SQLE敲除促进黑色素瘤肿瘤微环境CD8+T细胞浸润发挥抗肿瘤效应

目的探讨黑色素瘤细胞鲨烯环氧合酶(SQLE)基因敲除调控肿瘤微环境T细胞浸润影响机体抗肿瘤效应的作用及其分子机制。方法使用SQLE敲除的B16F10细胞系分别接种免疫完全和免疫缺陷小鼠,明确基因敲除对肿瘤细胞恶性表型的自主和非自主性调控,进一步使用抗体阻断、Luminex多因子检测和流式细胞等技术探索SQLE基因敲除对细胞因子/趋化因子分泌及免疫浸润的影响,结合生物信息学分析,验证SQLE表达与免疫浸润和临床预后的相关性。结果与免疫缺陷型小鼠相比,敲除SQLE显著抑制免疫完全小鼠肿瘤增殖,延长小鼠生存期。SQLE敲除诱导肿瘤细胞分泌细胞因子和趋化因子,增加肿瘤微环境CD8+T细胞浸润从而改善机体抗肿瘤效应。生物信息学分析提示SQLE及其对应的免疫浸润标志物与黑色素瘤患者临床预后明显相关。结论SQLE通过细胞因子和趋化因子调控肿瘤微环境参与机体抗肿瘤效应,有望成为新的肿瘤免疫药物靶点和疗效预测分子指标。

常春藤皂苷元抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖和迁移并诱导其凋亡

目的探讨常春藤皂苷元(HDG)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞增殖、迁移和凋亡的影响及机制。方法人GBM细胞株U87、U251和人脑胶质细胞株(HEB)为研究对象,以HDG 0μmol/L(或0 mg/kg)为对照组,实验组分别给予不同浓度HDG;噻唑蓝法(MTT)、EdU染色及细胞平板克隆检测HDG对GBM细胞增殖的影响;锥虫蓝染色检测HDG对GBM细胞死亡的影响;细胞划痕、Transwell实验检测HDG对GBM细胞迁移和侵袭的影响;Annexin V-FITC、JC-10染色及Western blot检测细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2-Associated X的蛋白质Bax、肿瘤蛋白p53、胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3),分析HDG对GBM细胞凋亡的影响;BALB/C小鼠肿瘤异种移植实验分析HDG对GBM体内荷瘤的影响。结果与对照组(HDG 0μmol/L)比较,HDG对U87、U251细胞的增殖、迁移和侵袭有显著抑制作用,且与HDG剂量呈依赖关系;锥虫蓝染色结果显示HDG导致GBM细胞的死亡数量明显增多;HDG明显诱导U87、U251细胞的线粒体膜电位下降、凋亡细胞数量增加以及凋亡相关蛋白Bax、p53、cleaved-caspase3的表达上调和Bcl-2的表达下调;HDG显著抑制BALB/C小鼠皮下GBM的大小、GBM细胞Ki67的阳性率并导致GBM细胞大量死亡;HDG对人HEB细胞以及荷瘤小鼠肝脏无明显毒性作用。结论HDG对GBM细胞的增殖、迁移和侵袭有显著抑制作用且诱导其凋亡,HDG诱导GBM细胞凋亡的机制可能通过介导线粒体损伤及调控p53、Bcl-2/Bax表达。

蒲公英甾醇对Erastin诱导的软骨细胞铁死亡的保护作用及机制

目的探究蒲公英甾醇(TAR)对Erastin诱导的C28/I2软骨细胞铁死亡的作用。方法用Erastin诱导C28/I2软骨细胞系构建体外软骨细胞铁死亡模型,实验分为Control组、Erastin组、TAR组、TAR+Erastin组。CCK-8法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒和Calcein/PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒检测细胞毒性;流式细胞术检测脂质活性氧(ROS)含量;谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测细胞内GSH含量;JC-1染色和RH123染色检测线粒体膜电位;Western blot法检测铁死亡关键指标酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达变化。结果TAR可以恢复Erastin处理导致的C28/I2软骨细胞细胞活力降低以及减少Erastin诱导的细胞毒性(P<0.01);与Control组比较,Erastin处理后细胞内脂质ROS水平升高(P<0.01),GSH含量降低(P<0.01),而TAR可以减少脂质ROS产生(P<0.01),增加GSH含量(P<0.01);TAR可以恢复铁死亡的C28/I2软骨细胞线粒体膜电位,减少ACSL4蛋白的表达(P<0.01),增加GPX4蛋白的表达(P<0.01);此外,TAR可以恢复IL-1β刺激导致的软骨细胞活力降低。结论TAR可以抑制Erastin诱导的C28/I2软骨细胞铁死亡,这一过程可能与调控ACSL4、GPX4蛋白表达有关。

