日本血吸虫二价DNA疫苗的免疫保护效果研究

目的 观察本课题组所构建日本血吸虫大陆株二价 DNA疫苗 VR10 12 - Sj GST- Sj31和VR10 12 - Sj GST- Sj32的免疫保护效果。方法 用纯化质粒免疫昆明鼠 :6 0只小鼠分为 5组 ,2个对照组的小鼠分别于股四头肌注射生理盐水 10 0μl或空质粒 VR10 12 10 0μg,3个实验组的小鼠则同法分别注射 VR10 12 - Sj GST、VR10 12 - Sj GST- Sj31和 VR10 12 - Sj GST- Sj32各 10 0 μg,每隔 3周免疫1次 ,共免疫 3次 ,以间接免疫荧光法观察 VR10 12 - Sj GST- Sj31、VR10 12 - Sj GST- Sj32在肌肉组织中的表达后 ,每只鼠经腹部感染 10条尾蚴 ,4 5 d后剖杀计数各小鼠成虫数及肝卵数 ,并用 EL ISA分析小鼠血清中的抗体。结果 EL ISA分析表明 ,第 3次免疫后小鼠出现特异性 Ig G抗体。与生理盐水组比较 ,3个实验组的减虫率分别为 33.90 %、33.90 %及 2 7.14 % (P <0 .0 1) ,减卵率分别为6 1.86 %、74 .88%及 6 8.87% (均为 P<0 .0 1) ,每雌肝减卵率分别为 4 4 .6 7%、5 9.4 0 %、5 4 .32 % (P<0 .0 1)。与 VR10 12 - Sj GST组相比 ,VR10 12 - Sj GST- Sj31和 VR10 12 - Sj GST- Sj32组的减卵率分别为34.19% (P<0 .0 1)、18.5 1% (P<0 .0 1) ,每雌肝减卵率为 2 6 .6 2 %、17.4 6 % (P<0 .0 1)。结论 DNA疫苗 VR10 12 -

重组日本血吸虫极低密度脂结合蛋白的抗原性及诊断价值的研究

目的 探讨重组日本血吸虫特异性极低密度脂结合蛋白 (SVLBP)的抗原性及其诊断价值。方法 SVLBP基因亚克隆入pQE - 30表达载体 ,克隆菌在IPTG诱导下表达重组蛋白 ;非变性条件下制备克隆菌裂解液 ,用亲和层析法纯化重组蛋白 ;用Westernblot鉴定其抗原性 ;纯化SVLBP重组蛋白免疫家兔获得抗血清 ;以SVLBP重组蛋白为抗原 ,ELISA法检测血吸虫感染者血清及健康人血清。结果 克隆菌在IPTG诱导下高表达SVLBP重组蛋白 ;该重组蛋白诱导家兔产生单特异抗体 ,抗体滴度为 1∶6 4 0 0 ;SVLBP重组蛋白与血吸虫病人血清有较强的反应 ;以该蛋白为抗原检测 36人份血吸虫感染者血清 ,阳性率为 83.3% ,5 0人份健康人血清 ,假阳性率为 2 % (1/5 0 ) ,10人份肺吸虫病人血清 ,1例阳性 ,交叉反应率为 10 % (1/10 )。结论 SVLBP重组蛋白有较好的抗原性 ,以该重组蛋白为抗原检测日本血吸虫病患者血清中特异性抗体 ,敏感性和特异性均较高 ,具有一定的诊断价值。

日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗的免疫保护效果研究

目的 :观察已构建日本血吸虫大陆株 31kDa组织蛋白酶BDNA疫苗VR1 0 1 2 Sj31及VR1 0 1 2 SjGST Sj31在BALB c小鼠体内的免疫保护效果。方法 :用纯化的空白质粒载体VR1 0 1 2、重组质粒VR1 0 1 2 Sj31及VR1 0 1 2 SjGST Sj31于股四头肌注射免疫BALB c鼠 :将 36只 6～ 8周龄BALB c鼠随机分为 3组 ,每组 1 2只 ,对照组 (A组 )注射空白质粒载体VR1 0 1 2 ,B组注射重组质粒VR1 0 1 2 Sj31 ,C组注射重组质粒VR1 0 1 2 SjGST Sj31。质粒剂量均为 1 0 0 μg ,每隔 2周免疫 1次 ,共免疫 3次 ,第 3次免疫后第 2 1天 ,每只鼠经腹部感染 1 0条尾蚴 ,4 2天后剖杀计数各小鼠成虫数和每克肝卵数 ,观察诱导产生的减虫和减卵效果 ,并用ELISA分析小鼠血清中的抗体。结果 :ELISA分析表明 ,第 3次免疫后小鼠出现特异性IgG抗体。与空白质粒对照组比较 ,2个实验组的减虫率分别为 2 5 0 %及 30 0 % (P <0 0 5 ) ,肝组织减卵率分别为 5 4 90 %及 6 9 74 % (P <0 0 0 1 ) ,每雌肝减卵率分别为 4 7 96 %、5 4 6 2 % (P <0 0 0 1 )。与B组相比 ,C组的肝组织减卵率为 32 92 % (P <0 0 0 1 ) ,每雌肝减卵率为 1 2 79% (P <0 0 5 )。结论 :DNA疫苗VR1 0 1 2 Sj31和VR1 0 1 2 SjGST Sj31能诱导小鼠产生一定水平的抗?

