低氧条件下食管癌来源外泌体调控巨噬细胞M2型分化与自噬的机制研究

目的:探究低氧条件下食管癌外泌体对巨噬细胞分化和自噬的影响及机制。方法:50 ng/ml PMA诱导THP-1分化为M0型巨噬细胞,超速离心法提取并鉴定HEEC、Eca-109、缺氧诱导的Eca-109细胞分泌的外泌体(记为HEEC-exo、NomEca-109-exo、Hypo-Eca-109-exo),激光共聚焦显微镜观察巨噬细胞对外泌体的摄取,将PBS、HEEC exo、Nom-Eca-109-exo、HypoEca-109-exo分别与M0型巨噬细胞共孵育,流式细胞术检测各组细胞CD14和CD206表达,ELISA检测细胞因子IL-1β、IL-12、TNF-α、Arg1、IL-10和TGF-β,qRT-PCR检测各组细胞CCR7、TLR2、CD206和CD14表达,Transwell检测各组细胞迁移和侵袭,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1和p62表达及PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平。结果:提取的外泌体符合结构和生物学特征。相比于PBS组,与Nom-Eca-109-exo、Hypo-Eca-109-exo孵育后,各组M0型巨噬细胞CCR7、TLR2表达显著降低、CD206和CD14表达显著增加,IL-1β、IL-12、TNF-α分泌显著减少,Arg1、IL-10和TGF-β分泌显著增加,LC3-Ⅱ、Beclin-1表达显著增加,p62表达显著降低,细胞迁移和侵袭数显著增加,PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平显著升高。相比于NomEca-109-exo组,Hypo-Eca-109-exo组细胞CD206和CD14表达显著增加,Arg1、IL-10和TGF-β分泌显著增加,LC3-Ⅱ、Beclin-1表达显著增加,p62表达显著降低,细胞迁移和侵袭数显著增加,PI3K、Akt、mTOR的磷酸化水平显著升高。结论:低氧诱导的食管癌细胞外泌体可显著促进M2型巨噬细胞分化和自噬,进而促进肿瘤迁移和侵袭,其机制为激活PI3K/Akt/mTOR信号通路。

髓源抑制性细胞与肝癌

髓源抑制性细胞(MDSCs)作为肿瘤免疫微环境中的一种异质性细胞群,可在肿瘤患者和荷瘤动物体内大量扩增及聚集,并发挥免疫抑制活性。近年来的一些研究表明,MDSCs在肝癌的发生、发展和转移过程中也发挥重要作用。本文将综述MDSCs与肝癌的相关研究进展,探讨其在肝癌中的作用及潜在治疗策略。

髓样细胞触发受体2——缺血性脑卒中治疗的新靶点

缺血性脑卒中严重危害人类健康,有较高的致残致死率。小胶质细胞、星形胶质细胞等多种细胞参与其病理过程。小胶质细胞作为中枢神经系统(CNS)的固有免疫细胞,在机体生理、病理状态下均发挥重要作用。髓样细胞触发受体2(TREM2)是在CNS中主要表达于小胶质细胞的一种免疫球蛋白样受体,可与多种配体结合,在自身免疫及炎症过程中主要发挥“负性调节”的有益作用,可参与增殖、吞噬、存活、炎症因子表达等。本文阐述小胶质细胞中TREM2的生物学特性、相应配体及其信号通路,探讨TREM2在缺血性脑卒中的调节及其潜在治疗作用,以期为缺血性脑卒中的防治新靶点提供参考。

外泌体调控树突状细胞免疫功能的研究进展

树突状细胞(DC)是机体内抗原提呈能力最强的一类抗原提呈细胞(APC),是联系固有免疫和适应性免疫的纽带。外泌体为体内活细胞分泌的双层囊泡小体,携带多种生物活性物质,参与细胞间信息传递和物质交换。内容物含量、大小、细胞来源等特征的不同组合导致了外泌体的高度异质性,因此,外泌体对DC功能调节的方式及机制具有复杂性和不确定性。本文系统回顾近年外泌体参与DC功能调控的研究进展,并对工程化外泌体的开发策略与应用现状进行总结,以期为后续研究和应用提供参考。

