血培养阳性样本快速菌种鉴定和药物敏感性分析

目的分析分离胶离心富集和5 h培养2种前处理方法在血培养阳性样本快速菌种鉴定和快速药物敏感性分析中的临床应用价值。方法收集2021年10月—2022年10月宁波大学附属第一医院报阳的血培养样本211例,分别采用分离胶离心富集和5 h培养(快速方法),以及12 h培养(标准方法)3种方法进行前处理。采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS,简称MS)对3种方法处理的血培养阳性样本进行快速菌种鉴定。采用自动化鉴定药敏仪对156例需氧瓶报阳血培养样本进行药物敏感性试验。以常规培养(18~24 h)+MS鉴定结果为标准,比较5 h培养+MS和分离胶离心富集+MS 2种快速方法菌株鉴定准确率。以培养24 h后仪器法药物敏感性试验结果为标准,判断5 h培养和分离胶离心富集后仪器法药物敏感性试验结果与标准方法的一致率。结果2种快速方法鉴定准确率最高的菌种为粪肠球菌,分别为100.00%、87.50%;5 h培养+MS对链球菌属的鉴定准确率较低(33.33%)。2种快速方法对肠杆菌科和非发酵菌的药物敏感性分析结果与标准培养+MS的药物敏感性分析结果一致性分别超过73.00%和85.00%;对葡萄球菌属和肠球菌属部分抗菌药物的药物敏感性分析结果一致性达100.00%;对万古霉素的药物敏感性分析结果一致性最低,为70.73%。结论5 h培养+MS和分离胶离心富集+MS可快速判断血培养阳性样本病原菌种类及其耐药性,准确率较高,适合在临床微生物实验室推广。

罕见病、遗传病诊疗专题征稿启事

目前,全球已确定约7000种罕见病,我国约有罕见病患者2000万例,致死、致残或致严重治疗负担的罕见病占90%以上,绝大部分无特效药。研究显示,80%以上的罕见病由遗传因素导致,50%在出生或儿童期发病,早发现、早诊断、早干预是罕见病防治的最佳途径。

血清miR-326与治疗相关性血液系统恶性肿瘤患者化疗敏感性和预后的关系

目的探究血清微小RNA-326(miR-326)水平与治疗相关性血液系统恶性肿瘤患者化疗敏感性和预后的关系。方法选取2012年1月—2021年1月河北北方学院附属第一医院收治的50例治疗相关性血液系统恶性肿瘤患者(研究组),以同期40例无原发实体瘤的血液系统恶性肿瘤患者为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测所有患者血清miR-326相对表达量。研究组入院后均接受化疗,根据肿瘤评估情况分为化疗有效组和化疗无效组,比较2个组化疗前后血清miR-326相对表达量。采用Spearman相关分析评估血清miR-326相对表达量与治疗相关性血液系统恶性肿瘤患者化疗敏感性的相关性。对研究组患者进行随访,根据随访终点事件(全因死亡)将研究组患者分为存活组和死亡组,收集2个组患者的临床资料,采用Logistic回归分析评估治疗相关性血液系统恶性肿瘤患者预后的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-326预测治疗相关性血液系统恶性肿瘤患者预后的价值。结果研究组血清miR-326相对表达量低于对照组(P<0.001)。化疗有效组化疗后血清miR-326相对表达量高于化疗前(P<0.05);化疗无效组化疗前后血清miR-326相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。血清miR-326相对表达量与治疗相关性血液系统恶性肿瘤患者化疗敏感性呈正相关(r=0.641,P<0.05)。死亡组高血压、感染、凝血功能异常、再发肿瘤化疗周期(≥5个)、脏器功能损伤所占比例均高于存活组,血清miR-326相对表达量低于存活组(P<0.05)。感染、凝血功能异常、脏器功能损伤、低血清miR-326相对表达量是治疗相关性血液系统恶性肿瘤患者预后不良的危险因素(P<0.05)。以0.44为最佳临界值,血清miR-326相对表达量预测治疗相关性血液系统恶性肿瘤患者预后的敏感性为86.80%,特异性为78.10%,曲线下面积为0.868。结论血清miR-326在治疗相关性血液系统恶性肿瘤患者中异常低表达,其与患者化疗敏感性关系密切,对患者预后有较高的预测价值。

