小剂量激素对类风湿性关节炎患者的远期疗效

目的系统评价小剂量糖皮质激素(<15mg/d)治疗类风湿性关节炎的远期疗效以及安全性。方法检索小剂量糖皮质激素治疗类风湿性关节炎的随机临床试验结果。用Revman4.2软件对入选的文献进行Meta分析。结果最终纳入14项研究,Meta分析结果:临床有效率的合并OR值为1.50,95%CI:1.18～1.92,P=0.001;骨关节有效率的合并OR值为0.87,95%CI:0.66～1.55,P=0.32;小剂量激素对Sharp评分影响的合并OR值为-5.84,95%CI:-6.73～-4.95,P<0.000 01;对骨质侵蚀分数影响的合并OR值为-4.34,95%CI:-4.63～-3.99,P<0.000 01;对关节狭窄分数影响的合并OR值为-1.03,95%CI:-1.31～-0.75,P<0.000 01;对健康评定问卷(HAQ)评分和握力比较差异无统计学意义。结论小剂量糖皮质激素治疗类风湿性关节炎远期疗效较好且不会引起不良反应。

121例原发性IgA肾病的临床与病理及相关性分析

目的:了解IgA肾病患者的临床表现及其病理类型、损害程度,并探讨其相关性。方法:对经肾活检证实为原发性IgA肾病的121例患者的资料进行回顾性分析。结果:121例中男55例,女66例,平均年龄(33.33±10.59)岁;临床表现以尿检异常型最常见,为50例(占41.3%),其次是高血压型25例(占20.7%)及大量蛋白尿型21例(占17.3%);肾脏病理类型多样,Hass分级以Ⅲ级为主(占47.9%);伴新月体形成39例(占32.2%),伴肾小管损害91例(占75.2%),伴有血管病变23例(占19%),免疫复合物的沉积以IgA+IgM+C3型比例最高为48例(占39.67%),IgM沉积总计达77例(占63.63%)。结论:IgA肾病的临床表现和病理类型多样,存在着一定的相关性但不完全一致,要综合临床表现并早期行肾活检以明确肾脏病理诊断。

组织因子siRNA表达载体的构建及其抑制人神经母细胞瘤细胞组织因子表达的研究

目的:构建组织因子(TF)特异性小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察其对人神经母细胞瘤细胞TF表达的影响。方法:分子生物学方法构建TFsiRNA-pSUPER表达载体,限制酶切予以初步筛选,基因测序进行证实。以脂质体Lipo-fectamine2000介导转染人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC。以WesternBlotting检测TF表达。结果:所构建TFsiRNA-pSUPER表达载体经基因测序证实。SK-N-MC细胞高表达TF,TFsiRNA-pSUPER表达载体转染48h后,TF表达水平与转染pSUPER质粒的对照细胞相比显著降低,呈剂量依赖性。结论:人神经母细胞瘤SK-N-MC中TF异常高表达,本研究构建的TFsiRNA表达载体可在SK-N-MC中特异性下调TF表达,可作为干预TF表达、研究其非凝血功能的有效手段。

腹膜间皮细胞在小鼠子宫内膜细胞刺激腹腔微环境中作用

目的:探讨腹腔微环境受子宫内膜细胞刺激改变中腹膜间皮细胞的作用及其对子宫内膜异位症发病机制的意义。方法:注射小鼠子宫内膜上皮和间质细胞入小鼠腹腔,酶联免疫吸附法(ELISA)检测注射后4、24和72h时点腹腔冲洗液细胞因子MCP-1/JE、IL-1α和IL-6蛋白表达,同步逆转录-聚合酶链式反应技术(Real-Time RT-PCR)检测腹膜组织(主要含腹膜间皮细胞)和腹腔巨噬细胞的细胞因子MCP-1/JE、IL-1α和IL-6mRNA表达。结果:子宫内膜细胞刺激腹腔细胞因子蛋白含量迅速一过性升高,4h时点为表达高峰,腹膜细胞因子基因表达与腹腔液蛋白表达同步,腹腔巨噬细胞基因表达高峰滞后于腹腔液蛋白表达。子宫内膜上皮细胞刺激腹腔炎症反应作用强于间质细胞。结论:子宫内膜细胞刺激腹腔发生非特异性炎症反应,腹膜间皮细胞可能是其细胞因子效应的主要来源,提示腹膜在子宫内膜异位症中除作为病灶依附体外,还可能在腹腔微环境无菌性炎症反应中起重要作用。