水牛感染血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库

目的 筛选新的有潜质的日本血吸虫保护性抗原分子编码基因。方法 用水牛感染血清对日本血吸虫(Schistosoma Japonicum,sj)成虫cDNA文库进行免疫筛选,将阳性克隆的插入片段进行PCR扩增和序列分析。结果 3轮筛选后,将7个阳性克隆经辅助噬菌体自动剪切并PCR扩增显示,插入的日本血吸虫cDNA片段大小在0.8-2.0 kb之间,选取其中4个经DNA测序分析,发现2个未曾报道过的日本血吸虫新基因,分别命名为sj-IB1和sj-Rho GTPase-like gene,并在Gene Bank登记注册。结论 水牛感染血清可识别日本血吸虫的特异性抗原分子,这些抗原分子的免疫保护作用值得进一步研究。

日本血吸虫Rho GTPase DNA疫苗及亚单位疫苗的构建和分析

目的 构建日本血吸虫大陆株Sj -RhoGTPase -like真核及原核表达重组质粒 ,并进行鉴定分析。 方法 用PCR法将Sj -RhoGTPase -like基因从已剪切阳性克隆中扩增出来 ,亚克隆至pcDNA3.1和pGEX -5X -3中 ,分别经PCR、双酶切、测序、SDS -PAGE和Westernblot等方法鉴定。 结果 PCR和测序均证明Sj -RhoGTPase -like基因疫苗构建成功 ,重组蛋白经SDS -PAGE电泳可观察到与预期分子量相应的条带 ,转印后可被水牛感染血清识别。 结论 成功构建了Sj -RhoGTPase -like基因的两种重组载体 。

日本血吸虫Rho GTPase DNA疫苗及重组蛋白疫苗免疫保护机制初探

目的 初步探讨日本血吸虫中国大陆株pcDNA3 .1 SjRhoGTPaseDNA疫苗、重组蛋白疫苗以及联合疫苗免疫的保护机制。 方法 将 pcDNA3 .1 SjRhoGTPaseDNA疫苗、重组蛋白疫苗分别及联合疫苗免疫昆明鼠后 ,分不同时间采集血清 ,以ELISA法测定总抗体及IgG亚类。 结果 重组蛋白疫苗及联合疫苗诱导产生的抗体效价较高 ,DNA疫苗及联合疫苗诱导产生的抗体以IgG2a为主 ,重组蛋白疫苗诱导产生的抗体以IgG1为主。 结论 Sj RhoGTPase基因DNA疫苗及联合疫苗主要诱生Th1型细胞免疫应答 。

日本血吸虫复合DNA疫苗的组织表达及免疫保护效果研究

目的 :观察本课题组所构建日本血吸虫大陆株复合DNA疫苗VR10 12 SjGST和VR10 12 SjGST Sj32在小鼠肌肉组织中的表达 ,并进行免疫保护效果测定。方法 :用纯化质粒免疫昆明鼠 :4 8只小鼠分为 4组 ,两个对照组的小鼠分别于股四头肌注射生理盐水 10 0 μl或空质粒VR10 12 10 0 μg,两个实验组的小鼠则同法分别注射VR10 12 SjGST和VR10 12 SjGST Sj32各 10 0 μg。末次免疫后 ,每组解剖两只小鼠 ,以间接免疫荧光法观察SjGST、Sj32在肌肉组织中的表达。其余每只鼠经腹部感染 10条尾蚴 ,4 5d后剖杀计数各小鼠成虫数和肝卵数。结果 :小鼠肌肉组织表达出抗原特异性蛋白质抗原分子。与生理盐水组比较 ,两个实验组的减虫率分别为 33.9%和及 2 7.14 %(均为P <0 .0 5 ) ,减卵率分别为 6 1.86 %和 6 8.87% (均为P <0 .0 0 1)。与VR10 12 SjGST组相比 ,VR10 12 SjGST Sj32组的减卵率为 18.5 1% (P <0 .0 5 )。结论 :DNA疫苗VR10 12 SjGST和VR10 12 SjGST Sj32能在组织中正常表达 ,能诱导小鼠产生一定水平的抗日本血吸虫感染保护作用 。

Characterization of acquired nutlin-3 resistant non-small cell lung cancer cells

Aim:The purpose of this manuscript is to study the potential characteristics of acquired nutlin-3 resistant non-small cell lung cancer cells(NSCLC).Nutlin-3 is an inhibitor of the murine-double minute 2 protein,the main negative regulator of wild type p53,of which several derivatives are currently in clinical development.Methods:A549 NSCLC cells were exposed to increasing concentrations of nutlin-3 for a period of 18 weeks.Monoclonal derivates were cultured,and the most resistance subclone was selected for whole transcriptome analysis.Gene set enrichment analysis was performed on differentially expressed genes between A549 nutlin-3 resistant cancer cells and the parental A549 p53 wild type cancer cells.Relevant findings were validated at the gene,protein and/or functional level.Results:All nutlin-3 resistant subclones acquired mutations in the TP53 gene,resulting in overexpression of the mutant p53 protein.The most resistant subclone was enriched for genes related to epithelial to mesenchymal transition(EMT),resulting in increased migratory and invasive potential.Furthermore,these cells were enriched in genes related to inflammation,tissue remodelling,and angiogenesis.Importantly,expression of several immune checkpoints,including PD-L1 and PD-L2,was significantly upregulated,and cisplatin-induced cell death was reduced.Conclusion:Transcriptome analysis of a highly nutlin-3 resistant A549 subclone shows the relevance of studying(1)resistance to standard of care chemotherapy;(2)secretion of immunomodulating chemo-and cytokines;(3)immune checkpoint expression;and(4)EMT and invasion in nutlin-3 resistant cancer cells in addition to acquired mutations in the TP53 gene.