日本血吸虫二价DNA疫苗的免疫保护效果研究

目的 观察本课题组所构建日本血吸虫大陆株二价 DNA疫苗 VR10 12 - Sj GST- Sj31和VR10 12 - Sj GST- Sj32的免疫保护效果。方法 用纯化质粒免疫昆明鼠 :6 0只小鼠分为 5组 ,2个对照组的小鼠分别于股四头肌注射生理盐水 10 0μl或空质粒 VR10 12 10 0μg,3个实验组的小鼠则同法分别注射 VR10 12 - Sj GST、VR10 12 - Sj GST- Sj31和 VR10 12 - Sj GST- Sj32各 10 0 μg,每隔 3周免疫1次 ,共免疫 3次 ,以间接免疫荧光法观察 VR10 12 - Sj GST- Sj31、VR10 12 - Sj GST- Sj32在肌肉组织中的表达后 ,每只鼠经腹部感染 10条尾蚴 ,4 5 d后剖杀计数各小鼠成虫数及肝卵数 ,并用 EL ISA分析小鼠血清中的抗体。结果 EL ISA分析表明 ,第 3次免疫后小鼠出现特异性 Ig G抗体。与生理盐水组比较 ,3个实验组的减虫率分别为 33.90 %、33.90 %及 2 7.14 % (P <0 .0 1) ,减卵率分别为6 1.86 %、74 .88%及 6 8.87% (均为 P<0 .0 1) ,每雌肝减卵率分别为 4 4 .6 7%、5 9.4 0 %、5 4 .32 % (P<0 .0 1)。与 VR10 12 - Sj GST组相比 ,VR10 12 - Sj GST- Sj31和 VR10 12 - Sj GST- Sj32组的减卵率分别为34.19% (P<0 .0 1)、18.5 1% (P<0 .0 1) ,每雌肝减卵率为 2 6 .6 2 %、17.4 6 % (P<0 .0 1)。结论 DNA疫苗 VR10 12 -

日本血吸虫新抗原基因的筛选、克隆、表达和免疫效果研究

为了寻找日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Sj) 新的疫苗候选基因并进行免疫效果研究,用Sj雌虫抗原免疫家兔制备血清,对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选,将获得的新基因(命名为Sj-F1,GenBank登录号为AY261995) 克隆入原核表达载体pTWIN1和真核表达载体pcDNA3,经PCR、限制性酶切筛选和鉴定阳性重组子. 将pTWIN1/Sj-F1质粒转化大肠杆菌ER2566,在低温和低IPTG浓度下诱导表达可溶性重组融合蛋白(rSj-F1/intein2),并经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blot)分析鉴定. 将pcDNA3/Sj-F1质粒转化大肠杆菌ER2502,大量制备DNA疫苗. 用重组融合蛋白和DNA疫苗免疫小鼠,末次免疫后2周用Sj尾蚴进行攻击感染. 感染后42天剖杀冲虫,计算减虫率和减卵率. 感染前采血用ELISA法检测抗体. 免疫保护效果测定显示:重组蛋白疫苗以FCA作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经粘膜免疫分别获得了28.07%、24.69%的减虫率和48.30%、46.38%的减卵率;DNA疫苗(pcDNA3/Sj-F1)单独免疫获得了18.47%的减虫率和35.06%的减卵率;用DNA疫苗启动免疫后用重组蛋白疫苗经皮下加强免疫,减虫率和减卵率分别提高到了40.42%和56.17%;用DNA疫苗启动免疫后用重组蛋白疫苗经黏膜加强免疫,减虫率和减卵率增高更明显,分别提高到了42.38%和62.

噬菌体表达短肽模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的研究

目的 从噬菌体随机肽库中筛选模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的噬菌体克隆 ,并探讨其免疫保护效果。方法 用紫外线致弱尾蚴免疫兔血清IgG筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体外壳蛋白Ⅲ表达的随机 7肽库 ,三轮免疫筛选后获得的噬菌体克隆经皮下免疫小鼠 3次 ,攻击感染 45d后剖杀 ,观察减虫和减卵效果。结果 经三轮筛选 ,特异性结合的噬菌体富集增加了 10 0多倍 ,随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA测定 ,有 2 2个克隆能与致弱尾蚴免疫兔血清IgG特异性反应。混合噬菌体克隆免疫小鼠试验的减虫率与减卵率分别为 33.5 7%和 5 6 .0 7% (P均 <0 .0 0 1)。结论 采用噬菌体随机肽库技术可获得模拟致弱尾蚴特异性抗原表位的短肽分子 。