组织因子表达影响阿霉素诱导人神经母细胞瘤凋亡的研究

目的研究组织因子(TF)表达对阿霉素诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的影响。方法以Western印迹法检测TF表达,以WST法检测阿霉素的细胞毒性。以Western印迹法检测阿霉素诱导的Caspase-3、PARP的裂解,以Hochest 33342染色,倒置荧光显微镜下检测凋亡细胞。结果人神经母细胞瘤系SH-EP1高表达TF而SK-N-SH细胞系中TF表达水平低。以TF基因表达载体TF-pcDNA 3转染SK-N-SH细胞,显著增强其TF表达水平。以不同浓度阿霉素处理48 h后,可见转染TF-pcDNA 3的SK-N-SH细胞的存活数较对照细胞明显增多。转染TF-pcDNA 3的SK-N- SH细胞及转染pcDNA3质粒的对照细胞分别以阿霉素处理4 h、8 h、24 h,可见转染TF基因的细胞与对照细胞相比, Caspase-3、PARP裂解减弱。以Hochest 33342染色检测到转染TF-pcDNA 3的SK-N-SH细胞经阿霉素处理后的凋亡细胞数为134．33±21．00,与转染pcDNA 3的对照组相比(232．33±8．84)显著减少(P<0．05)。结论TF在人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH中的强制表达,可抑制阿霉素诱导的肿瘤细胞凋亡。肿瘤细胞中TF的异常高表达可能参与阿霉素诱导细胞凋亡的调控,影响肿瘤细胞对化疗药物的耐受性和疾病进展。

一种测定饲料中氯羟吡啶残留的快速电化学检测方法

为探索检测氯羟吡啶等广谱抗球虫药物快速、灵敏的检测方法,本文采用玻碳电极为工作电极,建立了伏安法检测氯羟吡啶的电化学行为。结果表明:氯羟吡啶在1.45 V处具有氧化峰电流,检测的线性范围为1.7×10-7mol/L至2.3×10-5mol/L,检测限为1.4×10-8mol/L,回收率达93.7%。当玻碳电极用Nafion-二茂铁修饰后,可显著提高检测的特异性及灵敏度,使检测下限达1.8×10-9mol/L。同时本文就不同支持电解质溶液、pH值、断路富积时间对测定结果的影响及修饰电极的再生等进行了详细的探讨。

GJB6基因敲除小鼠耳蜗血管纹超微结构观察

目的观察缝隙连接蛋白30（connexin，Cx30）基因敲除纯合子Cx30（-/-）小鼠（P3、P7、P10、P30、P60、P90）耳蜗血管纹（stria vascularis，SV）超微结构的发育情况，进一步探讨GJB6基因突变导致耳聋的机制。方法选取Cx30（-/-）小鼠P3、P7、P10、P30、P60、P90等6个发育阶段的小鼠，用透射电镜观察耳蜗血管纹超微结构变化情况。结果P3～P90耳蜗血管纹边缘细胞、中间细胞、基底细胞呈现一个由不成熟至成熟的正常发育过程，至P90时均未发现退化性表现或缺失改变。血管纹毛细血管随着小鼠日龄的增加，管腔逐渐变宽，逐渐成熟，高倍镜下见P3、P7、P10时血管内皮细胞结构无明显异常，P30时内皮细胞之间的纤维突起出现疏松，P60时内皮细胞之间出现较大的裂隙，P90时这种改变更加严重，内皮细胞之间出现扩大的细胞间隙。结论 GJB6基因缺陷本身并不影响耳蜗组织血管纹的形态发育和成熟，GJB6缺失引起小鼠出生后逐渐出现的血管纹内皮细胞超微结构的改变导致内皮细胞屏障破坏，可能引起耳蜗内电位缺失，从而造成听力的下降。

雷公藤有效组分WZ_1对肾小球肾炎动物模型的治疗作用及机制探讨

中药雷公藤在我国用于风湿病的治疗已有近千年历史。近年来由于其具有明显的免疫活性,受到国内外学者的关注。目前已从雷公藤全根中鉴定出70余种不同组分。目前所报道的有效成分多为有机溶剂提取物,其毒性较强,影响了进一步使用。我们以传统煎煮的方法从雷公藤根中提取有效成分,

人GJB2基因错义突变表达载体构建及鉴定

目的构建6种分别携带GJB2基因错义突变A40G、V37I、L90P、L90V、V84L和W44C的真核表达载体,转染HEK293细胞,建立6种错义突变的稳定表达细胞系。方法以野生型Cx26-EGFP融合蛋白质粒为模板,用Stratagene公司定点突变试剂盒构建错义突变表达载体,直接测序鉴定序列正确性,选取含有突变的载体转染HEK293细胞,G418选择性培养2周,流式细胞仪筛选表达阳性细胞,扩增培养形成稳定表达人Cx26突变的HEK293细胞系。培养细胞用4%多聚甲醛固定,鬼笔环肽和4',6-二脒基-2-苯基吲哚衬染细胞核,荧光显微镜下检测结果。结果6种突变表达载体经过测序,均含有相应突变,无多余突变出现,转染后均可在细胞间形成缝隙连接,呈现绿色荧光。结论成功构建6种携带GJB2基因错义突变的真核表达载体,为进一步研究错义突变致聋原因奠定了实验基础。

