DCLK1在胃癌干细胞中的作用及机制研究

目的:研究双皮质素样激酶1(doublecortin-like kinase 1,DCLK1)对胃癌干细胞生物学特性的作用,初步探讨其可能的作用机制。方法:无血清培养液悬浮培养胃癌干细胞,用DCLK1抑制剂DCLK1-IN-1靶向抑制胃癌干细胞中DCLK1活性。用Western blot法检测胃癌干细胞中DCLK1、干性相关蛋白(SOX2和OCT4)、细胞增殖相关蛋白(cyclin D1和c-MYC)、耐药相关蛋白(ABCG2和TOP2A)、上皮-间充质转化相关蛋白(E-cadherin、vimen‐tin和Snail)和PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平。用CCK-8法测定DCLK1对胃癌干细胞活力及耐药的影响;用甲基纤维素成球法测定DCLK1对胃癌干细胞自我更新的影响。用细胞划痕实验和Transwell实验测定DCLK1对胃癌干细胞迁移和侵袭功能的影响。结果:胃癌干细胞中DCLK1及干性相关蛋白SOX2和OCT4表达明显高于亲本细胞(P<0.01)。DCLK1抑制组胃癌干细胞的增殖、耐药、迁移和侵袭能力明显低于Sphere细胞组(P<0.01)。DCLK1抑制组细胞增殖相关蛋白c-MYC和cyclin D1表达下调,耐药相关蛋白TOP2A和ABCG2表达下调,上皮标志物E-cadherin表达上调,间充质标志物vimentin和Snail表达下调,PI3K/AKT/mTOR相关蛋白表达及其磷酸化水平降低(P<0.01)。结论:DCLK1在胃癌干细胞中高表达,它可能通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路促进胃癌干细胞增殖、耐药、侵袭和迁移。DCLK1可作为靶向胃癌干细胞的潜在靶点。

大鼠心肌成纤维细胞通过增加基质金属蛋白酶2活性抑制心肌细胞缝隙连接功能

目的:探讨缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)后大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)条件培养液对心肌细胞中缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达和缝隙连接功能的影响及其分子机制。方法:(1)将H9c2细胞随机分为5组:对照(control)组、常氧(normal)组、基质金属蛋白酶2抑制剂ARP-100(ARP)组、H/R组和H/R+ARP组。荧光划痕技术评价缝隙连接功能,Western blot实验检测Cx43的表达及磷酸化水平,明胶酶谱法测定条件培养液中基质金属蛋白酶的活性。(2)将SD大鼠随机分为control组、ARP组、缺血再灌注(I/R)组和I/R+ARP组,每组8只。微电极阵列技术采集心律失常发生类型和持续时间,免疫组织化学实验检测心肌组织中Cx43蛋白的表达及分布,Western blot实验检测Cx43的表达及磷酸化水平。结果:与control组相比,H/R组Cx43蛋白表达显著下降(P<0.01),磷酸化水平下调(P<0.01),荧光扩散范围变窄(P<0.01),MMP2活性增加(P<0.01);ARP-100可降低大鼠I/R模型中心律失常评分(P<0.01)。结论:H/R处理的大鼠CFs条件培养液可影响大鼠心肌细胞中Cx43的表达、磷酸化水平及缝隙连接功能,其机制可能与H/R诱导的条件培养液中MMP2活性增加有关,抑制MMP2活性可减少大鼠离体全心I/R模型中心律失常评分。

双氢青蒿素通过激活氯通道促进鼻咽癌CNE-2Z细胞放疗敏感性

目的:探讨ClC-3氯通道在双氢青蒿素(DHA)促进鼻咽癌CNE-2Z细胞放射增敏中的作用。方法:MTT法检测DHA对CNE-2Z细胞和正常鼻咽上皮NP69-SV40T细胞活力的抑制作用;集落形成实验检测DHA对CNE-2Z细胞的放射增敏作用;Western blot检测ClC-3蛋白的表达;siRNA技术下调ClC-3蛋白的表达;全细胞膜片钳技术记录细胞氯电流。结果:(1)相较于NP69-SV40T细胞,DHA可选择性抑制CNE-2Z细胞活力,IC_(10)值分别为(13.020±4.831)μmol/L和(5.244±1.050)μmol/L(P<0.01);(2)集落形成实验结果显示,DHA对CNE-2Z细胞具有放疗增敏作用,放射增敏比为1.9;(3)DHA能激活CNE-2Z细胞的氯通道,产生外向氯电流;但对NP69-SV40T细胞的氯通道则无影响;(4)DHA促进CNE-2Z细胞的ClC-3氯通道蛋白的表达(P<0.01);(5)氯通道阻断剂NPPB可抑制DHA对CNE-2Z细胞的放射增敏作用,抑制比达1.84;同时也抑制DHA激活的氯电流;(6)下调CNE-2Z的ClC-3蛋白可抑制DHA对鼻咽癌CNE-2Z细胞的放射增敏作用,抑制比达4.19;DHA对CNE-2Z细胞的氯电流的激活作用则不再产生。结论:DHA对鼻咽癌CNE-2Z细胞产生放疗增敏作用,很可能与ClC-3氯通道被激活有关。