日本血吸虫新基因SjF1的克隆、表达及免疫保护效果研究

目的 构建日本血吸虫中国大陆株SjF1原核表达重组质粒,并进行免疫保护效果测定。方法 用聚合酶链反应(PCR)法将SjF1基因从已剪切阳性克隆中扩增出来,克隆入原核表达载体pTWIN1上intein2的N端,经PCR和限制性酶切筛选阳性重组子。将阳性重组子转化大肠杆菌,在低温和低IPTG浓度下诱导表达可溶性重组融合蛋白。经鉴定后分别以FCA作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经黏膜免疫昆明鼠,观察诱导产生的减虫和减卵效果。感染前采血和唾液用ELISA法检测抗体。结果 成功克隆并表达了rSjF1。rSjF1以FCA作佐剂经皮下免疫获得了29.92％的减虫率和51.08％的减卵率;rSjF1以壳聚糖作佐剂经滴鼻免疫获得了25.74％的减虫率和44.04％的减卵率。结论 获得了rSjF1,该蛋白以FCA作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经黏膜免疫均能诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力。

重组血吸虫GST-Sj31蛋白对小鼠的免疫保护性研究

目的 在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫组织蛋白酶 B(Sj31) b、c片段蛋白 ,并对表达产物进行免疫保护效果测定。方法 分别将重组质粒 p GEX- Sj31b,p GEX- Sj31c转化感受态大肠杆菌ER2 5 6 6 ,在 IPTG诱导下进行表达 ,表达产物 GST- Sj31b、GST- Sj31c蛋白分别免疫小鼠 ,免疫第 3次后进行攻击感染 ,观察其免疫保护效果。结果 在 IPTG诱导下 ,表达载体中的 Sj GST基因与重组 Sj31b和 Sj31c基因获得了高效融合表达 ,用这两种融合蛋白免疫小鼠 ,分别诱导产生了 2 2 .71%和 13.6 %的减虫率 ;减卵率分别为 5 4 .2 1%及 4 5 .0 1%。结论 重组质粒 p GEX- Sj31b,p GEX- Sj31c可在大肠杆菌中高效表达 ,表达的融合蛋白 GST- Sj31b能诱导小鼠产生一定程度的抗 Sj保护性免疫力 ,而 GST- Sj31c的减虫率为 13.6 %。

两种佐剂对日本血吸虫重组抗原SjGST-Sj32保护效果的影响

目的比较弗氏完全佐剂（FCA）与单磷脂A（MPL）的免疫增强作用，为提高重组SjGST-Sj32（SjGST-Sj32）的疫苗效果提供依据。方法SjGST-Sj32加弗氏完全佐剂（SjGST-Sj32＋FCA）或单磷脂A（SjGST-Sj32＋MPL）免疫小鼠3次，ELISA法检测抗体水平，用减虫率及减卵率表示保护性作用。结果与PBS对照组相比，SjGST-Sj32加FCA或MPL，免疫BALBC／c小鼠减虫率分别为48．8％（P＜0．01）和44．1％（P＜0．01）；每克肝卵（LEPG）减少率分别为59．4％（P＜0．01）和46．2％（P＜0．01）；SjGST-Sj32＋FCA组抗体滴度达1：204800（P＜0．05），而SjGST-Sj32＋MPL组抗体滴度为1：51200（P＜0．05）。结论FCA和MPL均可以增强对SjGST-Sj32免疫小鼠的抗感染保护性免疫力；FCA也可增强SjGST-Sj32诱导小鼠抗生殖免疫，而MPL似不具明显增强SjGST-Sj32的抗生殖免疫作用。佐剂MPL在提高免疫小鼠体液免疫应答方面稍逊于经典佐剂FCA。

