循环miR⁃124作为铅神经毒性标志物的灵敏性、稳定性和组织特异性研究

目的:验证循环微小核糖核酸(microRNA,miRNA)⁃124的稳定性、组织特异性及其检测铅神经毒性的灵敏性,为循环miR⁃124用于铅神经毒性评价提供依据。方法:采用Zea⁃Longa线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,采集血液样本离心、分装后立即检测或在室温、2~8℃和-70~-90℃条件下储存不同时间后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real⁃time polymerase chain reaction,RT⁃qPCR)检测miR⁃124的表达;分别使用对乙酰氨基酚(1250 mg/kg)、异丙肾上腺素(2.5 mg/kg)和庆大霉素(80 mg/kg)建立大鼠肝毒性、心脏毒性和肾毒性模型,采集血液样本检测并比较造模前后循环miR⁃124的变化;使用醋酸铅(300、600 mg/kg)建立大鼠神经毒性模型,采用酶联免疫吸附测定方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测白细胞介素(interleukin,IL)⁃10、IL⁃1β和肿瘤坏死因子⁃α(tumor necrosis factorα,TNF⁃α)的变化,比较检测到细胞因子和循环miR⁃124含量变化的时间评估其灵敏性。结果:以新鲜血液样本作为对照,血液样本室温保存6 h,2~8℃保存24 h,-70~-90℃保存36 d以及3次冻融后循环miR⁃124仍保持稳定,稳定性可以支持实验室需求;循环miR⁃124在大鼠肝毒性、心脏毒性和肾毒性模型中均无明显改变,具有良好的组织特异性;与细胞因子相比,循环miR⁃124可以更灵敏地检测铅暴露引起的神经炎症。结论:循环miR⁃124具有良好的稳定性、组织特异性和灵敏性,可作为评价铅神经毒性的潜在的生物标志物。

基于4%中性甲醛固定肝组织的大鼠肝微核实验方法的建立与验证

目的建立并验证基于4%中性甲醛固定肝组织制备肝细胞的大鼠肝微核实验(LMNT)方法(甲醛固定-LMNT法)。方法(1)SD大鼠分为雌性和雄性组,然后分别随机分为溶剂对照组和肝微核阳性化合物N-亚硝基二乙胺(DEN)12.5 mg·kg^(-1)组,每组5只,分别ig给予生理盐水和DEN,每天1次,连续14 d后取肝组织,同时用胶原酶消化-LMNT法和甲醛固定-LMNT法检测微核化肝细胞数量和处于有丝分裂期肝细胞数,分别计算肝细胞微核率和有丝分裂指数,肝细胞微核率>0.07%判定为阳性结果。(2)雄性SD大鼠分为喹啉(30,60和120 mg·kg^(-1))组、N-亚硝基吡咯烷(NPYR,25,50和100 mg·kg^(-1))组、各自溶剂对照组(NPYR,去离子水;喹啉,玉米油)及阳性对照DEN(12.5 mg·kg^(-1))组,每组5~6只,连续ig 15 d。每日记录体重,实验结束取肝记录肝总重,计算肝系数。自动生化分析仪检测肝功能相关血清生化指标谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性和血清总胆红素(T-BIL)、直接胆红素(D-BIL)的水平。采用胶原酶消化-LMNT法和甲醛固定-LMNT法测定肝细胞微核率,用外周血微核实验和肝彗星实验评价喹啉和NPYR遗传毒性。结果(1)与各自溶剂对照组的肝细胞微核率(0.069%和0.030%)相比,甲醛固定-LMNT法测得的DEN组雄性大鼠肝细胞微核率为1.10%,雌性大鼠为0.82%,均显著升高(P<0.05);与各自溶剂对照组(0.060%和0.030%)相比,胶原酶消化法-LMNT法测得的DEN组雄性大鼠肝细胞微核率为1.45%,雌性大鼠为0.46%,均显著升高(P<0.05),判定为阳性。2种方法中雄性大鼠的肝细胞微核率均显著高于雌性(P<0.05)。与各自溶剂对照组相比,2种方法测得的DEN组雄性和雌性大鼠肝细胞有丝分裂指数均无明显差异。(2)与溶剂对照组相比,NPYR 50和100 mg·kg^(-1)组大鼠体重在ig第7~14天显著降低(P<0.01),DEN组在ig第8~14天显著降低(P<0.01);喹啉120 mg·kg^(-1)组大鼠在ig第4~14天显著降低(P<0.01),DEN组在ig第10~14天显著降低(P<0.05)。与溶剂对照组相比,NPYR 100 mg·kg^(-1)组(P<0.01)和DEN组(P<0.05)的肝重和肝系数均显著降低;喹啉60和120 mg·kg^(-1)组肝重(P<0.01)和肝系数(P<0.05)均显著增加。与溶剂对照组相比,DEN组大鼠血清T-BIL水平显著升高(P<0.01),NPYR 100 mg·kg^(-1)组GPT、GOT活性和D-BIL、T-BIL水平均显著升高(P<0.01),NPYR 25,50 mg·kg^(-1)和喹啉各剂量组则均无显著差异。甲醛固定-LMNT法测得的NPYR组肝细胞微核率较胶原酶消化-LMNT法略高,均判定为阳性;与溶剂对照组相比,2种方法测得的NPYR组肝细胞微核率均显著增加(P<0.05),喹啉组结果相当,均判定为阳性;2种方法测得的喹啉组肝细胞微核率均显著增加(P<0.05)。2种方法测得的NPYR和喹啉组肝细胞微核率相关性较好(R2分别为0.8614和0.9279)。NPYR组外周血微核实验为阴性,彗星实验结果为阳性;喹啉组外周血微核实验和彗星实验结果均为阴性。结论初步建立并验证了甲醛固定-LMNT法,且该方法检测肝致癌物的灵敏度与胶原酶-LMNT法相近。