胞内寄生菌对巨噬细胞免疫逃逸的研究进展

病原微生物在感染宿主后,巨噬细胞作为主要的免疫哨兵细胞首先识别并吞噬入侵的病原体,而入侵的病原体可发展多种策略逃避巨噬细胞杀伤,并适应宿主细胞内环境,在胞内复制和存活。现对胞内感染常见细菌和真菌对巨噬细胞免疫逃逸的策略进行概述。

Wnt5a在糖尿病前期及糖尿病中的表达差异及其与糖尿病前期患者免疫炎症的相关性分析

目的:分析Wnt蛋白家族成员5a(Wnt5a)在糖尿病前期及糖尿病中的表达差异及其与糖尿病前期患者免疫炎症的相关性。方法:将2020年11月至2021年11月期间枣庄市立医院收治的糖尿病前期者64例作为A组,糖尿病患者51例作为B组,体检的健康人群50例作为C组。采集3组基线资料,测定Wnt5a水平,分析Wnt5a在糖尿病前期、糖尿病中的表达差异,测定免疫炎症相关指标,分析Wnt5a与糖尿病前期患者免疫炎症的相关性。ROC曲线分析Wnt5a对糖尿病前期、糖尿病的预测价值,确定其截断值,用于临床疾病预测。结果:与B组相比,A组Wnt5a水平、免疫炎症指标Th1、Th17、Th22、IFN-γ、IL-17A、IL-22水平降低(P<0.05)。Logistic回归分析显示空腹血糖、Wnt5a、Th1、Th17、Th22、IFN-γ、IL-17A、IL-22是影响糖尿病前期发生的独立危险因素(P<0.05)。Wnt5a与糖尿病前期患者免疫炎症相关指标Th1、Th17、Th22、IFN-γ、IL-17A、IL-22均呈正相关(P<0.05)。ROC曲线显示,Wnt5a预测糖尿病前期、糖尿病的AUC值分别为0.921、0.897,AUC均>0.7,表明Wnt5a对糖尿病前期、糖尿病发生的预测价值较高(P<0.05)。结论:Wnt5a在糖尿病前期、糖尿病中的表达具有一定差异,当42.38 pg/ml≤Wnt5a水平<62.50 pg/ml时为糖尿病前期,当Wnt5a水平≥62.50 pg/ml时则说明已经从糖尿病前期过渡至糖尿病,且认为Wnt5a与糖尿病前期患者免疫炎症有关,可能是通过放大糖尿病前期患者局部免疫炎症增加胰岛素抵抗程度,最终导致糖尿病发生。

苦荞黄酮提取物通过抑制NF-κB信号通路减轻蛛网膜下腔出血模型大鼠神经炎症和氧化应激

目的:探索苦荞黄酮提取物减轻蛛网膜下腔出血(SAH)模型大鼠神经炎症和氧化应激的作用机制。方法:将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、苦荞黄酮提取物低、中、高剂量组,每组10只。Longa分级评估神经功能缺损;干湿重法测定脑含水量;伊文思蓝染料外渗实验检测大脑血脑屏障通透性;ELISA检测血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平和脑组织中上述炎症因子及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;Western blot检测大鼠脑皮质中细胞外调节蛋白激酶/核转录因子κB(ERK/NF-κB)信号通路蛋白表达。结果:与模型组相比,尼莫地平组和苦荞黄酮提取物中、高剂量组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、伊文思蓝渗出量、血清及脑组织TNF-α、IL-6和IL-1β水平、脑组织MDA水平及MMP-9、p-ERK/ERK和p-NF-κB P65/NF-κB P65蛋白量明显下降,脑组织中SOD和GSH-Px水平明显上升(P<0.05)。结论:苦荞黄酮提取物通过抑制ERK/NF-κB信号通路蛋白表达,减缓大鼠神经炎症和氧化应激反应,发挥对SAH造成的脑损伤的治疗作用。