日本血吸虫Mf1和胞质氨基肽酶基因的亚克隆表达与免疫保护效果测定

目的 在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)Mf1蛋白和胞质氨基肽酶 (cytosolaminopeptidase ,CA) ,并对表达产物进行免疫保护效果测定。 方法 将SjMf1基因和SjCA基因亚克隆至 pGEX - 5X - 3载体 ,转化入感受态大肠杆菌ER2 688,在IPTG诱导下进行表达 ,表达产物免疫小鼠 ,免疫用抗原剂量为 50 μg/次 /鼠 ,免疫 3次后进行攻击感染 ,观察诱导产生的减虫效果。结果 在IPTG诱导下 ,表达载体中的SjGST基因与重组的SjMf1基因和SjCA基因在大肠杆菌中获得了高效表达 ,形成SjGST -Mf1和SjGST -CA融虫蛋白 ,用这两种融合蛋白免疫小鼠 ,分别诱导产生了 39 1 5 %和 2 6 57%的减虫率。结论 SjMf1和SjCA基因亚克隆至pGEX - 5X - 3载体后可在大肠杆菌中高效表达 。

核酸疫苗pcDNA3.1/SjTs-1粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染保护力的研究

目的 探讨日本血吸虫核酸疫苗 pc DNA3.1/ Sj Ts- 1粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。方法 小鼠随机分为 5组 ,每组 12只 ,包括单磷脂 A(MPL)、pc DNA3.1、pc DNA3.1+MPL、pc DNA3.1/ Sj Ts- 1和 pc DNA3.1/ Sj Ts- 1+MPL 组。滴鼻免疫。第 3次免疫后 2周 ,每只经腹部感染 (40± 1)条尾蚴。 4 5 d宰杀动物 ,以观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前尾静脉采血和收集粪便 ,EL ISA检测血清内特异性 Ig A和 Ig G及粪内 s Ig A水平。结果 pc DNA3.1/ Sj Ts- 1滴鼻免疫可诱导小鼠产生全身和粘膜免疫应答 ,且疫苗加佐剂组诱导小鼠产生的抗体水平高于不加佐剂组。 pc DNA3.1/ Sj Ts- 1和 pc DNA3.1/ Sj Ts- 1加 MPL滴鼻免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为2 4 .98%和 2 5 .5 7% ,减卵率分别为 6 1.4 4 %和 6 4 .5 9%。两者的减虫率和减卵率差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 pc DNA3.1/ Sj Ts- 1滴鼻免疫可诱导小鼠产生全身和粘膜免疫应答及部分抗攻击感染的保护力。

日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗的免疫保护效果研究

目的 :观察已构建日本血吸虫大陆株 31kDa组织蛋白酶BDNA疫苗VR1 0 1 2 Sj31及VR1 0 1 2 SjGST Sj31在BALB c小鼠体内的免疫保护效果。方法 :用纯化的空白质粒载体VR1 0 1 2、重组质粒VR1 0 1 2 Sj31及VR1 0 1 2 SjGST Sj31于股四头肌注射免疫BALB c鼠 :将 36只 6～ 8周龄BALB c鼠随机分为 3组 ,每组 1 2只 ,对照组 (A组 )注射空白质粒载体VR1 0 1 2 ,B组注射重组质粒VR1 0 1 2 Sj31 ,C组注射重组质粒VR1 0 1 2 SjGST Sj31。质粒剂量均为 1 0 0 μg ,每隔 2周免疫 1次 ,共免疫 3次 ,第 3次免疫后第 2 1天 ,每只鼠经腹部感染 1 0条尾蚴 ,4 2天后剖杀计数各小鼠成虫数和每克肝卵数 ,观察诱导产生的减虫和减卵效果 ,并用ELISA分析小鼠血清中的抗体。结果 :ELISA分析表明 ,第 3次免疫后小鼠出现特异性IgG抗体。与空白质粒对照组比较 ,2个实验组的减虫率分别为 2 5 0 %及 30 0 % (P <0 0 5 ) ,肝组织减卵率分别为 5 4 90 %及 6 9 74 % (P <0 0 0 1 ) ,每雌肝减卵率分别为 4 7 96 %、5 4 6 2 % (P <0 0 0 1 )。与B组相比 ,C组的肝组织减卵率为 32 92 % (P <0 0 0 1 ) ,每雌肝减卵率为 1 2 79% (P <0 0 5 )。结论 :DNA疫苗VR1 0 1 2 Sj31和VR1 0 1 2 SjGST Sj31能诱导小鼠产生一定水平的抗?