病毒载体遗传毒性评价方法研究进展

随着基因治疗产品逐渐进入市场,迫切需要建立病毒载体介导的遗传毒性评价方法。目前应用广泛的病毒载体主要有2种:慢病毒载体和腺相关病毒载体。慢病毒载体能够稳定整合到宿主基因组中;而腺相关病毒载体基因组在宿主细胞核中主要以附加体形式存在,仍能以低频率随机整合到宿主细胞基因组中,其整合方式包括随机整合和靶向整合。本文对已有的病毒载体介导的遗传毒性评价方法,包括脱靶修饰的全基因组分析、整合位点分析、核型分析和评估细胞转化潜力试验等进行综述,并对建立准确快速的病毒载体介导的遗传毒性的评价体系予以展望,以期为进一步完善和研发新的病毒载体遗传毒性评价方法提供参考。

单笼和配对饲养对食蟹猴血液学和血清生化、行为学和免疫应激的影响

目的 考察食蟹猴单笼和配对饲养对于动物的血液学和血生化、行为学和免疫应激指标的影响。方法 取约3岁食蟹猴,雌雄各4只,分别单笼和同性别配对饲养后,于适应期、单笼饲养第14天和第21天、配对饲养第14天和第21天采集动物血样进行血液学、血清生化和免疫应激指标检测;于单笼饲养第14~21天和配对饲养第14~21天进行行为学观察。结果 单笼和配对饲养食蟹猴的血液学和免疫应激指标均无明显差异;血清生化方面,与基础值比较食蟹猴配对饲养后的总胆红素(TBIL)有显著性降低,单笼饲养时的乳酸脱氢酶(LDH)降低明显;配对饲养后食蟹猴的正常行为和积极行为分别增加了27.93%和86.10%,异常行为减少26.31%。结论 单笼饲养和配对饲养对食蟹猴的血液学及免疫应激指标无明显影响;单笼饲养时动物LDH降低,配对饲养时动物TBIL降低,但均在正常背景值范围内;配对的饲养方式能有效改善食蟹猴的异常行为,提高动物福利。

猴椅保定训练对恒河猴应激的影响

目的考察恒河猴猴椅保定30 min连续5次适应性对应激激素水平的影响。方法约3岁恒河猴,雌雄各15只,分3组,每组10只,雌雄各半进行猴椅保定适应性训练,每间隔1 d训练1次,每次训练30 min。组1:不进行适应性训练组,组2:单纯适应性训练组,组3:给予零食和安抚训练组。共训练5次,每次训练结束对3组所有动物采血分析。结果与组1相比,组2和组3在多次猴椅保定适应性训练后可见猴血清皮质酮(CROT)显著性降低(P<0.05或P<0.01),组3的猴β-内啡肽(β-EP)显著降低(P<0.05或P<0.01),组3于第1和第5次适应性训练后5-羟色胺(5-HT)升高(P<0.01)。结论进行猴椅保定的适应性训练能显著降低恒河猴的应激压力,让动物趋于习惯或适应坐猴椅保定的操作。在适应性训练中,给予正向强化的训练方式让受试者在减少应激和攻击性表现更显著,适应性保定训练3~4次就可以让应激压力降到恒定水平。