miR-24-3p靶向CHD5影响甲状腺癌细胞迁移能力、侵袭能力和放射敏感性

目的探讨miR-24-3p调控染色体质域解螺旋酶DNA结合蛋白5(CHD5)表达对甲状腺癌细胞迁移能力、侵袭能力和放射敏感性的影响。方法选取2018年9月—2020年9月杭州市萧山区第一人民医院首次确诊为甲状腺癌的患者125例,收集其癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘>4 cm)和相关临床病理资料。选取人正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1和人甲状腺癌细胞系KTC1、SW579、TPC-1。检测癌组织、癌旁组织和4种细胞中miR-24-3p、CHD5蛋白的表达。对SW579细胞分别转染miR-24-3p抑制物anti-miR-24-3p(anti-miR-24-3p组)和阴性对照物anti-miR-NC(anti-miR-NC组)、miR-24-3p模拟物miR-24-3p mimics(miR-24-3p mimics组)和阴性对照物miR-NC(miR-NC组)、共转染anti-miR-24-3p和si-NC(anti-miR-24-3p+si-NC组)、共转染anti-miR-24-3p和si-CHD5(anti-miR-24-3p+si-CHD5组)。分析各组细胞的迁移能力、增殖能力和放射敏感性。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-24-3p与CHD5的靶向关系。结果癌组织和甲状腺癌细胞系KTC1、SW579、TPC-1中miR-24-3p相对表达量均显著高于癌旁组织和正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1(P<0.05),CHD5蛋白相对表达量均显著低于癌旁组织和正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1(P<0.05)。SW579细胞miR-24-3p相对表达量最高,CHD5蛋白相对表达量最低。有无淋巴转移、不同临床分期的甲状腺癌患者之间miR-24-3p和CHD5蛋白表达差异有统计学意义(P<0.001)。抑制miR-24-3p表达可抑制SW579细胞的迁移能力和侵袭能力,并提高SW579细胞的放射敏感性(P<0.05);miR-24-3p靶向负调控CHD5的表达;沉默CHD5可逆转抑制miR-24-3p表达对SW579细胞迁移、侵袭和放射敏感性的影响(P<0.05)。结论抑制miR-24-3p表达可上调CHD5,进而抑制SW579细胞的迁移能力和侵袭能力,提高其放射敏感性。

CANT1基因变异导致Desbuquois发育不良Kim变异型临床特征与遗传学分析

目的通过分析1例手部外观无异常的汉族Desbuquois发育不良(DBQD)患儿的临床与遗传学特征,进一步拓展中国人群DBQD的表型和基因变异谱。方法收集DBQD患儿的临床资料,采用全外显子组家系测序(Trio-WES)检测患儿及其父母的基因变异情况,采用生物信息学分析和晶体结构分析评估变异位点的生物危害性,并采用Sanger测序进行验证。通过文献回顾总结DBQD的临床特征和基因变异谱。结果患儿具有特殊容貌(扁平圆脸、眼球突出、鼻梁低平)、发育迟缓、脊柱侧弯和双足疼痛等临床特征,但手部外观无异常。Trio-WES检测结果显示,患儿CANT1基因发生纯合变异c.494T>C(p.Met165Thr),其父母为该变异位点的杂合携带者。SIFT、Polyphen-2和Mutation Taste在线软件预测c.494T>C变异可对蛋白或蛋白产物造成有害影响。Sanger测序证实变异位点存在。晶体结构预测提示c.494T>C(p.Met165Thr)变异可能会导致蛋白局部结构稳定性降低,进而影响蛋白功能。根据患儿手部特征、临床表型和基因检测结果诊断为DBQD-Kim变异型。通过文献回顾分析41例CANT1基因变异导致的DBQD患者的特征,共发现32个CANT1基因变异,其中错义变异15个、移码变异11个、无义变异3个、非编码区变异3个、拷贝数缺失变异1个;在DBQD 1型患者中,CANT1蛋白第300号精氨酸变异(p.Arg300His或p.Arg300Cys)发生频率最高;而Kim变异型患者主要以第156号丝氨酸变异(p.Ser156Phe)和第226号缬氨酸变异(p.Val226Met)为主。结论DBQD-Kim变异型患儿广泛的骨骼异常表现可能是由CANT1基因纯合变异所致。结合临床表型和基因检测结果可明确诊断DBQD,并进行分型。