佐剂FCA与Quil A对rGST-Sj32的免疫增强作用的比较

目的 比较弗氏完全佐剂 (FCA)与皂素的纯化物 Quil A的免疫增强作用 ,进一步提高重组抗原 r GST- Sj32的免疫效果。 方法 r GST- Sj32 +FCA或 Quil A免疫 NIH小鼠 3次 ,EL ISA法检测抗体水平 ,用减虫率及减卵率表示保护效果。 结果 与 PBS对照组比较 ,r GST- Sj32 +FCA免疫小鼠减虫率为 42 .9% ,每克肝卵 (L EPG)减少率 5 1.0 % ,每雌肝卵 (L EPF)减少率为 2 3.9% ,抗体滴度达 1∶ 2 5 6 0 0。r GST- Sj32 +Quil A免疫小鼠减虫率为 46 .0 % ,L EPG减少率39.4% ,L EPF减少率为 8.5 % ,抗体滴度达 1∶ 5 12 0 0。 结论 FCA和 Quil A均可增强 r GST- Sj32免疫小鼠的抗感染保护性免疫力 ;FCA亦可增强 r GST- Sj32诱导小鼠抗生殖免疫 ,Quil A无增强抗生殖免疫的作用。

肝细胞癌中MAPK和Stat3磷酸化与c-fos和c-jun蛋白表达的关系

目的:探讨肝细胞癌中MAPK和Stat3磷酸化与c-fos和c-jun蛋白表达的关系。方法:利用SP免疫组织化学技术检测55例肝细胞癌(hepatocellulancarcinoma,HCC)及其癌旁肝组织中p42/44MAPK、p-Stat3、c-fos和c-jun蛋白的表达。结果:HCC组织中p42/44MAPK、p-Stat3、c-fos和c-jun蛋白的阳性率和阳性信号强度显著高于癌旁肝组织(P<0.01);在HCC和癌旁肝组织中p42/44MAPK和c-fos蛋白表达强度呈正相关;p-Stat3与c-jun蛋白亦呈正相关;但p42/44MAPK和p-Stat3信号强度之间均无明显相关性。结论:本资料提示Ras/Raf/MAPK和JAKs/Stat3信号级联异常可能在细胞恶性转化中均起重要作用;癌旁组织中呈p42/44MAPK和p-Stat3阳性的肝细胞可能是具有恶性潜能的癌前细胞群,推测MAPK和Stat3激活可能是HCC发生的早期事件。

水牛感染血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库

目的 筛选新的有潜质的日本血吸虫保护性抗原分子编码基因。方法 用水牛感染血清对日本血吸虫(Schistosoma Japonicum,sj)成虫cDNA文库进行免疫筛选,将阳性克隆的插入片段进行PCR扩增和序列分析。结果 3轮筛选后,将7个阳性克隆经辅助噬菌体自动剪切并PCR扩增显示,插入的日本血吸虫cDNA片段大小在0.8-2.0 kb之间,选取其中4个经DNA测序分析,发现2个未曾报道过的日本血吸虫新基因,分别命名为sj-IB1和sj-Rho GTPase-like gene,并在Gene Bank登记注册。结论 水牛感染血清可识别日本血吸虫的特异性抗原分子,这些抗原分子的免疫保护作用值得进一步研究。

日本血吸虫Rho GTPase DNA疫苗及亚单位疫苗的构建和分析

目的 构建日本血吸虫大陆株Sj -RhoGTPase -like真核及原核表达重组质粒 ,并进行鉴定分析。 方法 用PCR法将Sj -RhoGTPase -like基因从已剪切阳性克隆中扩增出来 ,亚克隆至pcDNA3.1和pGEX -5X -3中 ,分别经PCR、双酶切、测序、SDS -PAGE和Westernblot等方法鉴定。 结果 PCR和测序均证明Sj -RhoGTPase -like基因疫苗构建成功 ,重组蛋白经SDS -PAGE电泳可观察到与预期分子量相应的条带 ,转印后可被水牛感染血清识别。 结论 成功构建了Sj -RhoGTPase -like基因的两种重组载体 。