脑机接口技术对缺血性脑卒中患者平衡功能及血清IL-6、TNF-α水平的影响

目的观察脑机接口控制脚踏训练系统对缺血性脑卒中患者平衡功能及血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。方法选择2022年9月—2023年9月住院治疗的40例缺血性脑卒中患者作为观察对象。根据随机数字表法将患者均分为卒中对照组和卒中实验组。同时招募20例性别、年龄相当的健康受试者作为健康对照组,采集相关足底压力数据。卒中对照组患者接受包括上下肢主被动运动训练系统在内的常规康复训练,卒中实验组将卒中对照组中的上下肢主被动运动训练系统替换为脑机接口控制脚踏训练系统进行康复治疗,其他不变。治疗4周前后使用足底压力评估系统分别采集两组卒中患者睁闭眼状态下的双侧足底压力对称指数(SI)及身体压力中心(COP)摆动面积;采用Fugl-Meyer下肢运动功能评分(FMA-LE)、Berg平衡量表(BBS)对两组卒中患者进行评估;同时比较两组治疗前后血清IL-6、TNF-α水平。结果①两组卒中患者治疗后睁闭眼状态下的SI值及COP摆动面积均较入院前改善,且卒中实验组结果优于卒中对照组(P<0.05),但与健康对照组仍存在差距(P<0.05)。②两组卒中患者治疗后BBS、FMA-LE评分均较治疗前升高,且卒中实验组分数大于卒中对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。③两组卒中患者治疗后血清IL-6、TNF-α水平均较前下降,卒中实验组血清IL-6、TNF-α水平下降程度大于卒中对照组,差异有统计学意义(P<0.001,P<0.05)。结论脑机接口控制脚踏训练系统对于缺血性脑卒中偏瘫患者平衡功能的恢复具有促进作用,其机制可能与血清IL-6、TNF-α水平降低有关。

母胎界面异常导致反复种植失败的免疫因素及治疗进展

随着辅助生殖技术的精进,反复种植失败(RIF)问题越来越不容忽视。近年来RIF已成为生殖领域的热点和难点。妊娠是“半同种异体移植物”胚胎成功侵入子宫内膜的过程,需要在母胎免疫耐受形成的背景下完成。子宫内膜各种免疫细胞或其分泌的细胞因子失衡,会引起母胎界面免疫微环境的异常,不利于胚胎种植及妊娠维持。现对母胎界面中异常免疫微环境导致FIR的研究现状及治疗进展做一综述。

小鼠大脑皮质星形胶质细胞的体外培养方法及优化

目的探究并优化新生小鼠大脑皮质星形胶质细胞体外原代培养方法,为星形胶质细胞的体外培养提供更优解。方法为优化小鼠大脑皮质星形胶质细胞体外培养方法,取新生3 d的C57BL/6J小鼠大脑皮质组织,去除脑膜和血管,经胰酶消化后离心,加入高糖的杜氏改良Eagle培养基(DMEM)吹打形成细胞悬液。进一步通过差速贴壁法、十字交叉手摇法以及恒温振摇法进行纯化,将细胞分别以不同培养密度接种于多聚赖氨酸包被的培养瓶中,并通过形态学观察,免疫荧光染色等方法对星形胶质细胞进行纯度鉴定。结果新生小鼠大脑皮质细胞以5×10^(6)个/瓶密度接种效果好,活性高;纯化过程中使用高糖DMEM培养基联合差速贴壁法、十字交叉手摇法及恒温振摇法,星形胶质细胞纯度可达99%。结论成功建立并优化小鼠大脑皮质星形胶质细胞的原代培养方法。

