儿童斑秃与血微量元素的相关性研究

斑秃是一种突然发生的局限性斑片状脱发，可反复发生，但不形成瘢痕。其病因尚不清楚，目前多认为与精神紧张、劳累、自身免疫、遗传等因素有关。有研究发现斑秃患儿血中微量元素水平与正常儿童差异较大，可能是患儿发病的一个重要因素。本研究通过对暨南大学附属第一医院及广州市妇女儿童医疗中心等皮肤门诊96例斑秃患儿及100例正常儿童血清钙、铁、锌、铜、镁、铅、镉7种微量元素进行测定，比较斑秃患儿与正常儿童血中微量元素水平的差异，以探讨斑秃儿童发病是否与微量元素的异常存在一定关系。

人乳头瘤病毒6b型L1基因的克隆及表达

目的研究尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒(HPV)6b型晚期基因L1(HPV6bL1)在真核细胞内的表达。方法 PCR技术扩增原核重组质粒PQE40-HPV6bL1中L1基因,酶切后与真核表达质粒PEGFP-C1连接,转化入感受态大肠埃希菌DH5α,经扩增后酶切鉴定,挑选阳性克隆进行测序。以重组质粒PEGFP-HPV6bL1转染COS-7细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的表达,RT-PCR检测HPV6bL1 mRNA的表达。结果双酶切及测序鉴定显示,重组质粒中插入的目的基因片段及载体DNA大小、方向和插入位点均正确,PEGFP-HPV6bL1构建成功。重组体成功转染进COS-7细胞,在荧光倒置显微镜下可观察到细胞内有绿色荧光蛋白表达,RT-PCR检测到HPV6bL1 mRNA的表达。结论建立了HPV6bL1绿色荧光真核表达系统,为研究该蛋白质的功能奠定了基础。

人乳头瘤病毒6bL1双顺反子载体的构建及其在哺乳动物细胞内的表达

目的构建尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒6b型晚期基因（HPV6bLI）的双顺反子表达载体，并使其在哺乳动物细胞内表达，以期建立含有HPV6bLI的细胞模型。方法表达质粒pEGFP—HPV6bL1经双酶切纯化后与经过相同双酶切的真核表达质粒pIRES2-EGFP连接，酶切鉴定，挑选阳性克隆进行测序。重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP转染进小鼠成纤维细胞（NIH3T3），荧光显微镜下观察EGFP蛋白的表达，RT—PCR检测HPV6b L1 mRNA的生成。结果成功构建含HPV6bL1的重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP。重组体成功转染进NIH3T3细胞，并用G418筛选。同时荧光倒置显微镜下可观察到细胞内有绿色荧光蛋白的表达。进一步进行RT—PCR，检测到HPV6bL1mRNA的生成。结论成功构建携带HPV6bL1的重组体pIRES2-HPV6bL1-EGFP并转染入NIH3T3细胞。经荧光倒置显微镜观察及RT—PCR方法检测证明HPV6bLI在NIH3T3细胞内成功表达。