内侧前额叶皮质谷氨酸能神经元参与CD1小鼠攻击行为的机制研究

目的研究CD1小鼠发动攻击行为的内在神经机制。方法通过驻地入侵实验筛选出具有攻击行为的CD1小鼠,攻击配对偏好进一步验证后使用c-Fos标记全脑激活的脑区,通过免疫荧光双标实验分析攻击行为激活了哪种类型的神经元,最后使用光遗传学调控该类神经元的活性,观察其对攻击行为的影响。结果通过c-Fos筛选,约82%的CD1小鼠表现出攻击行为;攻击行为发生后主要激活内侧前额叶皮质(medial prefrontal cortex,mPFC),免疫荧光双标结果显示mPFC脑区c-Fos阳性神经元主要是谷氨酸能神经元;最后,我们通过光遗传激活mPFC脑区谷氨酸能神经元,发现其能够抑制CD1小鼠的攻击行为;相反,光遗传抑制mPFC脑区谷氨酸能神经元,能够促进CD1小鼠的攻击行为。结论mPFC脑区谷氨酸能神经元是调控CD1小鼠发动攻击行为的重要组成部分。

阿尔茨海默病血清外泌体miRNA生物标志物的筛选研究

目的通过比较阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者与健康对照者的血清外泌体中miRNAs的表达,筛选出差异表达的miRNAs。方法收集2017年3月至2018年8月就诊于中南大学湘雅医院老年神经内科的AD患者71例为研究组(AD),健康体检者71例为对照组(HC)。各组选取4例样本行血清外泌体miRNAs高通量二代测序,检测、分析2组间差异表达的miRNAs,筛选出表达差异有统计学意义、表达量最高的前4种miRNAs,在71例AD患者和71例健康体检者样本中用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定其相对浓度。结果高通量二代测序共检测到775种miRNAs,其中有44种miRNAs在2组间表达差异有统计学意义(P<0.05)。与HC组相比,AD组中有34种miRNAs表达上调,10种miRNAs表达下调,其中表达量最高的前4种miRNAs为miRNA-148a-3p、miRNA-16-5p、miRNA-19b-3p、miRNA-483-5p。MiRNA-148a-3p表达在AD组中较HC组显著上调(P<0.01),但miRNA-16-5p、miRNA-19b-3p、miRNA-483-5p在2组间表达差异无统计学意义。绘制ROC曲线,miRNA-148a-3p的AUC为0.7113(95%CI:0.622~0.801),灵感度为71.6%,特异度为69.7%。结论血清外泌体miRNA-148a-3p可望作为AD诊断的生物标志物。

血液肿瘤精准诊治

目的 随着对血液肿瘤发病机制的深入研究,血液肿瘤的精准诊断和分层治疗逐年优化提升。近年来在人工智能的推动下,血液肿瘤诊断由人工化、经验化不断向智能化、信息化升级,在未来有望实现高效、高准确率的智能诊断;同时,小分子药物、抗体类药物、免疫细胞治疗及造血干细胞移植新疗法在不断完善,新药不断涌现,为血液肿瘤的治疗提供了更多选择。本文从血液肿瘤的精准/智能诊断、药物治疗和细胞治疗等3个方面探讨血液肿瘤的精准诊断与治疗。