内质网应激在吸烟COPD模型小鼠膈肌细胞凋亡中的作用及机制研究

目的:研究内质网应激(ERS)在吸烟慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠膈肌细胞凋亡中的作用及机制。方法:野生型雄性C57BL/6小鼠分为对照组、COPD模型组、激动剂组、拮抗剂组,Perk基因敲除小鼠分为PERK-KO组、PERKKO+模型组,采用被动吸烟法复制COPD模型,给予ERS激动剂毒胡萝卜素或拮抗剂4-苯基丁酸干预,检测0.3 s用力呼气容积与用力肺活量比(FEV_(0.3)/FVC)、最高峰值流速(PEF)、血清及支气管肺泡灌流液(BALF)中IL-1β及IL-6含量、肺组织病理改变、膈肌中细胞凋亡率及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、肌醇酶1α(IRE1α)、活化转录因子6(ATF6)、p-eIF2α、ATF4、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Caspase-12表达水平。结果:与对照组相比,模型组FEV_(0.3)/FVC、PEF降低,肺组织出现病理改变,膈肌中细胞凋亡率及PERK、p-eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平提高(P<0.05);与模型组相比,激动剂组膈肌中细胞凋亡率及PERK、peIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平提高(P<0.05),拮抗剂组膈肌中细胞凋亡率及PERK、p-eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平降低(P<0.05);敲除PERK后,与模型组相比,PERK-KO+模型组膈肌中细胞凋亡率及eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平降低。结论:吸烟COPD模型小鼠膈肌细胞凋亡过度激活,ERS的PERK通路激活与膈肌细胞凋亡有关。

基于雨课堂的混合式教学对医学免疫学教学效果的影响

互联网和便携式设备技术的进步使信息获取越来越便捷,学生的学习方式逐渐多样化,教师也在充分利用这些技术来优化以学生为中心的学习模式,并提高混合学习的有效性[1]。在学校推行的雨课堂教学改革中,医学免疫学教师正积极探索如何充分利用雨课堂提高学生的学习兴趣和课堂教学价值。

早期ART对HIV急性期感染者双阴性T细胞频率和表型的影响

目的:评价早期抗病毒治疗(ART)对HIV感染者双阴性(DN)T细胞频率和表型的影响。方法:入组接受早期ART的HIV急性期感染者,流式细胞术检测DN T细胞的频率和表型。结果:HIV急性期感染者DN T细胞的比例较健康对照组显著降低,但早期ART不能使其完全恢复。HIV急性期感染者DN T细胞亚群Vδ1和Vδ2 T细胞的活化水平升高,与基线CD4^(+)T细胞数量呈负相关。尽管早期ART能使Vδ1和Vδ2 T细胞的活化正常化,但Vδ1/2^(neg)T细胞活化水平仍显著高于健康对照组,并与ART后CD4^(+)T细胞的数量呈负相关。结论:DN T细胞亚群频率和表型的变化与HIV感染者疾病进展和ART后CD4^(+)T细胞数量恢复有关。

甘露聚糖结合凝集素对脂多糖诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症反应和胰岛素抵抗的调节作用及机制

目的:研究甘露聚糖结合凝集素(MBL)对脂多糖的诱导3T3-L1脂肪细胞炎症反应及胰岛素抵抗的调节作用及机制。方法:诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,油红O染色分析细胞分化程度,使用CCK-8检测分化过程中MBL(1、10、20μg/ml)及LPS对细胞增殖能力的影响;ELISA检测细胞炎症因子IL-6、TNF-α含量,Western blot检测TNF-α、IL-6及TLR4/NF-κB信号通路中蛋白表达,并分析Akt、IRS-1 try蛋白磷酸化及GLUT4表达情况;流式细胞术检测MBL对3T3-L1细胞摄取葡萄糖的调节作用。结果:油红O染色显示,12 d时,3T3-L1前体脂肪细胞已诱导为完全成熟的脂肪细胞;CCK-8结果证实,在细胞分化全过程,不同浓度的MBL (1、10、20μg/ml)及LPS对其增殖能力无明显影响;ELISA及Western blot结果显示在脂肪细胞分化至成熟过程中,MBL处理均可抑制LPS诱导的炎症因子分泌,且其抑制作用呈浓度依赖性;Western blot结果显示MBL以浓度依赖的方式抑制LPS诱导的IκB、IKK磷酸化和TLR4以及核NF-κB表达,且MBL可增强Akt和IRS-1磷酸化,增加GLUT4表达;流式细胞术结果显示MBL可以在一定程度上解除LPS对3T3-L1细胞摄取葡萄糖的抑制,并呈一定的浓度依赖性。结论:在脂肪细胞中,MBL通过TLR4/NF-κB信号通路抑制细胞炎症因子分泌,发挥抑炎作用;MBL通过抑制炎症因子分泌,解除LPS对3T3-L1细胞摄取葡萄糖和IRS-1/Akt信号的抑制,减轻胰岛素抵抗。

