组织因子siRNA表达载体的构建及其抑制人神经母细胞瘤细胞组织因子表达的研究

目的:构建组织因子(TF)特异性小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察其对人神经母细胞瘤细胞TF表达的影响。方法:分子生物学方法构建TFsiRNA-pSUPER表达载体,限制酶切予以初步筛选,基因测序进行证实。以脂质体Lipo-fectamine2000介导转染人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC。以WesternBlotting检测TF表达。结果:所构建TFsiRNA-pSUPER表达载体经基因测序证实。SK-N-MC细胞高表达TF,TFsiRNA-pSUPER表达载体转染48h后,TF表达水平与转染pSUPER质粒的对照细胞相比显著降低,呈剂量依赖性。结论:人神经母细胞瘤SK-N-MC中TF异常高表达,本研究构建的TFsiRNA表达载体可在SK-N-MC中特异性下调TF表达,可作为干预TF表达、研究其非凝血功能的有效手段。

组织因子表达影响阿霉素诱导人神经母细胞瘤凋亡的研究

目的研究组织因子(TF)表达对阿霉素诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的影响。方法以Western印迹法检测TF表达,以WST法检测阿霉素的细胞毒性。以Western印迹法检测阿霉素诱导的Caspase-3、PARP的裂解,以Hochest 33342染色,倒置荧光显微镜下检测凋亡细胞。结果人神经母细胞瘤系SH-EP1高表达TF而SK-N-SH细胞系中TF表达水平低。以TF基因表达载体TF-pcDNA 3转染SK-N-SH细胞,显著增强其TF表达水平。以不同浓度阿霉素处理48 h后,可见转染TF-pcDNA 3的SK-N-SH细胞的存活数较对照细胞明显增多。转染TF-pcDNA 3的SK-N- SH细胞及转染pcDNA3质粒的对照细胞分别以阿霉素处理4 h、8 h、24 h,可见转染TF基因的细胞与对照细胞相比, Caspase-3、PARP裂解减弱。以Hochest 33342染色检测到转染TF-pcDNA 3的SK-N-SH细胞经阿霉素处理后的凋亡细胞数为134．33±21．00,与转染pcDNA 3的对照组相比(232．33±8．84)显著减少(P<0．05)。结论TF在人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH中的强制表达,可抑制阿霉素诱导的肿瘤细胞凋亡。肿瘤细胞中TF的异常高表达可能参与阿霉素诱导细胞凋亡的调控,影响肿瘤细胞对化疗药物的耐受性和疾病进展。