肝癌三项(AFP、AFP-L3%、DCP)与GALAD、类GALAD模型临床应用专家共识

原发性肝细胞肝癌(HCC)是常见的恶性肿瘤,中国每年约有50%的新发病例。改进肝癌风险人群高危预警和早筛、早诊策略,对提高肝癌患者5年生存率至关重要。建立科学且适合医疗机构和健康管理机构推广、应用的无创伤性血液检测技术是提升现有HCC诊断和随访有效性的关键途径之一。基于国内外相关指南、共识、文献和中国人群临床循证实践,中国康复医学会医学检验与康复专业委员会等机构共同制定《肝癌三项(AFP、AFP-L3%、DCP)与GALAD、类GALAD模型临床应用专家共识》,对肝癌三项[甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体百分比(AFP-L3%)、异常凝血酶原(DCP)]和基于肝癌三项的GALAD模型、类GALAD模型的临床意义、适用人群、检测技术、结果解读等提出建议,旨在提高肝癌三项无创检测临床应用的科学性、合理性和可操作性,最大程度地发挥其应用效能,助力提升中国肝癌人群高危预警和临床早诊能力,改善肝癌患者预后和生存质量。

不同品牌校准品对血清碱性磷酸酶检测结果可比性的影响

目的探讨不同品牌校准品和基质对碱性磷酸酶(ALP)检测结果可比性的影响,为进一步开展血清ALP检测标准化和检测结果互认提供参考。方法选用临床实验室常用的2种校准品(AU校准品、C.f.a.s.校准品)和ALP国家二级标准物质(简称标准物质)分别于AU5800全自动生化分析仪(简称AU5800)和cobas c501全自动生化分析仪(简称c501)上对ALP项目进行校准。检测收集的25例新鲜临床血清样本和上海市临床检验中心常规化学室间质量评价5个浓度水平样本,各测定2次。以标准物质校准后的检测值为参比系统,计算2种校准品与标准物质校准后的检测值的相对偏移和相关性。以c501检测值为参比系统,计算采用同一校准品校准后,2台仪器检测值的相对偏移和相关性。结果以标准物质校准后的检测值为参比系统,两两系统的偏移绝对值均<10%,c501呈负偏移,AU5800呈正偏移,室间质量评价样本与临床样本的偏移均无明显差异。以c501检测值为参比系统,使用标准物质校准后,系统间临床血清样本测定值差异缩小;使用非系统配套校准品校准后,系统间差异增大。室间质量评价样本与临床血清样本呈现了相反的结果。结论使用具有溯源性和互换性的标准物质有利于各检测系统和实验室间检测结果的一致性和可比性。使用非系统配套校准品会增加各系统间差异,无法互通。此外,具有基质效应的室间质量评价样本并不能完全展示各系统的真实检测结果。

细胞制剂支原体检测方法概述

支原体是细胞培养过程中常见的外源性污染物。支原体污染的检测方法较多,但由于活细胞制剂终产品不能进行灭菌处理,且目前的支原体检测方法培养法和指示细胞培养法(DNA染色法)所需时间较长,在活细胞制剂终产品的快速放行检测中有一定的局限性,因而需要更完善的细胞制剂终产品的支原体检测方法。文章对支原体的形态学、培养法和核酸检测法进行简要介绍,以期为开展细胞制剂质量监测技术评价体系建设提供参考。