红细胞分布宽度变异系数及标准差在结直肠癌转移诊断中的临床价值

目的 探讨红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)及标准差(RDW-SD)在结直肠癌(CRC)转移诊断中的临床应用价值。方法 以91例住院CRC患者为研究对象,依据肿瘤是否转移分为2组:未转移组61例和转移组30例,分析两组患者实验室指标包括中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、血小板计数、癌胚抗原、血浆凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、纤维蛋白原、凝血酶时间以及RDW-CV和RDW-SD等。两组均数比较采用t检验,同时运用Pearson相关分析RDW-CV和RDW-SD与中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数-淋巴细胞计数比值(NLR)和癌胚抗原的相关系数,以受试者工作特征曲线(ROC)评估RDW-CV、RDW-SD、癌胚抗原及其联合诊断在评估CRC转移的曲线下面积(AUC)。结果 相较于未转移组,转移组RDW-CV和RDW-SD值升高(P<0.05)。RDW-CV和RDW-SD水平与癌胚抗原含量均呈正相关。与癌胚抗原诊断CRC转移的AUC相比较,RDW-CV或RDW-SD联合癌胚抗原的AUC增高(P<0.05)。结论 RDW-CV和RDW-SD具有鉴别诊断CRC转移的潜在临床应用价值。

miR-26a-3p靶向调控Survivin表达对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的探讨miR-26a-3p对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)损伤的影响及其机制。方法取对数生长期H9c2心肌细胞进行缺氧(1%O 2)6 h,复氧不同时间(2、4、8、12 h)建立细胞H/R模型,另设常氧组,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性;比色法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-26a-3p和生存素(Survivin)mRNA表达水平;Western blot检测细胞中Survivin蛋白表达水平。将miR-26a-3p inhibitor及其阴性对照inhibitor NC、Survivin基因siRNA干扰质粒(si-Survivin)及其阴性对照si-NC共转染至H9c2细胞中,随后进行H/R干预,CCK-8检测各组细胞增殖水平;比色法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及上清液中LDH水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;Western blot检测各组细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、活化型半胱天冬酶-3(cleaved caspase-3)和Survivin蛋白表达水平;双荧光素酶测定miR-26a-3p和Survivin基因的靶向关系。结果与常氧组细胞比较,随着复氧时间的延长,H9c2细胞增殖活性、Survivin mRNA和蛋白表达水平逐渐降低(P<0.05),而LDH及miR-26a-3p表达水平逐渐升高(P<0.05)。下调miR-26a-3p表达可提高H/R暴露下H9c2细胞增殖活性、SOD活性、Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05),同时降低MDA含量、LDH释放量、凋亡率、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平(P<0.05);而Survivin缺失可明显逆转miR-26a-3p inhibitor对H/R诱导下H9c2细胞的保护作用。双荧光素酶报告基因实验表明Survivin是miR-93-5p的靶基因。结论miR-26a-3p在H/R诱导的心肌细胞损伤中高表达,抑制miR-26a-3p表达可通过靶向上调Survivin表达抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激。

甘草酸介导miRNAs对大鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的探讨miRNAs在甘草酸治疗大鼠酒精性肝损伤过程中的作用及其机制。方法将45只雄性SD大鼠随机分成甘草酸组(灌胃56%白酒和甘草酸)、模型组(灌胃56%白酒)和对照组(灌胃蒸馏水),给药8周后采集血液和肝组织。检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;提取肝组织RNA,大鼠miRNA芯片检测,对miRNA表达量进行分析,对差异miRNA进行靶基因预测,并采用Gene Ontology(GO)和KEGG Pathway富集分析了解差异miRNA的功能,使用Cytoscape构建差异miRNA-mRNA-Pathway调控网络进一步筛选调控关键miRNA与通路,qRT-PCR对挑选的miRNA进行表达量验证分析。结果与模型组相比,甘草酸组能改善肝组织病变,降低肝血清AST和ALT水平(P<0.05)。通过比较分析甘草酸组和模型组芯片数据,共筛选出差异表达miRNA 13个(P<0.05,fold change≥1.5),其中上调10个,下调3个。差异miRNA靶基因GO分类注释显示,差异miRNA主要与细胞黏附、抗氧化活性、代谢过程、生物过程调控、细胞杀伤、免疫系统等功能相关。差异miRNA靶基因KEGG Pathway通路分析显示,MAPK信号通路、mTOR信号通路、Ras信号通路、Hippo信号通路、PI3K-Akt信号通路、wnt信号通路、细胞凋亡等信号通路可能在甘草酸改善酒精性肝损伤病变过程中发挥着重要的调控作用。结论该研究建立了甘草酸治疗大鼠酒精性肝损伤的miRNA表达谱,提示miR-615、miR-107-3p和miR-292-5p可能在甘草酸治疗酒精性肝损伤过程中起着重要的作用。