液相色谱-串联质谱法测定SD大鼠全血中新型亲环蛋白D抑制剂RN-0001浓度

建立了液相色谱-串联质谱法测定新型亲环蛋白D抑制剂RN-0001在SD大鼠全血中的浓度。样品前处理采用简单的蛋白沉淀法,色谱分离在Gemini C18110,色谱柱(50 mm×2 mm,5μm)上进行,以含10 mmol/L乙酸铵和0.1%甲酸的水溶液作为流动相A,含0.1%甲酸的甲醇溶液作为流动相B,在0.8 mL/min流速下梯度洗脱。待测物RN-0001和内标环孢菌素A的检测采用正离子电喷雾多反应监测模式,其检测离子对分别为m/z 645.4/156.2和m/z 601.8/156.1。RN-0001在30.0 ng/mL~30.0μg/mL浓度范围内线性关系良好(r 2>0.9961),定量下限为30.0 ng/mL,批内和批间的精密度小于5.2%,批内和批间准确度在-3.6%~6.7%之间。RN-0001基质样品在室温放置18 h,-80℃冰箱放置40天以及经过5次冻融循环后均稳定。SD大鼠尾静脉注射3 mg/kg的RN-0001注射液进行药代动力学研究,RN-0001的半衰期t 1/2为3.53 h,峰浓度C 0为9370 ng/mL,血药浓度-时间曲线下面积AUC 0-24 h为5300 h·ng/mL。结果表明,所建方法适用于RN-0001在SD大鼠体内的药代动力学研究。

一例Han-Wistar大鼠垂体细胞瘤的病理学分析

在为期两年的致癌试验中发现空白对照组Han-Wistar大鼠出现1例垂体细胞瘤。临床观察及大体剖检未见明显异常。HE染色结果显示,垂体神经部肿瘤组织呈结节状增生,边界清晰,压迫周围正常组织;肿瘤细胞与神经胶质细胞类似,细胞核呈圆形或卵圆形,细胞质丰富呈嗜酸性或空泡状;肿瘤细胞分化良好,细胞多形性不明显,核分裂象可见;部分肿瘤细胞呈假菊形团状排列。免疫组织化学染色结果显示,胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及S-100蛋白呈阳性。结合HE染色及免疫组织化学染色结果诊断该肿瘤为自发性良性垂体细胞瘤。

商陆致大鼠肾损伤的基因组学研究

目的采用寡核苷酸微阵列芯片技术探讨商陆长期给药对大鼠肾组织相关细胞因子及基因表达的影响,以阐释商陆致大鼠肾损伤的作用机制。方法将大鼠随机分为对照组及商陆低、高剂量组(10、20 g·kg-1),灌胃商陆水煎液(20 mL·kg-1)或等体积纯水,每天1次,连续49 d。采用酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫组化法(IHC)检测肾组织中相关炎性因子[白细胞介素(IL)1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]含量及核因子κB(NF-κB)表达;采用全基因组寡核苷酸生物芯片检测大鼠肾组织基因表达,筛选差异基因,并进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法验证差异基因。结果与对照组比较,商陆高、低剂量组大鼠肾组织中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显升高(P<0.05,P<0.01),商陆高剂量组大鼠肾组织中NF-κB表达量明显升高(P<0.05);商陆高、低剂量组分别有2 560、1 923个差异表达基因,两组均激活了丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的MAP、p38 MAPK、JNK 3条信号通路,且高剂量组引起MAPK通路的差异基因数是低剂量组的2倍;商陆高剂量组还激活了Janus激酶/信号转导与转录激活因子(JAK-STAT)信号通路及细胞凋亡(Apoptosis)信号通路。验证实验结果表明,与对照组比较,商陆低剂量组大鼠肾组织的转化生长因子β1(TGF-β1)基因表达量明显升高(P<0.01),而高剂量组大鼠肾组织的IL-1β、表皮生长因子受体(EGFR)、TGF-β1基因表达量均显著升高(P<0.01)。结论通过IL-1β、TGF-β1/β2等细胞因子激活MAPK、JAK-STAT及细胞凋亡信号转导通路,继而引起炎性反应和细胞凋亡,可能是商陆致大鼠肾损伤的机制之一。