从精准诊断到精准化疗--精准医疗时代新型肿瘤标志分子研究进展

恶性肿瘤是威胁人类健康的主要疾病。目前,中国的肿瘤诊疗水平与欧美发达国家相比,仍存在较大的差距。要实现健康中国目标,肿瘤的早期诊断和精准综合诊疗是关键。然而,没有精准诊断,就没有精准治疗。精准诊断的基础是对肿瘤特征的深入认识。近年来,新的肿瘤分子特征的发现正改变着肿瘤诊疗的思路与策略,为肿瘤诊疗带来了新的机遇和挑战。新型肿瘤标志分子正逐渐在肿瘤辅助诊断、疗效预测、监测复发和转移,及预后判断中发挥越来越重要的作用。

糖尿病足患者FGF-2、Lp-PLA2及IGF-1水平与病情的相关性分析

目的 探讨糖尿病足患者血清成纤维细胞生长因子2(FGF-2)、脂蛋白相关磷脂酶A2(LpPLA2)及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平变化,及其与病情严重程度的相关性。方法 选取糖尿病足患者120例(糖尿病足组),按Wagner分级标准将所有患者分为0~1级组(40例)、2~3级组(48例)、4~5级组(32例)。另选取单纯2型糖尿病(T2DM)患者60例(T2DM组),以体检健康者60名作为正常对照组。检测所有对象血清FGF-2、Lp-PLA2及IGF-1水平。采用Spearman相关分析评价FGF-2、Lp-PLA2及IGF-1与Wagner分级的相关性。结果 正常对照组、T2DM组及糖尿病足组血清FGF-2、Lp-PLA2水平依次升高(P<0.05),血清IGF-1水平依次降低(P<0.05)。糖尿病足患者中,0~1级组、2~3级组、4~5级组血清FGF-2、Lp-PLA2水平依次升高(P<0.05),血清IGF-1水平依次降低(P<0.05)。血清FGF-2、Lp-PLA2水平与Wagner分级呈正相关(r值分别为0.652、0.665,P<0.05),血清IGF-1水平与Wagner分级呈负相关(r=-0.643,P<0.05)。结论 血清FGF-2、Lp-PLA2及IGF-1水平与糖尿病足病情严重程度密切相关。

HBV RNA检测在慢性乙型肝炎中的临床价值

目的对检测乙型肝炎病毒(HBV)RNA的方法进行评估,比较不同乙型肝炎血清标志物模式患者血清HBV RNA水平及其与HBV DNA之间的相关性。方法对HBV RNA检测方法的精度密、灵敏度及线性范围进行评估。收集81例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性慢性乙型肝炎患者的血清,同时检测HBV RNA、HBV DNA及乙型肝炎血清学标志物。按乙型肝炎e抗原(HBeAg)是否阳性、不同乙型肝炎血清标志物模式及是否接受抗病毒药物治疗分别分组。结果HBV RNA高值、低值样本的批内精密度分别为0.56%、2.30%,批间精密度分别为3.13%、6.03%,均符合临床要求;对接近厂商声明的检测下限的样本重复检测20次,检出率为100%,灵敏度符合要求;在HBV RNA 1.0×10^(2)~1.0×10^(7)拷贝/mL范围内成线性。HBeAg阳性组血清HBV RNA和HBV DNA载量均高于HBeAg阴性组(P<0.01、P<0.05)。在不同乙型肝炎血清标志物模式中,HBeAg阳性且乙型肝炎e抗体(HBeAb)阴性患者血清HBV RNA载量最高(P<0.01)。未治疗组血清HBV DNA及HBV RNA载量均高于治疗组(P<0.01、P<0.05)。在81例慢性乙型肝炎患者中,HBV RNA水平与HBV DNA载量、HBeAg阳性滴度呈正相关(r值分别为0.348、0.544,P<0.05),与HBsAg滴度无相关性(r=0.04,P>0.05)。在HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者中,血清HBV RNA载量与血清HBV DNA载量呈正相关(r=0.338,P<0.05)。在HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者中,血清HBV RNA载量与血清HBV DNA载量无相关性(r=0.14,P>0.05)。结论血清HBV RNA是一种潜在的反映HBV活动的新型标志物,亦可用于HBV感染疗效监测。