基于机器学习构建急性心力衰竭患者易损期死亡或再入院风险预测模型

目的应用不同机器学习算法构建急性心力衰竭(acute heart failure,AHF)患者易损期死亡或再入院的风险预测模型,并筛选出最优模型。方法选取2019年10月至2021年7月于陆军军医大学第二附属医院心血管内科住院治疗的651例AHF患者为研究对象,收集入院生命体征、合并症和实验室检查结果等临床资料。复合终点事件定义为AHF患者出院后3个月内发生全因死亡或心衰加重再入院。采用简单随机抽样法将研究对象按8∶2拆分为训练集(521例)和测试集(130例),基于逻辑回归(logistic regression,LR)、随机森林(random forest,RF)、决策树(decision tree,DT)、轻量梯度提升(light gradient boosting machine,LGBM)、极端梯度提升(extreme gradient boosting,XGBoost)和神经网络(neural network,NN)6种机器学习算法分别构建预测模型。采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)和临床决策曲线(decision curve analysis,DCA)对模型的预测性能和临床获益进行评价,使用Shapley加性解释(Shapley additive explanation,SHAP)算法评估不同临床特征对模型的影响。结果651例AHF患者中发生复合终点事件203例(31.2%)。ROC曲线分析显示,LR、RF、DT、LGBM、XGBoost和NN模型的曲线下面积(area under curve,AUC)依次为0.707、0.756、0.616、0.677、0.768、0.681,XGBoost模型的AUC最高,DCA曲线中XGBoost模型的临床决策净获益也更大,整体预测效能最佳。SHAP算法分析得出,影响XGBoost模型输出结果的重要临床特征分别为血清尿酸、D-二聚体、平均动脉压、B型利钠肽、左房前后径、体质量指数和NYHA分级。结论XGBoost模型预测急性心力衰竭患者易损期死亡或再入院风险效果最佳。

肺癌患者术后深静脉血栓形成风险预测模型的构建

目的探讨肺癌患者术后深静脉血栓形成(deep vein thrombosis,DVT)的独立危险因素,并构建风险预测模型。方法收集2019年5月至2023年5月在陆军军医大学第一附属医院胸外科接受肺癌胸腔镜手术的354例住院患者。采用LASSO回归筛选潜在因素后,行多因素Logistic回归筛选危险因素并构建列线图预测模型,通过绘制校准度曲线、接受者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线和决策曲线分析法(decision curve analysis,DCA)评价模型的校准度、区分度、灵敏度、特异度及临床有效性。使用净重新分类改善指数(net reclassification index,NRI)和综合判别改善指数(integrated discrimination improvement,IDI)比较本研究构建模型与Caprini模型对于结局事件的预测性能优劣。结果LASSO回归筛选出17个潜在的影响因素,以此行多因素回归分析结果显示,D-二聚体、中心静脉导管(central venous catheter,CVC)和下肢静脉曲张为肺癌患者胸腔镜术后DVT的独立危险因素(P<0.05)。模型校准曲线结果显示,预测曲线与标准曲线拟优度良好。ROC曲线分析结果显示,建模组最佳截断值敏感度和特异度分别为0.812和0.963,建模组曲线下面积(area under curve,AUC)为0.912(95%CI:0.840~0.983),而Caprini模型敏感度和特异度分别为0.625和0.860,AUC为0.752(95%CI:0.657~0.846),建模组相较于Caprini模型的NRI为0.709,IDI为0.431。DCA结果显示,应用本研究模型的净收益高于Caprini模型。结论D-二聚体、CVC和下肢静脉曲张为肺癌患者胸腔镜术后DVT的独立危险因素,本研究构建的列线图模型能够有效预测肺癌患者胸腔镜术后DVT发生风险。

因战而生,向战而行——回望百年中国共产党领导下的战创伤医学发展

我军野战外科始于第二次国内革命战争,历经奠基起步、积累充实、成熟发展和战略提升4个阶段,已发展成为国家重点学科及国际上有重要影响力的学科。20世纪80年代,第三军医大学老一辈军事医学专家本着寓军于民、服务国家重大需求的家国情怀,将战时创伤与平时创伤相结合,由此推动了我国创伤医学的发展。特别是近40年来,我国战创伤医学已取得历史性成就,发生了历史性变化。现拥有国家重点实验室和国家临床医学中心,成为服务国家重大需求的战略科技力量。