TLR4/RhoA信号通路调控连续血液滤过治疗引起脓毒症内皮细胞通透性变化的机制

目的探讨Toll样受体4(TLR4)/Ras同源基因家族成员A(RhoA)信号通路参与调控连续血液滤过前后脓毒症血清对血管内皮细胞通透性影响的分子机制。方法收集5例经连续血液滤过治疗前后的脓毒症患者血清,检测滤过前后血清中炎症细胞因子含量;应用滤过前后血清干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24 h,检测经连续滤过治疗前后的血清干预对于血管内皮细胞钙黏蛋白(VE-cadherin)、聚合肌动蛋白丝(F-actin)、TLR4和RhoA表达的影响;构建TLR4低表达细胞株,检测TLR4低表达对血管内皮细胞钙黏蛋白(VE-cadherin)、F-actin和RhoA表达的影响及其对内皮细胞通透性的影响。结果滤过后血清中TLR4、RhoA、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量均显著降低;滤过后血清干预组VE-cadherin、F-actin、TLR4和RhoA的表达水平均显著降低,同时细胞通透性明显降低;TLR4低表达可明显促进VE-cadherin和F-actin的表达,抑制RhoA蛋白的表达。结论TLR4/RhoA信号通路参与了连续血液滤过治疗引起脓毒症血清对血管内皮细胞通透性变化的调节。

白藜芦醇改善野百合碱所致大鼠肝损伤机制的初步研究

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)激动剂白藜芦醇对野百合碱所致肝窦阻塞综合征的保护作用及其可能机制。方法32只雄性SD大鼠随机分为对照组(8只)、野百合碱组(12只)和白藜芦醇组(12只)。野百合碱组和白藜芦醇组给予野百合碱(160 mg/kg)单次灌胃;白藜芦醇组于野百合碱灌胃前1 d开始每天给予白藜芦醇溶液(30 mg/kg)腹腔注射。在给予野百合碱2 d后结束实验。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBiL)和肝组织内谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平,观察肝脏病理变化,应用Western blot检测肝脏SIRT1、HIF-1α和VEGF蛋白的表达水平。结果与对照组相比,野百合碱组大鼠单次灌胃后血清ALT、AST及TBiL有所升高(均P<0.01),肝脏GSH水平降低(P<0.01)、MDA升高(P<0.01);肝脏组织病理学可见肝细胞排列紊乱,并出现变性、坏死,肝窦淤血扩张,中央静脉内皮损伤,SIRT1蛋白的表达水平降低(P<0.01),HIF-1α和VEGF蛋白的表达水平有所增加(P<0.01)。使用白藜芦醇干预后,血清ALT、AST、TBiL指标下降(P<0.05或P<0.01),肝脏GSH水平升高(P<0.01)、MDA降低(P<0.01),并可以抑制野百合碱引起的肝脏病理损伤,SIRT1蛋白的表达水平升高(P<0.01),HIF-1α和VEGF蛋白表达下调(P<0.01)。结论白藜芦醇可以改善野百合碱引起的大鼠肝窦阻塞综合征,其机制与激活SIRT1、抑制HIF-1α/VEGF信号通路及抗氧化应激相关。