小鼠慢性视网膜变性/盘膜边缘蛋白基因克隆及重组质粒构建(英文)

目的 克隆小鼠慢性视网膜变性 /盘膜边缘蛋白基因 ,并构建其重组质粒载体。方法 以正常小鼠视网膜 RNA为模板 ,采用 RT- PCR方法扩增出 c DNA目的片段 ,PCR扩增 ,克隆至 p Bluescript II KS(+ )质粒 ,进行限制性内切酶 Bam H I和测序分析 ;再克隆到带有 CMV启动子的 pc DNA3质粒 Bam H I位点 ,Bam H I和 Eco R I限制性内切酶及测序证实。结果 限制性内切酶分析及测序证实 p Bluescript II KS(+ )质粒和 pc DNA 3质粒中插入的 1.2 kb片段 ,与小鼠慢性视网膜变性 /盘膜边缘蛋白基因全部编码区相吻合。结论 获得小鼠慢性视网膜变性 /盘膜边缘蛋白基因的全部编码区序列 ,并构建到带有CMV启动子的 pc DNA3载体中 ,为进一步研究打下基础。[眼科新进展 2 0 0 1;2 1(1)∶ 7- 11]

大鼠对旋毛虫再感染的抵抗力实验观察(英文)

目的研究实验感染旋毛虫(韩国分离株)的大鼠对成虫和肌期幼虫阶段感染的保护性免疫和IgG,IgG1,IgG2a抗体反应。方法46只大鼠随机分为7组,其中2组(A1、A2组,共10只)用于观察成虫阶段引起的保护性免疫,B组(B1、B2组,共14只)用于观察肌期幼虫阶段引起的保护性免疫,C组(C1、C2组,共17只)为感染对照组,D组(5只)为正常对照组。A、B和C组分别每鼠感染1000条旋毛虫肌幼虫,分别于感染后第7天(A1、A2组)和第30天(B1、B2组),用氟苯咪唑治疗(20mg/kg,10d)。治疗后第10天,A和B组每鼠再次感染500条旋毛虫肌幼虫,于感染后第7天剖杀A1和B1组大鼠,检测肠道内成虫数,于感染后第30天剖杀A2和B2组大鼠,检测横膈膜内肌期幼虫数,同时分别剖杀感染对照组和正常对照组大鼠。每组同期取血,ELISA检测特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体水平。结果旋毛虫成虫阶段对成虫和肌幼虫的保护性免疫分别为100%和99.96%,肌幼虫阶段对成虫和肌幼虫的保护性免疫分别为99.92%和99.89%。肌幼虫感染阶段抗肌幼虫分泌排泄抗原的特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体与正常对照组(分别为0.5、0.1和0.1)和成虫感染阶段(分别为0.5、0.09和0.09)比较,抗体反应均显著增高(分别为3.0、2.2和0.8)(P<0.01)。且幼虫期抗肌幼虫分泌排泄抗原特异性IgG1抗体(2.2)显著高于特异性IgG2a抗体(0.8)(P<0.01)。结论旋毛虫的成虫和肌幼虫阶段的感染均对成虫和幼虫的再感染产生保护性免疫。

组织因子表达影响阿霉素对人神经母细胞瘤细胞毒性的研究

目的：研究组织因子（TF）表达对阿霉素在人神经母细胞瘤细胞系中细胞毒性的影响。方法：以Western Blotting检测TF表达。分子生物学方法构建TFsiRNA—pSUPER表达载体，以脂质体介导进行基因转染。以WST法检测阿霉素细胞毒性。结果：①人神经母细胞瘤细胞系SK—N—MC高表达TF；②所构建的TFsiRNA—pSUPER表达载体转染SK-N—MC细胞后，呈剂量依赖性降低TF表达水平；③转染TFsiRNA-pSUPER的SK—N—MC细胞与转染pSUPER质粒的对照细胞分别以不同浓度的阿霉素处理后，前者与后者相比存活细胞数显著降低。结论：以siRNA特异性下调人神经母细胞瘤细胞SK—N—MC中的TF表达，可增强阿霉素的细胞毒性。TF的异常高表达有可能增强肿瘤细胞对化疗药物的耐受性，籍此影响疾病预后。