日本血吸虫尾蚴抗原免疫血清筛选成虫cDNA文库与新基因分析

目的 筛选与日本血吸虫尾蚴抗原有共同免疫原性的日本血吸虫成虫抗原分子 ,为血吸虫病诊断和疫苗研究提供新的候选分子。 方法 利用日本血吸虫尾蚴可溶性抗原免疫兔血清筛选日本血吸虫 (Schistosomajapon icum ,Sj)成虫cDNA文库 ,对阳性克隆的插入片段进行PCR扩增和序列分析。 结果 共筛选出 13个阳性克隆 ,PCR扩增出特异的插入片段。测序分析获 4个新基因SjCAI、SjCA、SjCAI 2和SjCAI 3 (登录号分别为AF495 883、AF5 15 83 4、AY1180 86和AY12 93 0 3 ) ,分别编码 3 5 3、161、13 7和 72个氨基酸的蛋白。SjCAI蛋白含 6个DNA结合锌指 ,与原肠胚锌指蛋白XLCGF48.2有一定同源性 ;SjCA蛋白、SjCAI 2蛋白和SjCAI 3蛋白含N 糖基化和磷酸化位点。 结论 筛选Sj成虫cDNA文库获得了新的基因序列。

单活性结构域T7核酸酶Ⅰ的制备及性质研究

T7核酸酶Ⅰ(T7EⅠ)是一种能特异识别并拆分重组中间体Holliday Junction(HJ)的多功能核酸酶,该酶不仅能特异识别和拆分HJ,而且能随机切刻双链DNA,特异识别并切割双链DNA中的切刻和单碱基错配位点.构建了两种原核表达载体用于表达MBP和His-tag融合的两种T7EⅠ突变体,MBP-T7EⅠ(E20K)和His6-T7EⅠ(E65K).每一种融合蛋白形成的同源二聚体不具有核酸酶活性,通过共表达或两种蛋白质共变性复性、双标签亲和纯化,最终获得具有单个活性结构域的T7EⅠ异源二聚体(T7EⅠ-SAD).以pUC(AT)和pUC19为底物测试T7EⅠ-SAD的HJ拆分活性、随机切刻活性和切刻位点切割活性,结果显示,T7EⅠ-SAD可特异识别并切刻HJ结构,但丧失了同时引入两个切刻位点的能力,其对pUC(AT)的特异切刻活力和对pUC19的随机切刻活力与野生酶相当.逐级变性梯度洗脱实验显示,T7EⅠ-SAD的稳定性与野生型酶接近,二聚体解离需要5.0～6.0mol/L尿素或1.75～2.0mol/L盐酸胍;凝胶阻滞实验表明T7EⅠ-SAD具备与HJ结构特异结合的能力.为具有细胞毒性蛋白的表达提供了一种新策略,同时提供了一种简便直观的蛋白质二聚体稳定性测试方法.

日本血吸虫抗原的表位模拟肽筛选及免疫保护性

目的 筛选日本血吸虫雄虫抗原的表位模拟肽 ,并探讨其诱导小鼠抗日本血吸虫的免疫保护性。 方法 用日本血吸虫可溶性雄虫抗原的IgG对噬菌体随机 1 2肽库进行亲和筛选。 3轮筛选后 ,经Dot-ELISA检测获得阳性噬菌体克隆 ,并用混合特异性噬菌体克隆免疫小鼠及进行抗日本血吸虫免疫保护性分析。 结果 1 8个特异性噬菌体克隆均显示有抗原性 ,其噬菌体混合克隆免疫诱导小鼠产生了特异性抗体 ,以及 31 72 %的减虫率和 51 54%的减卵率 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 0 1 )。 结论 筛选噬菌体肽库获得的日本血吸虫可溶性雄虫抗原的表位模拟肽分子能诱导小鼠产生抗日本血吸虫的保护性免疫。