背根神经节在药物神经毒性体外评价中的应用

背根神经节神经元是感觉信息的初级传入神经元,可接收周围感觉神经末梢传出的信号,整合后将其传递至脊髓。抗肿瘤药和麻醉药等可损害背根神经节神经元的胞体和轴突,导致感觉信息传导异常,从而产生神经毒性。背根神经节体外模型来源广泛,来源于人多能干细胞和成纤维细胞的背根神经节神经元是近年的研究热点,且在多种药物的神经毒性评价、高通量筛选和机制研究中具有广阔的应用前景。本文对背根神经节的体外模型来源及其在药物神经毒性体外评价中的应用予以综述。

人源化动物模型在肿瘤免疫治疗药物临床前研究中的应用

近年来,肿瘤免疫调控机制逐渐清晰,随着嵌合抗原受体T细胞免疫疗法获美国FDA批准上市,揭开了肿瘤免疫治疗的新篇章。在肿瘤免疫治疗药物临床前评价过程中,传统的免疫缺陷动物模型存在较多的限制和缺陷,无法模拟人体内肿瘤微环境,也无法针对免疫治疗药物的作用机制反映出药物的靶点毒性。近年来,由于基因编辑技术及干细胞培养技术的不断进步,实验动物的人源化技术取得了巨大的进步。本文总结了目前可用于肿瘤免疫治疗药物研究的3种人源化动物模型(重建人免疫系统动物模型、重建人免疫系统+人源肿瘤组织异种移植动物模型和基因修饰的人源化动物模型)的特点和应用范围,希望为研究者在肿瘤免疫治疗药物临床前开发过程中选择合适的动物模型提供参考。

生物技术药物免疫原性检测中改善药物耐受研究进展

随着大量生物技术药物的研发,生物技术药物的评价越来越受到重视。与传统小分子药物不同,生物技术药物在体内产生的抗药抗体(ADA)可能会中和药物的活性,造成在非临床和临床研究中观察到的效应并非药物真正的药理和毒性反应,因此需要对药物的免疫原性进行评价。通过检测ADA可评价药物的免疫原性。检测ADA的主要干扰物质为药物本身。目前,最广泛使用的桥联ELISA无法检测药物-ADA复合物,会导致假阴性结果,影响检测的准确度。药物耐受作为免疫原性检测方法学验证中的一项重要指标,应尽可能减少游离药物的干扰,客观反映体内ADA水平。因此,恰当的样品前处理是测定结果准确性的关键。目前已报道的前处理方法有液相ELISA、酸处理、沉淀与酸解离、磁珠提取与酸解离和磁珠提取与热解离等,这些方法均有助于减少药物干扰,改善药物耐受。

放射性治疗药物的非临床安全性评价策略探讨

放射性治疗药物结构复杂,同时具有放射性、靶向性以及辐射损伤风险等,因此其非临床安全性评价应根据药物的组成结构,遵循具体问题具体分析的原则开展。本综述结合美国食品药物管理局、欧洲药品管理局颁布的放射性治疗药物相关指导原则以及《支持药物进行临床试验和上市的非临床安全性研究指导原则》,总结放射性治疗药物非临床安全性评价中药动学-毒动学、安全药理学、单次给药毒性试验、重复给药毒性试验、遗传毒性、生殖毒性、致癌性以及迟发毒性研究中需考虑的试验要点,并结合已上市的4种放射性治疗药物已开展的非临床安全性评价试验探讨放射性治疗药物的非临床安全性评价策略,为我国开展放射性治疗药物的非临床安全性评价提供参考。