猕猴原代肾小球系膜细胞分离提取培养与鉴定

目的探索一种简单方便、重复性好的非人灵长类动物原代肾小球系膜细胞(GMCs)体外提取、培养及鉴定的方法。方法在无菌条件下取出猕猴肾脏,利用两种不同孔径的纱网(介于100目到200目之间)分离出肾小球,设置不同浓度(0.1、0.2 mg/ml)Ⅵ型胶原酶消化肾小球,同时在这两个浓度基础上设置不同消化时间(10、15 min),将消化后的肾小球接种到细胞瓶中,观察不同消化条件下GMCs的生长状况。显微镜下观察GMCs的结构,免疫荧光和Western blot法检测GMCs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Nephrin蛋白的表达。利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激后观察GMCs生物学特性,CCK-8法和高内涵细胞成像系统法分别检测GMCs活力和增殖情况;Transwell法和细胞划痕实验检测GMCs迁移能力。结果利用0.1 mg/mlⅥ型胶原酶消化10 min搜集到的肾小球贴壁较多,肾小球细胞生长状态较好。原代培养的肾小球3 d贴壁,7 d开始移出不规则形状或星状的细胞,经21~35 d GMCs逐渐铺满瓶底。GMCs中α-SMA蛋白阳性,Nephrin蛋白阴性。10 ng/ml TNF-α体外刺激能显著增强GMCs的增殖与迁移能力。结论利用胶原酶消化法(0.1 mg/mlⅥ型胶原酶消化10 min)成功建立了GMCs的分离及培养的方法体系,为之后更好模拟人类肾脏疾病提供合适的细胞模型。

肺淋巴循环障碍对矽肺发病进程的影响研究

目的 探讨肺淋巴循环障碍对矽肺发病进程的影响。方法 采用胸导管结扎建立肺淋巴循环障碍模型。SPF级成年雄性SD大鼠24只随机分为对照组、结扎对照组、矽肺组、矽肺+结扎胸导管组(以下简称矽肺+结扎组)。每组各6只。对照组不做处理;结扎对照组给大鼠结扎胸导管后正常饲养;矽肺组大鼠采用动式染尘法建立矽肺模型(染尘仓内SiO_(2)粉尘浓度2000 mg/m^(3),每天给予大鼠动式染尘3 h);矽肺+结扎组大鼠先手术结扎大鼠胸导管,再进行动式染尘,染尘条件与矽肺组相同。HE染色观察肺组织病理变化;天狼猩红染色观察胶原沉积;免疫组化观察肺部淋巴管增生;Western blot检测大鼠肺组织中核转录因子(NF-κBp65)和血管内皮生长因子受体(VEGFR-3)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。结果 HE和天狼猩红染色结果显示,相较于对照组,矽肺组和矽肺+结扎组大鼠肺组织病变更为严重。免疫组化结果显示矽肺组和矽肺+结扎组大鼠肺组织内有淋巴管增生。Western blot结果显示肺组织中NF-κBp65和α-SMA的蛋白含量矽肺+结扎组均高于矽肺组,分别为(2.42±0.05)vs(1.80±0.01)、(2.81±0.06)vs(2.57±0.01)。相反,矽肺+结扎组大鼠肺组织内VEGFR-3的含量低于矽肺组(0.87±0.01)vs(0.97±0.03)。结论 结扎胸导管可使矽肺大鼠肺部出现淋巴循环障碍,加快矽肺发病进程。

大麻二酚上调BDNF、突触蛋白发挥抗抑郁作用

目的研究大麻二酚(CBD)对抑郁样小鼠的快速抗抑郁作用及可能的作用机制。方法采用慢性束缚建立小鼠抑郁模型。将供试小鼠分为5组:正常对照组、模型组、阳性对照组、CBD低剂量组(25 mg/kg)、CBD高剂量组(50 mg/kg)。在行为学实验前1 h对每组小鼠灌胃给药。行为学实验结束后,收集海马和前额皮层样本,采用ELISA测定脑源神经营养因子(BDNF)、突触后密度-95蛋白(PSD-95)、突触素(SYP)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)。结果与模型组相比,CBD低剂量组旷场实验中央区域活动路程百分比、中央区域活动时间百分比和总路程均增加。与模型组相比,CBD低剂量组强迫游泳实验不动时间百分比降低。ELISA检测结果显示,CBD能快速上调前额皮层中BDNF、PSD-95浓度,快速上调海马和前额皮层中SYP、mTOR浓度。结论CBD能快速改善抑郁样小鼠的行为学表现,快速上调海马或前额皮层中的BDNF、突触蛋白水平。

