逆转录病毒载体介导的双耐药基因转染小鼠骨髓细胞的实验研究

目的:将耐药基因以逆转录病毒为载体转染骨髓细胞以解决大剂量化疗所造成的骨髓抑制。方法:以逆转录病毒为载体,将双突变的二氢叶酸还原酶基因(DH-FR)和胞苷脱氨基酶基因(CD)转染小鼠骨髓细胞,观察该细胞耐MTX及Ara-C的CFU-GM生成情况;RT-PCR检测转基因的表达情况。结果:转基因的小鼠骨髓细胞有耐药克隆形成(14%);基因转染后小鼠骨髓细胞对MTX和Ara-C的耐受明显增加,P<0·005;RT-PCR显示转基因细胞有转染的基因条带。结论:双耐药基因通过逆转录病毒转染小鼠骨髓细胞并且获得表达,提高了骨髓细胞对MTX和Aar-C的耐药性。

双突变二氢叶酸还原酶基因对小鼠骨髓细胞化疗保护作用的体外研究

目的探讨将人双突变的二氢叶酸还原酶基因(dihydrofolate reductase,DHFR)导入小鼠骨髓细胞中,观察小鼠骨髓细胞对大剂量甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)的耐受性,研究骨髓耐受大剂量化疗的可行性。方法以反转录病毒为载体,将DHFR通过共培养转染入小鼠骨髓干细胞,观察共培养后的骨髓细胞耐MTX CFU-GM生成情况;小鼠骨髓细胞提取的DNA,用PCR检测小鼠骨髓细胞耐药基因的表达。结果含有耐药基因(SFG-F/S)的骨髓细胞耐药克隆为16%,对照组为0,χ2=47.88,P<0.005;转基因小鼠骨髓细胞经PCR检测,显示有F/S基因条带;耐药基因转染后小鼠骨髓细胞对MTX的耐受明显增加。结论耐药基因可以进入小鼠骨髓细胞并且获得共表达,提高了造血细胞对MTX的耐药性。