青光眼动物模型在青光眼研究中的应用

青光眼是一种常见的神经退行性疾病,发病机制复杂,严重威胁人类眼健康。青光眼动物模型的建立为该疾病的发生、发展及干预措施提供了研究基础。文章在对青光眼进行简单介绍的基础上,从自发产生和人为诱导青光眼动物模型两个角度,对当前青光眼动物模型的构建方法进行了叙述。一种青光眼动物模型只能模拟某一类型青光眼或青光眼某一方面的病理改变,因此,应根据不同试验需求,选择合理的动物模型。随着生物技术、基础科学研究的进展,以及对青光眼发病机制的深入理解,将有望进一步改进现有模型或开发新的诱导机制来克服目前的局限性,使我们在未来能更好地理解和干预青光眼的发生发展。

纳米氧化铁的遗传毒性及其机制研究进展

随着纳米材料的广泛应用,其生物安全性日益受到重视。其中,纳米氧化铁是应用较为广泛的医用纳米材料之一。研究显示,纳米氧化铁粒子会在细胞、亚细胞和分子生物学水平(如基因和蛋白水平)造成遗传损伤,其遗传毒性的潜在机制为进入细胞核后直接与DNA相互作用,引起DNA损伤。此外,还可通过氧化还原反应诱导活性氧产生,通过活性氧诱发DNA氧化损伤。本文简要介绍纳米氧化铁的分类及制备方法,并以常用的纳米零价铁和超顺磁纳米氧化铁为例,介绍纳米氧化铁的遗传毒性研究进展及潜在的致毒机制。

大鼠多器官彗星试验方法的验证研究

目的:采用对氯苯胺、氯化钠、对乙酰氨基酚和庆大霉素4个不同作用机制的化合物,对已建立的大鼠多器官(肝、胃和肾)彗星试验方法进行验证。方法:SD雄性大鼠分别在0、24和45 h经口灌胃不同剂量的对氯苯胺[37.5、75和150 mg/(kg·d)]、氯化钠[500、1 000和2 000 mg/(kg·d)]、对乙酰氨基酚[20、100和500 mg/(kg·d)],或肌肉注射庆大霉素[20、40和80 mg/(kg·d)],各组均设置溶剂对照品,以及在24和45 h经口灌胃阳性对照甲基磺酸乙酯[EMS,200 mg/(kg·d)],所有动物在末次给予受试物约3 h后经戊巴比妥钠麻醉放血处死,制备肝脏、胃和肾脏单细胞悬液后制片,再经裂解、解旋、电泳、中和、染色以进行彗星显像分析;对乙酰氨基酚处理的大鼠肝脏和庆大霉素处理的大鼠肾脏经10%福尔马林溶液固定后进行组织病理学检查。结果:与溶剂对照组比较,对氯苯胺处理组大鼠肝、胃和肾的尾部DNA百分率增加,并呈剂量-反应关系(P<0.05);氯化钠、对乙酰氨基酚和庆大霉素处理组大鼠肝、胃和肾的尾部DNA百分率与溶剂对照比较,差异均无统计学意义(P均>0.05);对乙酰氨基酚各剂量组动物出现肝脏不同程度的肝脏细胞炎症反应或细胞坏死等病理学改变。结论:本研究采用已知遗传毒性化合物、有和无靶器官毒性的非遗传毒性化合物,验证了多器官(肝、胃和肾)彗星试验方法具有很好的灵敏度和特异性,有望为体内碱性彗星试验方法在新药遗传毒性评价领域的推广提供技术参考。

3D肝细胞遗传毒性检测方法的建立

目的采用人源化肝细胞HepG2细胞与3D细胞培养技术在体外建立3D肝细胞模型,用不同的模式化合物分别建立3D肝细胞微核组学试验方法(cytokinesis-block micronucleus cytome,CBMN-cyt)及3D肝细胞彗星试验方法。方法采用无支架培养方式,选取球体外观、球体内部细胞存活率、Ⅰ和Ⅱ相代谢酶基因表达及肝脏特异性生物标志物表达作为检测指标评估球体生长特性,确定3D肝细胞球体最佳培养条件,并探索3D肝细胞模型用于体外微核组学试验和体外彗星试验的适用性。结果3D肝细胞模型的最佳培养条件为5×10^(3)个细胞/20μL/滴接种,培养7 d。采用体内外微核阳性化合物丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)初步建立了3D肝细胞微核组学方法,可成功检测出MMC的遗传毒性和细胞毒性;与2D肝细胞模型结果对比,3D肝细胞模型在检测微核和核芽时具有更高的灵敏度。采用已知体内外彗星试验阳性化合物甲基磺酸甲酯(methyl methanesulfonate,MMS)建立了3D肝细胞彗星试验方法,MMS在低细胞毒性下可使3D肝细胞的尾DNA%显著性增加,且3D肝细胞模型对MMS遗传毒性检测灵敏度高于2D细胞。结论建立的3D肝细胞模型操作简单,成本低廉,并在体外微核试验和彗星试验中表现出较好的灵敏度和特异性,提示3D肝细胞遗传毒性试验方法在早期药物的遗传毒性筛选和追加试验研究中具有良好的应用前景。