循环伏安法快速检测饲料中球虫酯

本实验探讨了检测球虫酯等广谱抗球虫药物快速、灵敏的检测方法,本文采用玻碳电极为工作电极,以伏安法检测了球虫酯的电化学行为。球虫酯在+1.54V处具有氧化峰电流,检测的线性范围为2.5×10-7～3.1×10-5mol/L,检测限为1.6×10-8mol/L,回收率达92.5%。当玻碳电极用Nafion修饰后,可显著提高检测的特异性及灵敏度,使检测下限达2.4×10-9mol/L。同时本实验对不同支持电解质溶液、pH值、断路富积时间对测定结果的影响及修饰电极的再生等进行了详细的探讨。

连接蛋白29在小鼠耳蜗中的表达

目的研究连接蛋白29(connexin 29,Cx29)在小鼠内耳的表达,探讨Cx29突变致聋的原因。方法野生型小鼠耳蜗冰冻切片,用神经丝蛋白(neurofilament,NF)、髓鞘相关糖蛋白抗体(myelin associated glycoprotein,MAG)和神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)抗体与Cx29抗体行双重免疫荧光染色,荧光显微镜观察染色结果。结果Cx29主要表达于位听神经和螺旋神经节细胞髓鞘,MAG与Cx29的共同表达于内耳位听神经处,表达呈圈状;GFAP只在内听道以外的脑干部位表达,与Cx29无共同表达;Cx29形成一个个圈样围绕NF;血管纹处可见Cx29微量表达。结论Cx29在小鼠内耳中大量表达,可能对维持小鼠正常听觉功能起重要作用。

碳酸镧与醋酸钙治疗维持性透析患者高磷血症的比较研究

目的:探讨新型磷结合剂碳酸镧相对于传统磷结合剂醋酸钙用于治疗维持性透析患者高磷血症的疗效及其对于血管钙化的影响。方法:选取80例终末期慢性肾脏病(CKD)维持性透析高磷血症患者,按随机数字表法分为碳酸镧组和醋酸钙组,检测2组患者服药后1、2、4周及4、8、12个月的血磷、血钙、钙磷乘积水平,并于治疗4周及12个月后检测患者甲状旁腺激素(PTH)水平,比较2组患者短期和1年维持期治疗的疗效。测定2组患者1、4、8、12个月的血管钙化程度,分析碳酸镧对于血管钙化的影响。结果:2组患者的血磷在短期内均下降,前2周2组血磷及钙磷乘积差异不明显,但在第4周碳酸镧组血磷及钙磷乘积均低于醋酸钙组(均P<0.01)。维持1年冶疗后,2组血磷和PTH水平无明显差异,均能有效降低血磷,但碳酸镧组钙磷乘积明显低于醋酸钙组(P<0.01);相比于血透患者,碳酸镧组腹透患者的血磷下降更为明显(P<0.05)。血管钙化程度比较,碳酸镧组出现轻度钙化12例,中重度钙化3例,高钙血症0例,总不良影响率为37.5%;醋酸钙组出现轻度血管钙化14例,中重度血管钙化8例,高钙血症8例,总不良影响率为75.0%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:碳酸镧对于治疗维持性透析患者高磷血症有效,相较于醋酸钙,具有更好的短期疗效,且较少引起高钙血症,更易改善患者的钙磷乘积,其对血管钙化的影响较小。

蛋氨酸对化疗药物引起内耳损伤的保护作用

目的研究蛋氨酸对化疗药物顺铂导致耳毒性的保护作用。方法将30只昆明小鼠随机分为3组。顺铂组(n=10):给予顺铂3.5mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射,连续7d;蛋氨酸+顺铂组(n=10):蛋氨酸300mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射,30min后给予顺铂3.5mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射,连续7d;对照组(n=10):生理盐水3.5mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射,连续7d。实验第8天,利用听觉脑干诱发电位(auditory brainstem response,ABR)对3组小鼠进行听功能测试,然后迅速断头取出双侧内耳,解剖耳蜗基底膜,铺片并HE染色,普通光学显微镜下观察。结果在ABR测试中,对照组小鼠实验前后听力无明显变化;顺铂组小鼠听阈及Ⅰ波和Ⅲ波潜伏期与对照组相比变化明显;蛋氨酸+顺铂组小鼠听阈及Ⅰ波和Ⅲ波潜伏期与对照组相比也出现变化,但变化程度较顺铂组明显减轻。光镜观察:对照组动物耳蜗基底膜外毛细胞排列整齐;顺铂组基底膜外毛细胞有不同程度的坏死、脱落,尤以底转缺失严重;蛋氨酸+顺铂组耳蜗毛细胞损伤较顺铂组明显减轻。结论化疗药物顺铂对耳蜗毛细胞引起损害,而蛋氨酸对这种损害有较好的保护作用。