BMAL1基因单核苷酸多态性与双相情感障碍的关联性研究

目的探讨节律基因BMAL1单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与双相情感障碍(bipolar disorder,BD)易感性及临床特征的关联性。方法采用病例对照研究,选取2018年12月至2020年1月在四川大学华西医院心理卫生中心及四川省人民医院心身医学中心门诊及住院就诊的BD患者136例和正常对照者130例,分为BD组与对照组。采用SNapShot分型技术进行外周血BMAL1基因的16个SNP位点基因分型,TT3、TT4、FT3、FT4和COR使用电化学发光定量分析进行检测,促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)使用ELISA法进行检测,促肾上腺皮质激素(adrenocor ticotropic hormone,ACTH)采用放射免疫分析法进行检测。统计分析节律基因BMAL1单核苷酸多态性与双相情感障碍易感性及临床特征的关联性。结果BMAL1基因的rs11022765 C、rs10832022 A和rs6486116 C等位基因携带者在BD组的分布频率均显著高于对照组(P=0.009,0.005,0.010)。rs6486116-rs10832020的CT单倍型在BD组(57.4%)分布显著高于对照组(48.5%)(P=0.040);rs10832022-rs11022765-rs11022762的GAT单倍型在BD组(30.1%)分布显著低于对照组(42.7%)(P=0.003)。rs11022765不同基因型患者的NEO-FFI外倾性因子评分有显著差异(P<0.001)。rs10832022、rs11022765不同基因型患者的HPT轴异常率均有显著差异(P=0.013,P=0.012)。结论节律基因BMAL1的SNP变异可能与BD易感性有关,且与BD特定临床表型相关联。

M6A甲基化调控因子对结直肠癌预后及细胞生物学行为的影响

目的探讨N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)相关基因对结直肠癌预后及细胞生物学行为的影响。方法从肿瘤基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)下载长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)和21个M6A相关基因的表达谱数据,R软件分析差异基因;聚类分析和主成分分析(principal component analysis,PCA)分析M6A相关基因;单因素Cox回归分析筛选预后相关M6A基因,LASSO算法建立风险预测模型;筛选结直肠癌相关差异lncRNA(differentially expressed lncRNA,DElncRNA),与M6A相关基因建立共表达网络。使用实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测M6A reader脆性X智力低下1(fragile X mental retardation 1,FMR1)在结直肠癌组织中的表达,在结直肠癌细胞中敲除FMR1基因,通过CCK-8、划痕实验、Transwell和细胞凋亡实验检测细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡情况。结果21个M6A相关基因中有15个基因在结直肠癌中差异表达。聚类分析显示,结直肠癌肿瘤分成2种亚型;从建立的风险模型得出烷基化修复同源蛋白5(a-ketoglutarate-dependent dioxygenase alk B homolog 5,ALKBH5)、YTH结构域蛋白2(YTH domaincontaining protein 2,YTHDC2)和FMR1可能是独立的预后因子。随后,筛选出1784个DElncRNA,构建包含3个预后因子和18个DElncRNAs的共表达网络。网络图中发现FMR1基因占主导地位,RT-qPCR实验发现FMR1在结直肠癌组织中上调;FMR1基因的敲除能抑制结直肠癌HT-29细胞的增殖,迁移和侵袭能力,促进结直肠癌细胞的凋亡。结论M6A甲基化调控因子ALKBH5、YTHDC2和FMR1可能是结直肠癌中的独立预后因子,FMR1基因的敲除能抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭,促进结直肠癌细胞的凋亡。