HELLP综合征产妇产前出凝血功能在产后出血和胎儿不良结局预测中的价值

目的分析产前出凝血功能在溶血肝功能异常血小板减少(HELLP)综合征产妇产后出血和胎儿不良结局预测中的价值。方法选取先兆子痫产妇417例,其中并发HELLP综合征63例(HELLP综合征组)、未并发HELLP综合征354例(非HELLP综合征组)。收集所有产妇血常规、肝肾功能、出凝血功能等实验室检测结果,以及产后出血、胎儿不良结局等临床资料。将63例HELLP综合征产妇根据有无产后出血分为产后出血组和非产后出血组,根据有无胎儿不良结局分为胎儿不良结局组和无胎儿不良结局组。采用Pearson相关分析评价产前出凝血功能与产后出血的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价出凝血功能判断产后出血和胎儿不良结局的价值。结果HELLP综合征组血小板(PLT)计数、血红蛋白(Hb)、纤维蛋白原(Fib)水平均低于非HELLP综合征产妇,乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸氨基转移酶(AST)、天门冬氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TB)、尿素(UREA)、肌酐(Cr)、D-二聚体(DD)均高于非HELLP综合征产妇(P<0.05)。产后出血组产前Fib低于非产后出血组(P<0.05),产前DD高于非产后出血组(P<0.05)。胎儿不良结局组Fib水平低于无胎儿不良结局组(P<0.05),DD水平高于无胎儿不良结局组(P<0.05)。分别以2.98 g/L和0.94μg/mL为最佳临界值,产前Fib、DD判断HELLP综合征产妇产后出血的敏感性均为63.6%,特异性分别为78.9%和63.4%,曲线下面积分别为0.754和0.654。Pearson相关分析结果显示,产后出血与产前Fib呈负相关(r=-0.187,P<0.05),与产前DD呈正相关(r=0.146,P<0.05)。结论产前Fib、DD对HELLP综合征产妇产后出血有一定的预测价值。

非炎性中枢神经系统疾病患者脑脊液IL-6参考区间的建立

目的建立非炎性中枢神经系统疾病患者脑脊液白细胞介素6(IL-6)的参考区间。方法选取行腰椎穿刺的非炎性中枢神经系统疾病患者159例建立脑脊液IL-6的参考区间。另选取行腰椎穿刺的非炎性中枢神经系统疾病患者23例和中枢神经系统感染患者29例,用于参考区间的验证。结果根据Dixon法计算结果,剔除1个离群值,有效数据为158个。158例非炎性中枢神经系统疾病患者的脑脊液IL-6数据呈正态分布(Z=0.06,P=0.20),结果为(4.43±1.18)pg/mL。不同性别和年龄之间差异均无统计学意义(P>0.05),合并各组后采用x+1.96s方式确定参考区间上限为6.74 pg/mL,参考区间为≤6.74 pg/mL。23例非炎性中枢神经系统疾病患者的脑脊液IL-6检测结果为1.50~6.26 pg/mL,所有结果均在建立的参考区间内;29例中枢神经系统感染患者的脑脊液IL-6检测结果为8.43~3406.00 pg/mL,均高于参考区间上限;参考区间验证通过。结论初步建立了非炎性中枢神经系统疾病患者脑脊液IL-6参考区间,经验证可用于临床。

微流控芯片POCT室内质量控制方案的探索

目的初步探讨适用于微流控芯片即时检测(POCT)的室内质量控制(IOC)方案。方法采用微流控芯片POCT仪检测临床剩余血清样本钾(K)、钠(Na)、氯(Cl)、葡萄糖(Glu)4个生化检测项目。研究历时3个月,分为2个阶段。第1阶段每天进行电子质控,并检测2个水平液体质控品;第2阶段每天进行电子质控,液体质控品改为每周检测1次。整个研究过程每天检测3个水平混合血清样本1次。分析2个阶段电子质控、液体质控品和混合血清检测结果。结果2个阶段仪器电子质控结果均为通过,液体质控结果均为在控。4个项目混合血清样本检测结果变异系数(CV)均<1/3允许总误差(TEa)。结论采用微流控芯片POCT仪检测K、Na、Cl、Glu时,在检测人员和环境稳定、试剂批号相同的情况下,可采用每天进行1次电子质控和每周检测1次液体质控品的IQC方案,以保证检验结果的质量。