miR-221-3p靶向FGF14调控肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的分子机制

目的:探讨miR-221-3p是否通过靶向FGF14调节肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的生物学行为。方法:采用qRT-PCR法与Western blot法分别检测人支气管上皮细胞(BEAS-2B)、人肺腺癌细胞(A549、A-427、PC-9)中miR-221-3p、FGF14的表达水平;分别将miR-inhibitor-NC、miR-221-3p inhibitor、si-NC、si-FGF14、miR-inhibitor-NC+si-NC、miR-221-3p inhibotor+si-NC、miR-221-3p inhibotor+si-FGF14转染至PC-9细胞;采用MTT实验检测细胞增殖;采用Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测miR-221-3p、FGF14靶向关系;Western blot法检测CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2、P21、Bax蛋白表达量。结果:与BEAS-2B细胞比较,肺腺癌细胞A549、A-427、PC-9中miR-221-3p的表达水平升高(P<0.05),FGF14 mRNA及蛋白水平降低(P<0.05);转染miR-221-3p inhibitor可明显降低OD值及CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平(P<0.05),提高凋亡率及P21、Bax蛋白水平(P<0.05),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实FGF14是miR-221-3p的靶基因;转染si-FGF14可提高OD值及CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平(P<0.05),增加迁移及侵袭细胞数(P<0.05),降低凋亡率及P21、Bax蛋白水平(P<0.05);转染si-FGF14可明显逆转转染miR-221-3p inhibitor对PC-9细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的作用。结论:抑制miR-221-3p表达可通过上调FGF14的表达从而抑制肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及诱导细胞凋亡。

细菌感染激活炎症小体介导细胞焦亡的机制研究进展

细菌感染是病原菌与宿主间复杂的、相互抗衡的动态过程。近年炎症小体已成为细菌病原体与宿主相互作用研究领域的前沿。炎症小体作为一种胞质大分子信号平台,一方面可诱导成孔蛋白Gasdermin D裂解,引发细胞焦亡,另一方面可介导IL-1β、IL-18成熟和释放。本综述概述了细菌不同组件诱导炎症小体组装的种类,同时探讨了不同炎症小体的激活机制,期待为后续宿主如何感应细菌感染,激发炎症小体介导的炎症反应机制研究提供参考,以便更好地了解细菌感染与宿主反应间的抗衡机制。

利多卡因通过LncRNA H19/miR-671-5p分子轴调控胃癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨利多卡因对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其对LncRNA H19/miR-671-5p的调控机制。方法:体外培养胃癌细胞AGS,使用不同浓度的利多卡因处理细胞;MTT检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;qRT-PCR检测H19及miR-671-5p的表达量;双荧光素酶报告实验验证H19与miR-671-5p的靶向关系;将pcDNA-H19及其阴性对照pcDNA转染至AGS细胞,使用利多卡因处理细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭;Western blot检测增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达量。结果:与Con组相比,利多卡因不同剂量可明显降低细胞活力和Ki-67、PCNA、N-cadherin蛋白水平及H19的表达量(P<0.05),并可减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05),提高E-cadherin蛋白水平及miR-671-5p的表达量(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实H19可靶向结合miR-671-5p;H19过表达可明显逆转利多卡因对细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论:利多卡因可能通过抑制H19表达及促进miR-671-5p表达从而抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭。

Clara细胞10 kD蛋白通过调控T细胞反应治疗小鼠变应性鼻炎研究

目的:探讨Clara细胞10 kD蛋白(CC10)对变应性鼻炎(AR)小鼠模型T细胞反应的作用。方法:卵清蛋白(OVA)免疫小鼠,建立AR模型,探讨CC10对AR的影响。最后1次鼻腔激发后评估小鼠鼻腔症状。收集鼻组织和鼻腔灌洗液(NLF),测定AR小鼠嗜酸性粒细胞、杯状细胞数及IL-5、IL-17、IL-10、TGF-β1、FOXP3水平。结果:激发期间给予CC10可显著减少AR小鼠搔鼻次数、嗜酸性粒细胞和杯状细胞数,降低IL-5、IL-17水平(P<0.05),但可增加IL-10、TGF-β1和FOXP3表达(P<0.05)。结论:CC10可通过调控T细胞反应减轻AR小鼠鼻腔炎症。