知觉压力对重症监护室护士焦虑、抑郁情绪的影响:正念和心理弹性的链式中介作用

目的研究正念和心理弹性在重症监护室(intensive care unit,ICU)护士知觉压力与焦虑、抑郁情绪的中介作用。方法采用便利抽样法,使用一般资料调查表、知觉压力量表(Chinese Perceived Stress Scale,CPSS)、心理弹性量表(Connor-Davidson Resilience Scale,CD-RISC)、焦虑自评量表(Self-rating Anxiety Scale,SAS)、抑郁自评量表(Self-rating Depression Scale,SDS)、正念注意觉知量表(Mindful Attention Awareness Scale,MAAS)对2021年4-7月重庆市15所医院的563名ICU护士进行问卷调查。结果ICU护士焦虑自评量表得分(45.99±10.10)分,抑郁自评量表得分(48.62±11.41)分;单因素分析显示性别和收入是ICU护士焦虑情绪的影响因素(P<0.05),性别、职称、收入和现患疾病是ICU护士抑郁情绪的影响因素(P<0.05);Pearson相关性分析显示焦虑与知觉压力呈正相关(r=0.578,P<0.01),与心理弹性和正念呈负相关(r=-0.487、-0.525,P<0.01),抑郁与知觉压力呈正相关(r=0.591,P<0.01),与心理弹性和正念呈负相关(r=-0.569、-0.552,P<0.01);中介效应分析提示正念和心理弹性在ICU护士知觉压力与焦虑、抑郁情绪中起链式中介作用(P<0.01)。结论ICU护士存在较高的焦虑、抑郁情绪,正念和心理弹性在ICU护士知觉压力与焦虑、抑郁情绪中起链式中介作用。

柴胡皂苷D对大鼠免疫性肝纤维化的保护作用及其机制研究

目的结合网络药理学分析与动物实验验证,探讨柴胡皂苷D(saikosaponin D,SSD)对猪血清诱导的大鼠免疫性肝纤维化的保护作用及机制。方法网络药理学分析方法获得SSD与自身免疫性肝病的潜在靶点,利用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白相互作用网络图。利用DAVID数据库对潜在靶点进行KEGG通路富集分析。制备大鼠免疫性肝纤维化模型,SSD干预后ELISA检测大鼠血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β和IL-18水平,HE染色观察大鼠肝脏病理改变,Western blot检测大鼠肝脏组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、TLR4、Myd88、p65及p-p65蛋白的表达。结果通过筛选获得SSD与自身免疫性肝病的潜在靶点177个,KEGG富集分析得到与免疫系统相关的通路主要包括NOD样受体信号通路等,获得潜在靶点在NOD样受体信号通路中的富集情况。实验研究显示与模型组比较,高剂量SSD可显著降低大鼠血清中ALT和AST水平(P<0.05);病理组织学检测显示SSD可显著改善大鼠肝脏纤维化程度,减轻肝脏损伤;ELISA检测显示中、高剂量SSD可显著降低大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-18的水平(P<0.05);Western blot检测显示SSD可明显下调NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、TLR4、Myd88和p65蛋白的水平,并抑制p65的磷酸化。结论SSD能减少免疫性肝纤维化大鼠血清中炎性因子释放、减轻肝脏细胞损伤,其机制可能与调控TLR4/NF-κB和NLRP3炎症小体信号通路有关。

基于体表大数据构建中青年下肢冠状面力线不良预测模型

目的基于体表大数据构建我国中青年下肢冠状面力线不良预测模型,为临床工作提供更加快速、准确的下肢冠状面力不良预测方法。方法采用横断面研究设计方案,筛选陆军军医大学第一附属医院运动医学中心2022年5月至2023年12月收治的915例膝关节半月板撕裂患者的病历资料,测量其下肢冠状面力线(简称下肢力线)。按照下肢力线分级标准将915例患者分中立位下肢力线及下肢力线不良两组,按照7∶3随机分为训练集和验证集。分析训练集性别、年龄及体表大数据(包括BMI、下肢长、双膝距、双踝距、皮下脂肪厚度)的7项指标用于预测下肢力线不良的价值,建立Logistic回归模型并使用列线图对模型进行可视化,使用校准曲线、ROC曲线和DCA曲线评估模型对下肢力线不良的诊断效能。结果训练集640例,其中男性299例,女性341例,中位年龄41.5岁;验证集275例,其中男性128例,女性147例,中位年龄41.0岁。训练集中中立位下肢力线和下肢力线不良两组间的性别、年龄、BMI等7项指标之间的差异均有统计学意义(P<0.01)。多因素Logistic回归构建了含BMI[(24.31±3.58)kg/m^(2);OR=1.12,95%CI:1.06~1.19,P<0.001]、下肢长[82.00(78.00~87.00)cm;OR=0.95,95%CI:0.92~0.98,P=0.002]、双膝距[30.00(16.00~45.25)mm;OR=1.06,95%CI:1.05~1.07,P<0.001]、双踝距[23.00(18.00~30.00)mm;OR=0.98,95%CI:0.96~1.00,P=0.078]、性别[男性299(46.72%);OR=0.70,95%CI:0.46~1.06,P=0.089]的预测模型,模型预测下肢力线不良的受试者操作曲线下面积(area under the subject curve,AUC)在训练集和验证集中分别为0.808、0.770。结论基于体表大数据,初步构建我国中青年下肢力线不良预测模型,其对于下肢力线不良的诊断效能较高。

