人DC与黑色素瘤细胞融合疫苗体外诱导特异性抗肿瘤CTL

目的:探讨HLA-A2-的黑色素瘤细胞与HLA-A2+的树突状细胞(DC)融合后体外诱导Me-lan-A特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的作用及交叉抗原递呈的能力。方法:用PEG法将黑色素瘤细胞与DC融合,在含GM-CSF的RPMI1640完全培养基条件下继续培养24～48h,然后将融合细胞与Me-lan-A特异性T细胞共同培养,用细胞内细胞素染色法检测其诱导CTL的活性,流式细胞术分析T细胞的活化率。结果:从异体外周血分离的单核细胞在GM-CSF及IL-4条件下培养6d后,未成熟的DC能表达一定的CD80,CD83,CD86,HLA-DR和HLA-ABC等共刺激分子,而经TNF-浕,PGE-2及CD40L诱导成熟的DC,则这些分子的表达进一步上调。融合细胞体外活化Melan-A特异性T细胞的效率为16.72%±4.26%,阴性对照为0.21%±1.84%,阳性对照为28.60%±5.67%。融合细胞活化的CTL能有效地溶解HLA-A2的黑色素瘤细胞。结论:HLA-A2-的黑色素瘤细胞与HLA-A2+阳性的DC融合肿瘤疫苗,能在体外有效地交叉递呈MHC-I限制性肿瘤抗原,并诱导Melan-A特异性的CTL和有效地杀伤黑色素肿瘤细胞。

HLA-A2型人外周血MAGE-A10特异性T细胞的体外激发及功能检测

目的:探讨体外激发HLA-A2型人外周血单个核细胞(PBMC)中的MAG-E-A10(254-262)特异性T淋巴细胞及其功能检测方法。方法:分别采用肽段MAGE-A-10(254-262)直接刺激PBMC的Bulk Culture法和自体DC负载肽段MAGE-A10(254-262)刺激CD3+CD8+法,均经3次刺激进行体外扩增tetramer-MAGE-A10(254-262)阳性T细胞。以人流感病毒肽段flu-matrix(58-66)为阳性对照。Intracellular staining法检测其针对MAGE-A10(254-262)的穿孔素、颗粒酶B的分泌能力。结果:HLA-A2型PBMC用BuckCulture或DC负载肽段刺激CD3+CD8+法培养,激发的tetramer-flu阳性T细胞率均>10%,DC法激发的tetramer-flu阳性T细胞率显著高于Buck Culture,t=9.79,P<0.01。Bulk Culture法得到的阳性T细胞率分别为0.01%和0.02%,DC法则分别是0.05%和0.12%。Sorting得到的tetram-er-MAGE-A10(254-262)阳性T细胞,效靶比为10∶1时其特异性杀伤为46%,细胞针对MAGE-A10(254-262)分泌穿孔素、颗粒酶B的百分率分别为39%和87%。结论:从捐献的人血细胞中用自体DC负载肽段刺激CD3+CD8+法激发tetramer阳性T细胞的效率优于Bulk Culture法。