小鼠缺血性脑卒中后磷脂酶D1在自噬和神经损伤中的作用

目的探讨在小鼠缺血性脑卒中模型中,磷脂酶D1(PLD1)在自噬和神经损伤中的作用。方法将6只6~8周龄成年雄性C57鼠采用随机数字表法分为两组,sham组和stroke组,每组各3只。sham组小鼠给予缺血性脑卒中处理但不进行大脑中动脉结扎,stroke组小鼠给予缺血性脑卒中处理。观察两组小鼠脑神经元内PLD1的变化。然后构建条件性基因敲除小鼠,将小鼠采用随机数字表法分为3组:sham PLD1^(fl/fl)组12只,缺血性脑卒中后PLD1^(fl/fl)组(stroke PLD1^(fl/fl)组) 12只,缺血性脑卒中后PLD1-KO组(stroke PLD1-KO组) 12只,然后利用免疫荧光染色、Western blotting、TTC染色法观察sham PLD1^(fl/fl)组小鼠,缺血性脑卒中后PLD1^(fl/fl)小鼠和缺血性脑卒中后PLD1-KO小鼠神经元自噬(LC3-Ⅱ)的情况及自噬对梗死面积的影响,明确PLD1的作用机制。结果在缺血性脑卒中后24 h,缺血半暗带的神经元中,stroke组较sham组PLD1表达明显增多。在条件性敲除小鼠中,stroke PLD1^(fl/fl)组较sham PLD1^(fl/fl)组自噬重要标志物LC3-Ⅱ明显升高(P <0. 05),而条件性敲除神经元内PLD1后,stroke PLD1-KO组较stroke PLD1^(fl/fl)组LC3-Ⅱ明显降低(P <0. 05),同时,梗死面积也明显缩小(P <0. 000 1)。结论缺血性脑卒中后神经元内PLD1表达升高,LC3-Ⅱ增多,抑制PLD1引起的过度自噬可以有效改善缺血性脑卒中后的神经损伤。

L人晶体膜内蛋白MP19基因(LIM2)启动子上一个晶体特异顺式元件的鉴定(英文)

使用重叠和变异的寡核苷酸作为探针 ,凝胶迁移分析和竞争实验分析了LIM2转录起始位点上游 - 4 7至- 32的区域 ,与其高度亲和结合的一个蛋白复合体看来仅仅结合到这个DNA双链区域的“敏感”位点。这个位点的序列由 4个G核苷 ,接着 7个其他核苷酸 (AACCTAA)及连着另外 4个G核苷组成 ,即GGGGAACCTAAGGGG ;我们称其为Hsu元件。使用含有这个元件或相应的变异元件所构建的LIM2基因启动子 CAT质粒的活性分析表明Hsu元件是位于LIM2基因启动子之内 ,它是LIM2基因表达所必须的。结合到Hsu元件的反式因子存于晶体发育期间 ,看来是晶体特异性的。由于LIM2基因启动子并不包含一个经典的TATA盒 ,这个Hsu元件可能充当RNA复制酶复合体结合的位点。

氧化应激在衰弱发病机制中的作用

衰弱包括躯体衰弱、认知衰弱与社会心理衰弱,衰弱老年人表现为多个器官和系统生理储备功能下降,当遇到微小的刺激如呼吸道感染、微创手术等,便可引发慢病加剧、再住院、跌倒、谵妄、失智、失能,甚至死亡等一系列不良事件。衰弱的本质是动态的,个体从健康、衰弱前、衰弱再到失能是一种连续演变的过程,经过早期干预,衰弱可在一定程度上逆转,从而减少生理储备的损失。因此,研究衰弱的发病机制,明确与衰弱相关的生物标志物并尽早识别非常重要。氧化应激在衰弱的发病机制中起了重要作用,本文对氧化应激在衰弱发生中的作用进行探讨,重点论述氧化应激标志物、抗氧化防御系统及氧化应激相关线粒体功能障碍与衰弱的关系。

现代科学对经络的揭示

本文是继《科技导报》１９９１年第３期（第３７～４０页）“生物电化学振荡”一文后,对经络研究新进展的进一步总结,其中有关生物电场的作用和针灸机制的探讨因前文已述,故本文从略。近年来针灸和经络研究在世界上受到日益广泛的重视,数以百计的随机分组对照实验肯定了针...