NLRP3/Caspase-1/IL-1β炎症小体通路在小鼠主动脉夹层形成中的作用

目的探讨NLRP3/Caspase-1/IL-1β炎症小体通路在小鼠主动脉夹层形成中的作用及机制。方法50只3周龄雄性C57BL/6小鼠(体质量10~13 g)按随机抽样法分为对照组(n=10,无干预)、β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)组[n=20,饮水中加入1 g/(kg·d)BAPN]、BAPN+MCC950组[n=20,饮水中加入1 g/(kg·d)BAPN、腹腔注射NLRP3抑制剂MCC95020 mg/(kg·d)]。记录各组小鼠饮水量、体质量、主动脉夹层发生率、夹层相关病死率。采用HE染色观察主动脉壁炎症浸润;弹力纤维(elastic Van Gieson,EVG)染色观察主动脉壁弹力纤维断裂。采用免疫荧光检测NLRP3、IL-1β、α-SMA、OPN的平均荧光强度。采用Western blot检测NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β、α-SMA、OPN表达水平。结果对照组无主动脉夹层发生及死亡,BAPN组主动脉夹层发生率为80%,夹层相关病死率为35%,且主动脉血管壁弹力纤维断裂、明显炎症浸润。与对照组比较,BAPN组中NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β蛋白表达增加,收缩型蛋白α-SMA减少而合成型蛋白OPN增加(P<0.05)。而给予NLRP3特异性抑制剂MCC950后,主动脉夹层发生率下降(80%vs 35%,P=0.004),夹层相关病死率下降(35%vs 15%,P=0.144),血管壁弹力纤维断裂、炎症浸润减少;与BAPN组比较,BAPN+MCC950组NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β蛋白表达降低,收缩型蛋白α-SMA表达增加而合成型蛋白OPN表达降低(P<0.05)。结论小鼠主动脉夹层的发生与NLRP3/Caspase-1/IL-1β炎症小体通路活化有关,而NLRP3抑制剂MCC950能减少主动脉夹层发生,具有血管保护作用。

维得利珠单抗与英夫利昔单抗在中重度溃疡性结肠炎患者中的真实世界研究

目的通过多中心回顾性队列研究比较维得利珠(vedolizumab,VDZ)和英夫利昔单抗(infliximab,IFX)在中重度溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者中的疗效和安全性。方法收集2021年1月至2023年1月于西南地区三家医院就诊的中重度UC患者,所有患者均为生物制剂初始治疗且接受IFX或VDZ治疗至少14周。比较两组患者的14周及52周无激素缓解率、临床缓解率、内镜缓解率,并记录治疗期间的不良事件。分别以治疗14周和52周能否达到黏膜愈合为因变量,首先通过单因素分析探索影响14周和52周黏膜愈合的危险因素,再进行多因素logistic回归分析进一步明确影响14周和52周实现黏膜愈合的危险因素。结果共纳入151例中重度UC患者,在进行1∶1倾向性评分匹配(propensity score matching,PSM)后,每组各纳入57例患者进行分析比较。两组患者在14周及52周无激素缓解率、临床缓解率无明显差异(P>0.05);14周内镜缓解率,VDZ组40.4%(23/57)明显高于IFX组22.8%(13/57)(P=0.044),而52周内镜缓解率则无明显差异[64.5%(20/31)vs 59.5%(22/37),P=0.669]。多因素Logistic回归分析结果显示,病变范围为左半结肠炎(E2)[vs全结肠炎(E3)](OR:0.46,95%CI:0.21~0.98,P=0.045)是影响14周实现黏膜愈合的独立危险因素;病程≥36个月(OR:0.25,95%CI:0.09~0.66,P=0.005)是影响52周实现黏膜愈合的独立危险因素。两组不良事件发生率无统计学差异(1.8%vs 7.0%,P=0.360)。结论VDZ和IFX具有相似的疗效和安全性,均可作为中重度UC患者的一线选择。