CCL15在脓毒症免疫病理过程中的作用及机制研究

目的:检测脓毒症中CCL15的含量,探究CCL15在脓毒症免疫病理中的作用和机制。方法:选取健康对照者和脓毒症患者各30例,通过盲肠结扎穿刺建立动物模型(CLP),ELISA检测患者和小鼠血清中CCL15含量;给脓毒症小鼠补充重组人CCL15蛋白或PBS,探究CCL15对生存率的影响;通过HE染色和生化指标检测评估器官损伤;通过流式细胞术检测吞噬细胞变化,探究CCL15对细胞吞噬杀伤的影响。结果:脓毒症患者和脓毒症小鼠的CCL15水平显著升高;在实验性脓毒症中,补充CCL15蛋白可以显著提高生存率,改善器官损伤,促进细菌清除。CCL15处理可以促进腹腔灌洗液(PLF)中巨噬细胞募集。结论:CCL15促进细菌清除,改善器官损伤,在脓毒症中发挥免疫保护作用,并改善生存率。

miR-1-5p修饰的脐带间充质干细胞对MRL/lpr狼疮小鼠的治疗作用研究

目的:探讨miR-1-5p修饰的脐带间充质干细胞对MRL/lpr狼疮小鼠的治疗作用及可能的机制。方法:选取年龄和性别相匹配的系统性红斑狼疮(SLE)患者和健康体检者各26例,实时荧光定量PCR检测两组外周血单个核细胞中的miR-1-5p表达水平;15只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为5组,分别为MRL/lpr狼疮小鼠未处理组(Control组)、PBS治疗组(PBS组)、UC-MSCs治疗组(UC-MSCs组)、miRNA negative control转染UC-MSCs治疗组(UC-MSCs+miR-NC组)、miR-1-5p转染UC-MSCs治疗组(UC-MSCs+miR-1组)。治疗结束1周后处死小鼠,采用HE染色观察各组小鼠肾组织和肺组织的病理改变;ELISA检测各组小鼠血清抗炎因子IL-10的浓度;流式细胞术检测小鼠胸腺T淋巴细胞亚群的分化情况。结果:①与健康对照组相比,miR-1-5p在SLE患者中的表达显著下调(P<0.05);②miR-1-5p修饰的UC-MSCs可以有效改善MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎和间质性肺炎的病理变化;③miR-1-5p修饰的UC-MSCs可抑制MRL/lpr小鼠脾脏肿大;④与Control组相比,UC-MSCs+miR-1组血清IL-10表达水平显著升高(P<0.05);⑤与Control组相比,UC-MSCs+miR-1组小鼠胸腺Treg细胞比例显著升高,且差异有统计学意义(P<0.05);流式检测各组Th17细胞比例及Th17/Treg,差异均无统计学意义(P>0.05);与Control组相比,UC-MSCs+miR-1组小鼠胸腺Th2细胞比例显著升高,且差异有统计学意义(P<0.05);流式检测各组Th1细胞比例及Th1/Th2,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-1-5p修饰的UC-MSCs可能通过促进MRL/lpr小鼠胸腺Treg细胞和Th2细胞分化以及IL-10的表达,减轻MRL/lpr小鼠肾组织和肺组织损害,起到治疗作用。

人参皂苷G-Rh2通过调节脂质代谢与免疫改善小鼠代谢综合征

目的:研究人参皂苷G-Rh2对高脂饮食(HFD)诱导小鼠代谢综合征(MS)的治疗效果和作用机制。方法:从小鼠体质量、胰岛素敏感性、血脂水平和肝脏功能方面评价G-Rh2对MS小鼠的治疗效果,广靶脂质代谢组学检测肝脏中脂质代谢物变化,ELISA检测血清中TNF-α、IL-6水平,流式细胞术检测脾脏、胸腺中CD4+T、CD8+T细胞、NK细胞和骨髓来源的抑制性细胞(MDSCs)数量。结果:G-Rh2明显减少MS小鼠的体质量和脂肪量,提高胰岛素敏感性,降低血脂总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(NEFA)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,防止肝脏脂质堆积。G-Rh2改变肝脏中脂质代谢模式,下调74种脂质代谢物,主要包括三酰甘油(TGs)和磷脂酰胆碱(PCs)两大类。G-Rh2降低血清中TNF-α和IL-6含量,平衡脾脏中CD4+T/MDSCs比例,减少肝脏中炎症细胞浸润。结论:G-Rh2对HFD诱导的小鼠MS有治疗作用,通过调节肝脏脂质代谢和抑制炎症双重途径实现。