型胶原蛋白的表达。5%阿胶能够显著修复受损皮肤屏障、抑制IL-1α的表达,效果与地塞米松类似。阿胶能够有效修复和缓解十二烷基硫酸钠造成的皮肤屏障损伤和刺激。

红药子质量标准研究

目的建立红药子药材的定性定量评价方法。方法采用薄层色谱法建立红药子的定性鉴别方法,采用高效液相色谱法建立红药子中岩白菜素的定量分析方法,参照《中国药典》(2015年)附录相关方法测定红药子中水分、灰分、酸不溶性灰分及浸出物含量。结果建立的薄层色谱法斑点清晰,重复性好,可以特征性地实现12批红药子药材的定性鉴别。红药子中岩白菜素测定的标准曲线为y=6249.8056x+369.11127,线性范围为0.0627~8.03 mg/mL,相关系数为0.9992,日内精密度RSD=0.64%,平均加样回收率为96.20%,RSD=2.97%。12批红药子中岩白菜素、水分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物、水溶性浸出物含量分别为8.94%~12.59%、0.25%~0.95%、27.10%~40.32%、16.06%~26.58%、3.31%~9.45%。结论建立的薄层色谱法可以实现红药子药材的定性鉴别,高效液相色谱法简便、可行,具有较高的精密度和准确性,可用于红药子中岩白菜素的含量测定。

驴乳粉修复皮肤屏障作用研究及安全性评价

初步探讨驴乳粉在皮肤屏障修复方面的作用与安全性。以驴乳粉为研究对象,通过细胞毒性试验、鸡胚绒毛尿囊膜试验、3D皮肤模型等评估驴乳粉的安全性与皮肤屏障修复效果。结果显示,10%以下浓度的驴乳粉对HaCaT细胞和NHDFs细胞无毒性,且能够促细胞增殖作用;驴乳粉无表皮细胞致炎性、无眼刺激性/腐蚀性作用和无皮肤刺激性/腐蚀性作用,但是两种光毒性预判模型对驴乳粉光毒性判定结果不一致,还需进一步的研究。2%驴乳粉能够显著修复受损皮肤屏障、抑制IL-1α的表达,效果与地塞米松类似。结果表明,驴乳粉基本具有皮肤用毒理安全性和修复皮肤屏障的效果。

不同狼尾草属牧草对德州驴的营养价值评定

为评定不同狼尾草属牧草对德州驴的营养价值,本试验选取健康、体重接近的30月龄德州公驴36头,分为6组,每组2个重复,每个重复3头驴,采用移动尼龙袋法对6种狼尾草属牧草进行表观消化率评定。结果表明:热研4号王草干物质含量显著高于巨菌草和桂闽引象草(P<0.05);王草粗蛋白质(CP)含量较热研4号王草、紫色象草、桂牧1号杂交象草、巨菌草分别高18.81%、9.19%、13.74%、5.36%(P<0.05);王草中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)含量显著高于紫色象草、桂牧1号杂交象草、桂闽引象草(P<0.05);热研4号王草、紫色象草粗灰分含量显著高于其他牧草(P<0.05);巨菌草粗脂肪(EE)含量显著低于其他(P<0.05);王草总能(GE)含量显著低于其他牧草(P<0.05)。巨菌草粗蛋白质表观消化率较热研4号王草、紫色象草、桂牧1号杂交象草、王草分别高25.92%、39.05%、15.90%、6.09%(P<0.05);桂闽引象草粗蛋白质表观消化率较热研4号王草、紫色象草、桂牧1号杂交象草、王草分别高24.50%、37.47%、14.58%、4.88%(P<0.05);桂闽引象草粗纤维表观消化率显著高于其他牧草(P<0.05);王草、桂闽引象草中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维表观消化率显著高于其他牧草(P<0.05);紫色象草粗灰分表观消化率最低为51.39%,显著低于桂牧1号杂交象草、王草、巨菌草、桂闽引象草(P<0.05)。综上,6种牧草在不同营养成分上各有优势。综合各项营养物质表观消化率,桂闽引象草的消化率更高,在驴上的营养价值更高。