硬性透气性角膜接触镜应用于5例婴幼儿白内障术后的疗效观察

目的总结婴幼儿白内障术后验配硬性透气性角膜接触镜(rigid gas permeable contact lens,RGP)的安全性、有效性和验配方法。方法对2019年11月至2021年12月至本院就诊的5名婴幼儿白内障患者共6只眼进行回顾性分析,所有患者均在白内障摘除术后验配RGP,随访6个月。评估RGP更换周期和掉片情况,检测眼球震颤、视力等视功能指标,总结讨论镜片使用的诊治经验以及安全性和有效性。结果所有患者在配戴期间眼表情况健康;1例弃戴;掉片和换片周期为2.4~5.4个月/片;掉片频率1~3次/年;镜片移位频率3~4次/d;眼球震颤戴镜前为0~23次/min,随访后期眼球震颤基本消失;视力分别恢复至0.5(病例1戴镜,视动性眼球震颤仪)及0.2~0.67(戴镜后24周,自制近用单个视力卡)。结论RGP是一种安全且有效改善婴幼儿白内障术后视功能的方法,可进一步推广普及。提高验配技术、优化检测方法以及加强随访教育可提高RGP的临床效果,降低使用成本。

新型隐球菌感染导致肾上腺皮质功能减退症1例报告并文献复习

目的探讨肾上腺隐球菌病的临床特征、诊断和治疗方案,以提高临床医师对该疾病的认识。方法分析本院2022年6月收治的1例新型隐球菌感染导致肾上腺皮质功能减退患者的临床表现、检验指标、影像学资料、术后病理结果,并结合相关文献复习。结果本例患者出现头晕、乏力症状,全身多处色素沉着,2022年6月24日上腹部平扫CT提示双侧肾上腺多发结节状软组织影,2022年7月1日上腹部增强CT提示双侧肾上腺结节呈轻度不均匀强化,考虑肾上腺肿瘤可能性大,遂于2022年7月13日行后腹腔镜下右侧肾上腺部分切除术,术后病理提示隐球菌病。术后予伊曲康唑抗真菌治疗2周后自行停用,术后3个月复查CT提示双侧肾上腺多发占位,再次服用伊曲康唑治疗。结论肾上腺隐球菌病患者通常出现头晕、乏力、全身多处色素沉着等肾上腺皮质功能减退的症状,腹部增强CT通常表现为肾上腺结节伴不均匀强化。确诊需要依靠病理学检查,治疗上可考虑行肾上腺切除术,术后给予抗真菌治疗。