分析前因素对临床生化检测结果的影响

目前,虽然临床检验项目不断增加、检测方法不断更新,但常规生化项目检测在各临床实验室检测中仍占有较大比重。在临床生化检验过程中,有诸多因素会对检验结果造成影响,尤其是分析前因素。“临床生化检验分析前影响因素”专题汇集了相关热点的2篇综述、1篇论著及2篇病例报道,分别阐述了样本性状、检测方法、样本周转时间(TAT)及各类药物对生化检测结果的影响。临床实验室工作人员应高度关注此类问题,注重患者状态和临床沟通,不断提高检验结果的准确性。

慢性肾脏病患者凝血功能变化及高凝状态影响因素分析

目的探讨慢性肾脏病(CKD)患者凝血功能的变化及高凝状态的影响因素。方法选取2016年1月—2018年12月南京鼓楼医院240例CKD患者。依据肾小球滤过率将CKD患者分为CKD1~CKD5期(CKD1期组~CKD5期组);依据纤维蛋白原(Fib)检测结果将CKD患者分为非高凝状态组和高凝状态组。以45名体检健康者作为对照组。比较各组一般资料、凝血功能及相关实验室检查指标。结果与对照组比较,CKD4期组和CKD5期组Fib、D-二聚体(DD)升高(P<0.05),抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)降低(P<0.05)。CKD5期组Fib、DD、ATⅢ与对照组及CKD1期组~CKD4期组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。肾小球滤过率与Fib、DD呈负相关(r=-0.652,P=0.003;r=-0.732,P=0.001)、与ATⅢ呈正相关(r=0.765,P<0.001)。二元Logisitc回归分析结果显示,肌酐(Cr)、C反应蛋白(CRP)是CKD患者高凝状态的独立危险因素[比值比(OR)值分别为1.352、1.052,95%可信区间(CI)分别为1.089~1.664、0.989~1.122],ATⅢ其保护因素(OR=0.792,95%CI为0.771~0.994)。结论CKD患者存在凝血功能紊乱且随疾病进展而加重,监测患者的凝血功能对预防并发症、改善预后具有重要的临床意义。

“新筛”干血斑在耳聋基因检测中的应用

目的将新生儿遗传代谢病筛查(简称“新筛”)后剩下的干血斑继续用于耳聋基因提取和飞行质谱检测,从而减少耳聋基因检测过程中的取样频次并缩短检测周期。方法在碱水煮沸法提取耳聋基因的基础上优化碱水的pH值和用量,使“新筛”干血斑DNA提取浓度达到新鲜血斑水平。结果用pH值为9、10、11、12的碱水从干血斑中提取DNA时,DNA的浓度与碱水pH值呈正相关(r=0.906,P=0.094),20个耳聋基因位点均能被正常检出;当pH值达到12时,质谱峰图信号响应值减小,检测质量下降。用60、70、80、90μL pH值为11的碱水从“新筛”干血斑中提取DNA时,DNA浓度与碱水体积呈负相关(r=-0.988,P=0.012);用90μL pH值为11的碱水时,有1例样本547G>A位点基因被漏检,用80μL pH值为11的碱水时,DNA提取浓度和新鲜血斑最接近(t=0.035,P=0.974),同时质谱峰图良好。结论用80μL pH值为11的煮沸碱水从“新筛”干血斑中提取DNA,可获得较好的耳聋质谱检测结果,为搭建“新筛”和耳聋自动化检测平台提供一定的技术参考。

未成熟血小板比率在异基因造血干细胞移植预测血小板植入中的价值

目的研究未成熟血小板比率(IPF)指标预测异基因造血干细胞移植(allo-SCT)治疗时血小板(PLT)植入成功的意义。方法检测35例allo-SCT患者外周血PLT、IPF及未成熟血小板绝对值(A-IPF),采用这3项指标预测allo-SCT治疗时PLT植入成功的时间。结果 IPF判断移植患者PLT植入的时间比PLT提前1-3d,A-IPF可以起到很好的补充作用。结论 IPF和A-IPF可更早预测PLT植入时间,可作为临床评价alloSCT后PLT植入新的指标。

