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催化吲哚生成靛蓝的细胞色素P450BM-3定向进化研究
被引量:
14
1
作者
李红梅
梅乐和
+1 位作者
URLACHER VLADA
SCHMID ROLF D
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2005年第7期630-635,共6页
以催化吲哚产生的靛蓝在630nm处具有特殊的吸收峰为高通量筛选指标,将来源于Bacillusmegaterium的细胞色素P450BM-3单加氧酶的基因序列用易错聚合酶链式反应进行定向进化,通过多轮突变,在原有的能产靛蓝的高活力突变酶的基础上成功获得...
以催化吲哚产生的靛蓝在630nm处具有特殊的吸收峰为高通量筛选指标,将来源于Bacillusmegaterium的细胞色素P450BM-3单加氧酶的基因序列用易错聚合酶链式反应进行定向进化,通过多轮突变,在原有的能产靛蓝的高活力突变酶的基础上成功获得了三个高于亲本酶的突变酶,突变酶的酶活分别是亲本酶的6.6倍(hml001),9.6倍(hml002)和5.3倍(hml003),并对突变酶的动力学参数进行了分析.突变酶DNA测序的结果表明,hml001含有一个有义氨基酸置换I39V,hml002含有三个有义氨基酸置换D168N,A225V,K440N,hml003含有一个有义氨基酸置换E435D,这些突变位点有些远离底物结合部位,有些位于底物结合部位.
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关键词
细胞色素P450BM-3
定向进化
靛蓝
易错聚合酶链式反应
催化活性
下载PDF
职称材料
定向进化细胞色素P450BM-3的研究
被引量:
1
2
作者
李红梅
yh
+2 位作者
梅乐和
Vlada Urlacher
Rolf D.Schmid
《生物加工过程》
CAS
CSCD
2006年第1期27-29,34,共4页
以来自于巨大芽孢杆菌的细胞色素P450BM-3为研究对象,采用随机突变和饱和定点突变定向进化技术对P450BM-3进行改造,通过突变体催化靛蓝显色的特性采用活性琼脂平板分析和96微孔板相结合的高通量筛选成功获得了几个具有更高催化性能的突...
以来自于巨大芽孢杆菌的细胞色素P450BM-3为研究对象,采用随机突变和饱和定点突变定向进化技术对P450BM-3进行改造,通过突变体催化靛蓝显色的特性采用活性琼脂平板分析和96微孔板相结合的高通量筛选成功获得了几个具有更高催化性能的突变体。
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关键词
定向进化
细胞色素P450BM-3
靛蓝
下载PDF
职称材料
题名
催化吲哚生成靛蓝的细胞色素P450BM-3定向进化研究
被引量:
14
1
作者
李红梅
梅乐和
URLACHER VLADA
SCHMID ROLF D
机构
浙江大学化学工程与生物工程系
institute of technical biochemistry university of stuttgart stuttgart
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2005年第7期630-635,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(20176050)
CSC-DAAD国家留学基金中德合作科技人员交流PPP项目
+2 种基金
浙江省科技计划项目(2004c33036)
国家教育部留学回国人员基金
浙江省留学回国人员基金~~
文摘
以催化吲哚产生的靛蓝在630nm处具有特殊的吸收峰为高通量筛选指标,将来源于Bacillusmegaterium的细胞色素P450BM-3单加氧酶的基因序列用易错聚合酶链式反应进行定向进化,通过多轮突变,在原有的能产靛蓝的高活力突变酶的基础上成功获得了三个高于亲本酶的突变酶,突变酶的酶活分别是亲本酶的6.6倍(hml001),9.6倍(hml002)和5.3倍(hml003),并对突变酶的动力学参数进行了分析.突变酶DNA测序的结果表明,hml001含有一个有义氨基酸置换I39V,hml002含有三个有义氨基酸置换D168N,A225V,K440N,hml003含有一个有义氨基酸置换E435D,这些突变位点有些远离底物结合部位,有些位于底物结合部位.
关键词
细胞色素P450BM-3
定向进化
靛蓝
易错聚合酶链式反应
催化活性
Keywords
cytochrome P450BM-3
directed evolution
indigo
effor-prone PCR
catalytic activity
分类号
Q7 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
定向进化细胞色素P450BM-3的研究
被引量:
1
2
作者
李红梅
yh
梅乐和
Vlada Urlacher
Rolf D.Schmid
机构
浙江大学化学工程与生物工程系
institute
of
technical
biochemistry
university
of
stuttgart
出处
《生物加工过程》
CAS
CSCD
2006年第1期27-29,34,共4页
基金
国家自然科学基金(30570411)
中德CSC-DAAD合作科技人员交流PPP项目
文摘
以来自于巨大芽孢杆菌的细胞色素P450BM-3为研究对象,采用随机突变和饱和定点突变定向进化技术对P450BM-3进行改造,通过突变体催化靛蓝显色的特性采用活性琼脂平板分析和96微孔板相结合的高通量筛选成功获得了几个具有更高催化性能的突变体。
关键词
定向进化
细胞色素P450BM-3
靛蓝
Keywords
directed evolution
cytochrome P450BM-3
indigo
分类号
Q814 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
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1
催化吲哚生成靛蓝的细胞色素P450BM-3定向进化研究
李红梅
梅乐和
URLACHER VLADA
SCHMID ROLF D
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2005
14
下载PDF
职称材料
2
定向进化细胞色素P450BM-3的研究
李红梅
yh
梅乐和
Vlada Urlacher
Rolf D.Schmid
《生物加工过程》
CAS
CSCD
2006
1
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职称材料
已选择
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参考文献
引证文献
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