红景天苷抑制内质网应激和细胞凋亡减轻心脏缺血再灌注损伤

目的观察红景天苷(Sal)在大鼠离体心脏缺血再灌注(IR)中的作用并探讨其对内质网应激(ERS)和细胞凋亡的调控机制。方法制备大鼠离体心脏缺血再灌注模型,缺血45 min,再灌注2 h,随机分为4组(n=10):对照(Control)组、Sal处理(Sal)组、缺血再灌注(IR)组及Sal处理缺血再灌注(IR+Sal)组。氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死面积,ELISA法检测灌注液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,测量左室内收缩峰压(LVSP)和舒张末压(LVEDP),Western blot检测B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)和转录活化因子6(ATF6)的表达,TUNEL染色观察细胞凋亡。结果Sal组和Control组各指标之间比较差异均无统计学意义;与Control组比较,IR组心肌梗死面积和灌注液中LDH活性增加,LVSP降低,LVEDP增加,Bax表达增加,Bcl-2表达减少,TUNEL阳性细胞数增加,ERS相关蛋白PERK、CHOP和ATF6的表达增加;与IR组比较,IR+Sal组心肌梗死面积和灌注液中LDH活性减小,LVSP增加,LVEDP降低,Bax表达减少,Bcl-2表达增加,TUNEL阳性细胞数减少,ERS相关蛋白PERK、CHOP和ATF6的表达降低。结论Sal通过抑制ERS和细胞凋亡改善大鼠离体心脏IR损伤。

羊毛固醇合成酶杂合敲除小鼠全脑转录组学分析

目的探讨羊毛固醇合成酶(LSS)基因功能异常及胆固醇水平变化对大脑功能分子水平的影响。方法通过RNA-Seq分析LSS(+/-)小鼠及野生型(WT)C57BL/6小鼠基因的表达,KEGG富集分析差异基因涉及的信号通路。用实时定量PCR以及Western blot法检测差异基因的表达。结果通过RNA-Seq分析,LSS(+/-)杂合敲除导致小鼠大脑中320个基因表达出现变化,其中上调基因145个,下调175个,KEGG富集分析差异基因涉及神经活化的受体与配体通路、河马信号途径及谷氨酸能突触途径。实时定量PCR分析结果显示CCKBR与Htr5b分别出现上调。Western blot结果显示CCKBR基因在LSS(+/-)小鼠全脑组织总蛋白中明显高表达。结论LSS(+/-)杂合敲除会影响小鼠大脑功能及行为。

灯盏花素通过调节Nrf2途径抑制大鼠颅内动脉瘤的形成和机制

目的探究灯盏花素(Bre)对大鼠模型中颅内动脉瘤(IA)的形成和对核因子E2相关因子2(Nrf2)途径的影响。方法通过弹性蛋白酶注射建立大鼠IA模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、Bre组,每组15只。Bre组每天腹腔注射50 mg/kg Bre,假手术组和模型组腹腔注射等体积生理盐水,持续3周,在此期间记录IA的发生率、生存率和收缩压,免疫荧光染色和qRT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和平滑肌22α(SM22α)的表达。使用过氧化氢(H_(2)O_(2),0.5 mmol/L)处理大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)诱导氧化损伤,然后与Bre(100μmol/L)或(和)ML385(Nrf2抑制剂)共孵育,Western blot、qRT-PCR、ELISA、DCFH-DA荧光染色、流式细胞术分别检测Nrf2、收缩表型相关蛋白和炎性细胞因子的表达、活性氧的产生和细胞凋亡率。结果在IA大鼠中,Bre处理上调核Nrf2的表达,改善IA病理变化,降低IA的发生率,改善生存率,并降低收缩压。在H_(2)O_(2)处理的VSMC中,Bre预处理升高Nrf2、抗氧化酶、α-SMA和SM22α的表达,降低基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9表达、活性氧的产生和细胞凋亡,减轻脑动脉中炎性细胞浸润和促炎性细胞因子的表达。抑制Nrf2减弱了Bre预处理在H_(2)O_(2)处理的VSMC中的治疗效果。结论Bre可有效降低VSMC中的氧化应激和炎症反应,从而减轻大鼠中IA的形成和破裂,其机制可能与Nrf2途径的激活有关。