肺腺癌A549细胞中TNIK通过Rho/ROCK/LIMK1调控微丝骨架形态

目的探讨肺腺癌A549细胞中TNIK调节微丝骨架形态的分子机制及其联合靶向有丝分裂化疗药物处理对癌细胞增殖与凋亡的影响。方法利用RNA-seq筛选稳定敲减TNIK表达后A549细胞差异表达基因,并分析微丝骨架组装相关基因的表达情况;通过RT-PCR、免疫印迹和双重免疫荧光染色分析TNIK调控微丝-微管骨架系统组装的分子机制,并联用靶向有丝分裂化疗药物紫杉醇处理癌细胞后,检测癌细胞的生长及凋亡情况。结果RNA-seq结果显示,敲减TNIK表达后的差异表达基因与有丝分裂进程密切相关;进一步分析发现TNIK表达可在转录水平显著抑制Rho通路相关基因RhoA/B、ROCK1/2和LIMK1表达(P<0.01),但对Rac与CDC42通路相关基因表达无显著影响。免疫荧光检测发现,敲减TNIK表达导致微丝骨架系统形态紊乱及有丝分裂异常。与对照细胞相比,联合紫杉醇处理的TNIK敲减组细胞增殖下调(P<0.01),而凋亡率显著增加(P<0.01)。结论肺腺癌A549细胞中TNIK通过Rho/ROCK/LIMK1调控细胞微丝-微管骨架系统形态,敲减TNIK可增强化疗药物对癌细胞增殖的抑制作用。

温度敏感TRP通道与重大慢病的防控

美国科学家David Julius和Ardem Patapoutian因辣椒素受体TRPV1和薄荷醇感受器TRPM8的突破性发现,揭示了温度感知的奥秘,由此获得了2021年诺贝尔生理学或医学奖。温度敏感性热通道TRPV1和冷通道TRPM8不仅在神经系统有丰富的表达,也存在于心血管、脂肪、肝脏和肌肉等组织器官,但其生物学意义并不清楚。近30年来,研究发现TRPV1和TRPM8除感知环境温度的变化外,还有丰富的生物学效应,如痛觉,炎症反应等,有关瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)通道在机体稳态调控中的作用及其与疾病关联的研究在持续增长与不断深入。我们团队自2004年较早地将TRP通道引入心血管及代谢领域,并揭示其在心血管和代谢疾病中的作用与机制。预期今年的诺奖颁发将进一步推动温度敏感通道蛋白的研究在心血管及代谢领域的发展。

聚核糖性死亡在低氧复合丙泊酚致PC12细胞损伤中的作用

目的探讨聚核糖性死亡在低氧环境下丙泊酚致PC12细胞损伤中的作用。方法采用经神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导分化后的PC12细胞模型,用随机数字表法将细胞分为对照(NC)组(正常培养)、脂肪乳空气对照(CA)组、脂肪乳低氧对照(CH)组、丙泊酚空气(PA)组、丙泊酚低氧(PH)组、3-AB(PARP-1抑制剂)组。采用乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测上清液中LDH的水平;流式细胞技术检测细胞凋亡;RT-qPCR法检测多聚ADP核糖聚合酶1(poly ADP-ribose polymerase 1,PARP-1)、细胞凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)蛋白的mRNA表达水平;Western blot检测PARP-1、多聚ADP核糖(polymerized ADP-ribose,PAR)及AIF蛋白表达水平;细胞免疫荧光技术检测AIF核质分布。结果与NC、CA组比较,PA、PH组LDH水平及细胞凋亡增多(P<0.01),PARP-1和AIF的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05),胞质PAR聚合物形成增多(P<0.01),AIF核迁移显著增加(P<0.01);与CH、PA组比较,PH组LDH水平及细胞凋亡增多(P<0.01),PARP-1 mRNA和蛋白表达均升高(P<0.01),胞质PAR聚合物形成增多(P<0.01),AIF核迁移增加(P<0.01);使用PARP-1抑制剂3-AB预处理可降低低氧复合丙泊酚引起的LDH水平及细胞凋亡增加(P<0.01),同时抑制PARP-1、AIF和PAR蛋白表达上调(P<0.01)。结论低氧环境下丙泊酚可导致PC12细胞发生聚核糖性死亡,抑制聚核糖性死亡可缓解低氧复合丙泊酚对PC12细胞的损伤。