IDO/TTS比值在RA排除及病情评估中的价值

目的探讨吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)/色胺酰-tRNA合成酶(TTS)比值在类风湿性关节炎(RA)中的临床意义。方法选取88例RA患者(RA组)和88名体检健康者(正常对照组),采用高效液相色谱法检测血浆犬尿氨酸(Kyn)和色氨酸(Trp)水平,并计算Kyn/Trp比值,采用流式细胞术测定淋巴细胞中IDO和TTS的表达并计算IDO/TTS比值;采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血单个核细胞(PBMC)IDO mRNA、TTS mRNA的相对表达量并计算IDO mRNA/TTS mRNA比值。根据改良疾病活动指数28(DAS28)评分将RA患者分为低活动度组(35例,DAS28评分≤3.2分)、中活动度组(42例,DAS28评分为>3.2分~≤5.1分)和高活动度组(11例,DAS28评分>5.1分)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估IDO/TTS比值在RA排除及病情评估中的价值。结果 RA组血浆Kyn、Trp水平及淋巴细胞TTS的表达量、TTS mRNA的相对表达量均高于正常对照组(P=0.000),Kyn/Trp比值、淋巴细胞IDO的表达量、IDO/TTS比值、IDO mRNA的相对表达量和IDO mRNA/TTS mRNA比值均低于正常对照组(P=0.000)。低活动度组、中活动度组及高活动度组之间IDO/TTS比值依次降低,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,IDO/TTS比值排除RA的曲线下面积(AUC)为0.841,最佳临界值为0.080,敏感性为84.2%,特异性为81.6%,阴性预测值为0.838,阳性预测值为0.821;判断RA病情严重程度的AUC为0.734,最佳临界值为0.042,敏感性为72.1%,特异性为70.7%,阴性预测值为0.626,阳性预测值为0.788。结论 IDO/TTS比值可用于排除RA,对评估RA病情也有较高的价值。

临床常见干扰因素对ctDNA EGFR T790M突变检测的影响

目的探讨临床常见干扰因素对血浆循环肿瘤DNA(ctDNA)表皮生长因子受体(EGFR)T790M突变检测的影响。方法收集7例确认T790M为野生型的正常献血者血浆,添加不同浓度T790M突变质粒及单一干扰物(三酰甘油、胆红素或血红蛋白)模拟干扰血浆,提取DNA后,采用超级突变扩增阻滞系统(SuperARMS)进行T790M突变检测,每份样本重复检测3次,记录DNA浓度、DNA纯度、Super-ARMS检测内控Ct值及T790M突变ΔCt值,应用SPSS 22.0软件对检测结果进行统计学分析。结果临界阳性突变样本DNA浓度极易受胆红素(≥85.5μmol/L)及三酰甘油(≥9.25 mmol/L)干扰(P<0.05),但其纯度不易受干扰;强阳性突变样本DNA浓度可受低浓度胆红素(85.5μmol/L)及高浓度血红蛋白(2.0 g/L)干扰(P<0.05),且纯度受三酰甘油(≥9.25 mmol/L)和血红蛋白(0.5~1.5 g/L)干扰(P<0.05)。脂血对Super-ARMS检测T790M突变的影响最显著,临界阳性、强阳性突变样本内控Ct值及T790M突变ΔCt值均可受三酰甘油(≥9.25 mmol/L)干扰(P<0.05);此外,强阳性突变样本内控Ct值受较高浓度胆红素(≥256.5μmol/L)干扰,T790M突变ΔCt值可受中等浓度血红蛋白(≥1.0 g/L)干扰(P<0.05)。结论不同浓度的血红蛋白、三酰甘油和胆红素对SuperARMS检测ct DNA EGFR T790M突变的各项参数可产生不同程度的影响,在临床实际检测中应尽量避免使用含干扰因素的血浆。