基于Wnt/β-catenin信号通路探究推拿对KOA大鼠软骨降解和软骨细胞终末分化的影响

目的探讨推拿对膝骨关节炎(KOA)模型大鼠的疗效及其对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响。方法从32只无特定病原体级Sprague-Dawley大鼠中随机选取8只作为对照组。剩余24只采用4%木瓜蛋白酶0.2 mL关节腔注射建立KOA模型。造模后随机分为模型组、推拿组和阳性药物组,每组各8只。采用Lequesne评分评估造模情况。造模成功后,对照组不进行任何干预;推拿组采用膝关节局部顺时针环形拇指揉法,纵向压力为3 N,频率控制为每分钟120-140次,每次15 min;最后屈伸关节10次。阳性药物组每日予以塞来昔布(每公斤体重24 mg)灌胃。各组干预每日1次,每周6 d,连续4周。治疗结束后对大鼠再次进行Lequesne评分评估;苏木素-伊红(HE)染色、番红O-固绿染色观察软骨形态结构;改良Mankin评分进行病理评分;酶联免疫吸附法检测软骨II型胶原C端肽(CTX-II)和寡聚基质蛋白(COMP);免疫印迹法检测软骨组织Wnt信号蛋白4、β-连锁蛋白、基质金属蛋白酶13(MMP-13)和骨形态发生蛋白2(BMP-2);免疫组化检测软骨细胞X型胶原(ColX)阳性细胞率。结果推拿组和阳性药物组Lequesne评分均优于模型组(P<0.01),HE染色、番红O-固绿染色形态结构及改良Mankin评分同样优于模型组(P<0.01)。与对照组相比,模型组血清中的CTX-II和COMP含量显著上升(P<0.01);软骨组织中Wnt4、β-catenin、MMP-13和BMP-2蛋白表达水平显著上升(P<0.01);软骨细胞ColX阳性细胞率显著上升(P<0.01)。与模型组相比,推拿组和阳性药物组CTX-II和COMP含量显著下降(P<0.01);Wnt4、β-catenin、MMP-13和BMP-2蛋白表达显著下降(P<0.01);软骨细胞ColX阳性细胞率显著下降(P<0.01)。与阳性药物组相比,推拿组CTX-II、COMP含量和Wnt4、β-catenin、MMP-13和BMP-2蛋白表达下降(P<0.05或P<0.01);软骨细胞ColX阳性细胞率显著下降(P<0.01)。结论推拿可以减缓KOA的退变,其机制可能与通过下调Wnt/β-catenin信号通路降低MMP-13和BMP-2蛋白表达,减少软骨细胞外基质降解,减缓细胞终末分化有关。