Detection and characterization of Hepatitis E virus from commercial rabbit livers in Hebei, China

Rabbit hepatitis E virus(HEV)has been reported for years and is thought to have the potential for zoonotic transmission from rabbits to humans.As reported,HEV genotype 3(gt3)is the most prevalent form of HEV in rabbits.To determine the prevalence of HEV in commercial rabbit livers,176 liver samples were collected from an abattoir in Hebei Province,China.Three(1.7%)samples tested positive for RNA of HEV-0RF2(open reading frames-2).Sequence analysis showed that the three isolates shared high identities with each other(94.08-98.85%).Further analysis showed that all the rabbit strains clustered together in the branch of HEV gt3.Further study by immunohistochemistry(IHC)assays showed that 131(74.4%)liver samples were positive for HEV ORF2 protein.Pathological changes including cell degeneration,inflammatory cell infiltration and bile duct epithelial cell hyperplasia were observed under microscopy.These findings indicated the presence of HEV in commercial livers of rabbits.Additional studies should be conducted to investigate the infectivity of rabbit HEV(rHEV)and the potential risks of zoonotic transmission of rHEV from rabbits to human beings.

热应激下牛舍环境变化及牛床喷雾应用探讨

为评估牛床喷雾设施在奶牛场的应用效果,在热应激期连续24h测定温度、湿度变化,分析比较了牛舍不同部位的温度、湿度、THI值等指数的变化情况。结果表明:牛舍温度和湿度均受太阳辐射影响,而牛舍THI指数波动较小。喷淋可降低牛只体温,同时体温可能受饲料消化代谢影响。牛舍不同位置的温度略有差异,喷雾可使卧床局部环境温度降低0.4℃。在喷雾中心位置,温度可以降低4℃,虽然喷雾开启后会增加湿度,但喷雾中心位置THI可降低3个点,卧床位置THI降低0.4个点,有利于牛只的降温,但同时需要进一步研究如何利用喷雾的特性更加有效地用于防暑降温。

应用于彗星试验的新型技术研究进展

彗星试验是一种用途广泛的检测方法,可检测到由于衰老、疾病和暴露导致的各种生物体、组织和细胞类型的DNA损伤。为满足遗传毒性检测简单、快速、高通量和更好预测化合物在体内作用的需求,彗星试验正作为一种遗传毒性测试工具进一步升级,如将彗星试验各个步骤优化并集成到一组彗星芯片平台中,开发出一种简单和快速的彗星试验方法;使用更接近人体细胞的三维(3D)组织模型(3D皮肤模型、3D肝模型、3D气道模型和3D重建眼角膜上皮模型)降低体外检测的假阳性率;开发新型的人源化动物模型,减少不同物种带来试验结果的差异,提高预测化合物对人体遗传毒性的能力。随着细胞生物学、医学和材料科学领域的发展,彗星试验技术将持续改进,使其更广泛、更有效地应用于药物、化妆品、环境和生态等领域的遗传毒性评价和研究。

可溶性靶点分子对生物制品抗药抗体桥连法检测的挑战和应对策略

生物制品进入机体后可能诱导免疫应答,产生抗药抗体(ADA)。开发灵敏度高、特异性强的ADA检测方法是免疫原性评价的基础,其中桥连法应用最广。桥连法检测易受多种因素影响,其中可溶性靶点分子对ADA检测的影响会因其存在形式、基线水平、给药导致的浓度改变或代偿性变化等而产生差异,引起假阳性或假阴性结果,进而影响药物免疫原性风险的评估。本文重点讨论ADA检测中可溶性靶点分子的潜在干扰及其应对策略,以期为ADA检测方法开发提供一定参考。