日本血吸虫核酸疫苗pcDNA3.1/SjMf1粘膜免疫小鼠的保护力研究

目的 探讨日本血吸虫核酸疫苗pcDNA3 1/SjMf1粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。 方法 按常规方法构建pcDNA3 1/SjMf1。粘膜免疫采用滴鼻方法。供试小鼠随机分为 5组 ,每组 12只 ,包括MPL、pcDNA3 1、pcDNA3 1+MPL、pcDNA3 1/SjMf1和pcDNA3 1/SjMf1+MPL组。第 3次免疫后 2周 ,每只经腹部感染 ( 4 0± 1)条尾蚴。45d宰杀小鼠 ,以观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前尾静脉采血的收集粪便 ,ELISA检测血清内特异性IgA和IgG及粪内sIgA水平。 结果 pcDNA3 1/SjMf1滴鼻免疫可诱导小鼠血清内特异性IgA和IgG及粪内sIgA水平。pcDNA3 1/SjMf1和pcDNA3 1/SjMf1加MPL滴鼻免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为 2 7 97%和 3 4 75 % ,减卵率分别为 3 8 64 %和 43 3 7%。二者的减虫率和减卵率差异无显著性 (P >0 0 5 )。 结论 pcDNA3

IL-12对日本血吸虫重组SjGST-Sj32蛋白保护性免疫效果的影响

为进一步提高重组 Sj GST- Sj32 (r Sj GST- Sj32 )的免疫保护作用 ,用 IL- 12作为佐剂进行免疫增强效果的观察。在 0、2、6周用 r Sj GST- Sj32经皮下免疫小鼠 3次 ,攻击感染后 1、3、5、7、9d经腹腔注射佐剂 IL- 12 ,用减虫率及减卵率表示保护性免疫力。结果与 PBS对照组相比 ,r Sj GST- Sj32 /IL- 12组减虫率为 38.2 % (P<0 .0 1) ,每克肝卵数 (L EPG)减少率为 75 .1% (P<0 .0 1) ,每雌肝卵数 (L EPF)减少率为 72 .9% (P<0 .0 1) ;与单独注射 r Sj GST- Sj32组相比 ,r Sj GST- Sj32 /IL- 12组减虫率为 2 6 .8% (P<0 .0 5 ) ,L EPG减少率为 72 .5 % (P<0 .0 1) ,L EPF减少率为6 6 .2 % (P<0 .0 5 )。表明 IL- 12作为佐剂 ,可同时增强 r Sj GST- Sj32诱导小鼠产生的抗感染和抗生殖免疫保护力。

日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗与IL-4真核表达质粒联合免疫诱导小鼠保护性的研究(英文)

目的 观察日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗与IL 4真核表达质粒联合免疫小鼠的效果。 方法 将小鼠IL 4基因PCR扩增片段克隆入真核表达载体pcDNA3以构建重组表达质粒。小鼠分为 4组 ,每组 12只 ,实验组 (A)每鼠肌注组织蛋白酶BDNA疫苗和IL 4表达质粒各 10 0 μg ,同时设立组织蛋白酶BDNA疫苗对照组 (B)、IL 4表达质粒对照组 (C)和空载体对照组 (D) ,共免疫 3次。 2周后用免疫组化检测表达质粒在小鼠肌细胞的表达 ,3周后经皮肤攻击感染小鼠 40± 1条日本血吸虫尾蚴。计算减虫和减卵率 ,观察免疫保护性。 结果 重组IL 4质粒和组织蛋白酶BDNA疫苗均在小鼠肌细胞表达。用重组IL 4质粒和组织蛋白酶BDNA疫苗联合免疫诱导小鼠产生 43 .2 0 %的减虫率和 76.63 %的减卵率 ,与组织蛋白酶BDNA疫苗单独免疫比较差异均有显著性 (P <0 .0 0 1,P <0 .0 5 )。 结论 联合IL 4表达质粒免疫可能提高日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗的抗血吸虫保护性免疫。

日本血吸虫CAI基因的亚克隆表达与免疫保护效果研究

目的 克隆和表达日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)CAI基因 ,并对表达产物进行免疫保护效果测定 ,评价其作为血吸虫疫苗候选分子的潜能。 方法 将SjCAI基因亚克隆至pGEX 5X 3载体 ,转化入感受态大肠杆菌ER2 56 6 ,在异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导下进行表达 ,用表达产物免疫小鼠 ,并设分别注射等体积的弗氏完全佐剂和PBS的两组对照组 ,观察免疫保护效果。 结果 在IPTG诱导下 ,表达载体中的SjGST基因与重组的SjCAI基因在大肠杆菌中获得了高效融合表达 ,将其免疫小鼠 ,诱导产生了 2 9.87%的减虫率和 6 3.71 %的减卵率。 结论 SjCAI基因亚克隆至pGEX 5X 3载体后可在大肠杆菌中高效表达 。