甘草甜素对小鼠矽肺纤维化的干预作用

目的探讨甘草甜素对二氧化硅诱导的小鼠矽肺纤维化的作用。方法将C57BL/6雄性小鼠,随机分为对照组、矽肺模型组及甘草甜素治疗组,每组6只。通过HE染色和天狼星红染色观察小鼠肺组织病理变化;采用肺功能仪测定小鼠肺功能,并使用试剂盒检测小鼠肺组织中羟脯氨酸含量;采用实时荧光定量PCR分析单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、纤连蛋白(FN)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达水平;对肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数进行计数,并采用ELISA法检测BALF中转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量。结果HE和天狼星红染色结果显示,与对照组相比,矽肺模型组小鼠肺组织中炎症细胞聚集、胶原分布增多,经甘草甜素治疗后,小鼠肺组织中炎症细胞和胶原分布均减少。与对照组相比,矽肺模型组小鼠呼吸暂停(PAU)和气道狭窄指数(Penh)均升高(P<0.05),而经甘草甜素治疗后,小鼠肺功能得到改善。此外,甘草甜素还可以有效降低二氧化硅引起的小鼠肺组织中羟脯氨酸含量的增加,MCP-1、FN和α-SMA mRNA的高表达以及BALF中白细胞总数和TGF-β1含量的增加(P<0.05)。结论甘草甜素可以改善矽肺小鼠的肺功能、缓解其纤维化进程。

小鼠孕晚期暴露脂多糖对老年期海马GSNOR含量及与认知功能损害相关性研究

目的探讨海马S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)水平与孕晚期炎症暴露引起的老年母鼠空间学习记忆能力改变的相关性。方法怀孕15 d的CD-1母鼠随机分为细菌脂多糖暴露组(LPS)和对照组(CON),连续4 d经腹腔注射细菌脂多糖(LPS,50μg/kg;LPS组)或等容积生理盐水(CON组)。饲养母鼠至6月龄和18月龄时,Morris水迷宫(MWM)检测空间学习记忆能力、Western blot检测海马GSNOR水平。结果18-CON组比6-CON组,在水迷宫中平均游泳路程延长(P<0.01),靶象限游泳路程百分比和海马GSNOR水平均下降(P<0.01),18-LPS组与18-CON组比较也具有相同结果。Pearson相关分析显示,GSNOR水平与平均游泳路程呈负相关,与靶象限游泳路程百分比呈正相关。结论孕晚期炎症暴露加重小鼠海马GSNOR水平的年龄相关性改变,这可能与老年期空间学习记忆损害有关。

巨噬细胞Lamtor2基因敲除小鼠对肺炎克雷伯菌易感性的研究

目的通过建立Lamtor2巨噬细胞条件敲除小鼠感染肺炎克雷伯菌(Kp)模型,初步研究Lamtor2基因生物学功能及其在Kp感染过程中的相关机制。方法将引进的Lamtor2^(flox/+)小鼠自交,Lyz2-Cre小鼠与Lamtor2^(flox/+)进行杂交,获得基因型为Lamtor2^(flox/flox)Lyz2-Cre^(-/-)和Lamtor2^(flox/+)Lyz2-Cre^(+/-)的子代小鼠;将上述两种基因型子代小鼠进行杂交,得到对照组小鼠(Lamtor2^(flox/flox)Lyz2-Cre^(-/-))和Lamtor2条件性基因敲除小鼠(Lamtor2^(flox/floxLyz)2-Cre^(+/-))。提取小鼠脚趾基因组DNA,经聚合酶链式反应(PCR)扩增,通过琼脂糖凝胶电泳鉴定子代小鼠基因型并提取肺泡巨噬细胞,利用qRT-PCR和Western blot验证Lamtor2基因敲除效果。小鼠感染Kp,观察生存状况;体外采用RT-qPCR检测Kp感染肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和Cxcl1表达水平,两组间比较采用t检验;Western blot验证iNOS的表达水平。结果成功建立Lamtor2条件性基因敲除小鼠模型,子代存活且可育;与对照组小鼠比较,实验组小鼠在感染Kp后生存率降低;Lamtor2^(flox/flox)Lyz2-Cre^(+/-)小鼠来源的肺泡巨噬细胞中的TNF-α(t=17.54,P=0.0032)、IL-1β(t=15.37,P=0.0042)和Cxcl1(t=37.82,P=0.0007)表达水平降低,且iNOS表达下降。结论构建了Lamtor2条件性基因敲除小鼠,感染肺炎克雷伯菌后,小鼠的生存率下降;肺泡巨噬细胞iNOS表达降低。