Notch1在新生期小鼠肺炎链球菌感染诱导Th1/Th2失衡

目的研究Notch1信号通路在新生期小鼠肺炎链球菌感染诱导Th1/Th2失衡中的作用。方法12只1周龄Balb/c新生小鼠分为3组(n=4):新生期肺炎链球菌肺炎(Streptococcus pneumoniae pneumonia,S.pp)组、新生期肺炎链球菌肺炎Notch1抑制组[S.pp+DAPT(γ分泌酶抑制剂)]和对照组。S.pp组、S.pp+DAPT组小鼠鼻腔滴注10μL含有1×10^(7)cfu肺炎链球菌的悬液,对照组同期滴注等量PBS。小鼠感染肺炎链球菌后第7天,S.pp+DAPT组鼻腔滴注0.3 mg/kg的Notch1抑制剂DAPT,S.pp组和对照组鼻腔滴注等量PBS。小鼠发育至6周(成年),检测气道反应性,收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)行细胞分类计数,肺组织HE染色病理切片观察组织病理变化;Western blot检测肺组织Notch1蛋白水平;RT-PCR检测肺组织T-bet、GATA3 mRNA水平;流式细胞术检测肺组织Th1、Th2细胞水平并分析Th1/Th2比率。结果S.pp+DAPT组Notch1蛋白表达显著低于S.pp组(0.23±0.09 vs 1.94±0.78,P<0.01)。S.pp+DAPT组BALF细胞总数、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞计数均明显低于S.pp组(P<0.01);肺组织中细支气管周围炎症(0.55±0.17 vs 1.52±0.27,P<0.01)、血管周围炎症(0.05±0.10 vs 0.88±0.25,P<0.01)、肺间质炎症评分(0.18±0.35 vs 1.57±0.25,P<0.01)、肺部GATA3 mRNA表达(19.11±9.79 vs 177.56±65.95,P<0.01)、Th2细胞水平[(0.16±0.02)%vs(0.28±0.04)%,P<0.01]也显著低于S.pp组;而T-bet mRNA表达、Th1细胞水平与S.pp组比较差异无统计学意义(P>0.05),Th1/Th2比值较S.pp组明显增加(14.67±2.60 vs 7.89±0.82,P<0.01)。S.pp+DAPT组小鼠吸入3.125~50 mg/mL浓度乙酰甲胆碱激发后,气道反应性较S.pp组显著降低(P<0.01)。结论新生期肺炎链球菌肺炎可能通过激活Notch1信号诱导Th1/Th2失衡,促进气道高反应性及气道炎症形成。

蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中ROS和PDGFR活化的研究

目的 观察蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)后抑制血小板源性生长因子受体(platelet-derived growth factor receptor, PDGFR)活化及活性氧(reactive oxygen species, ROS)对早期脑损伤(Early brain injury, EBI)的作用,探讨它们影响SAH后早期脑损伤的可能机制。方法 将成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、SAH组、PDGF受体抑制组和ROS抑制组,每组12只。通过血管内穿刺法建立大鼠SAH模型,1 h后,治疗组动物通过腹腔注射相应的药物。在术后24、48 h,统计动物死亡率、体质量变化、神经行为学评分评估大脑功能障碍,测定脑含水量评估血脑屏障通透性。采用Western blot检测PDGFR及其磷酸化产物变化情况以及SAH后磷酸化JNK、MMP-9的表达。分别检测脂质和蛋白的氧化产物MDA含量和ROS水平。结果 抑制PDGFR的激活、清除ROS都能使SAH后脑含水量降低(P<0.05),减少MMP-9表达(P<0.05),改善神经功能评分(P<0.05),减少ROS及MDA产生(P<0.05),减少JNK和c-Jun的磷酸化JNK和c-Jun的磷酸化。抑制ROS的生成能在一定程度上减少PDGFR的激活,抑制PDGFR的激活也能在一定程度上减少ROS的产生(P<0.05)。结论 大鼠蛛网膜下腔出血后,ROS参与了PDGFR的激活,PDGFR激活能进一步加重自由基损伤。JNK-MMP-9途径是早期脑损伤中引起血脑屏障破坏的重要途径。