基于铜代谢的肝豆状核变性相关分子机制的研究进展

肝豆状核变性[又称威尔逊病(Wilson disease,WD)]是一种常染色体隐性遗传性铜代谢障碍疾病,其临床表现主要包括肝脏损伤、神经功能障碍和精神疾病。WD的机制尚不完全清楚,目前普遍认为铜蓄积是其主要原因,但近年来铜死亡的发现以及锌、铁、铅对铜代谢的影响也引起了关注,并已有相关研究。因此本文在分子层面上对WD的肝损伤和神经精神性疾病的过程、影响因素、发病症状等作出整理,为WD患者提供可选择性的新治疗手段,为临床诊断提供可参考的靶点和方法。

茯苓多糖通过SQLE/NLRP3/GSDMD信号通路调控肝癌细胞焦亡

目的:应用生物信息学分析技术初步探索肝细胞癌(HCC)脂代谢异常差异表达基因,并结合实验验证,探讨茯苓多糖通过角鲨烯环氧酶(SQLE)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/消皮素D(GSDMD)信号通路影响细胞焦亡的分子机制。方法:(1)利用GEO、GSEA、DAVID、STRING和GEPIA数据库筛选HCC脂代谢异常差异表达基因。(2)收集HCC患者肿瘤组织(n=9)验证SQLE基因的差异表达。(3)培养人HCC细胞系HepG2,采用CCK-8法筛选茯苓多糖浓度。(4)将HepG2细胞分为对照组和茯苓多糖(800 mg/L)组,划痕实验观察细胞迁移能力,RT-qPCR检测细胞中SQLE的mRNA表达水平。(5)进一步采用构建过表达SQLE(OE-SQLE)的HepG2细胞,再用茯苓多糖处理,分为5组:对照组、过表达阴性对照(OE-NC)组、OE-SQLE组、OE-NC+茯苓多糖组和OESQLE+茯苓多糖组。RT-qPCR和Western blot检测SQLE和焦亡相关因子的mRNA及蛋白表达水平;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;ELISA法检测白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18释放水平;流式细胞术检测细胞坏死水平。结果:生物信息学分析筛选出差异表达基因SQLE。HCC患者肿瘤标本验证SQLE的mRNA表达水平显著升高(P<0.01)。800 mg/L茯苓多糖干预48 h对HepG2细胞活力具有显著抑制作用,且可显著降低SQLE的mRNA表达水平(P<0.01)。SQLE过表达后,焦亡相关因子的mRNA和蛋白表达水平、细胞坏死水平,以及LDH、IL-1β和IL-18释放水平均显著降低(P<0.05);茯苓多糖干预后,上述指标均显著升高(P<0.05)。结论:SQLE在HCC中异常高表达;茯苓多糖可通过SQLE激活NLRP3/GSDMD焦亡通路,从而影响HCC细胞生长。

强记汤通过激活AMPKα/SIRT1/PGC-1α信号通路减轻D-半乳糖诱导的认知损伤和线粒体功能障碍

目的:探讨强记汤对D-半乳糖诱导的线粒体功能障碍的作用及其机制。方法:80只C57BL/6小鼠被随机分配至空白组、模型组、二甲双胍组和强记汤组。对空白组以外的其他3组小鼠背颈部皮下注射D-半乳糖(100 mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续8周,以建立衰老相关的认知损伤模型。强记汤组给予强记汤水煎液(24.96 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,二甲双胍组给予二甲双胍(0.2 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水(20 mL·kg^(-1)·d^(-1)),连续灌胃4周,每天1次。Morris水迷宫实验和新物体识别实验评估小鼠的学习记忆力;Fluoro-Jade B(FJB)染色观察海马区受损的神经元;透射电镜观察海马区线粒体的超微结构;试剂盒检测活性氧(ROS)水平;JC-1染色检测海马神经细胞线粒体膜电位水平;试剂盒检测海马组织线粒体ATP及线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ含量;Western blot检测海马组织中AMP活化蛋白激酶α(AMPKα)、第172位苏氨酸磷酸化的AMPKα(p-AMPKα-Thr172)、沉默信息调节因子1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF1)、NRF2和线粒体转录因子A(TFAM)水平。结果:Morris水迷宫实验和新物体识别实验结果显示,与模型组比较,二甲双胍组和强记汤组小鼠逃避潜伏期显著缩短(P<0.05或P<0.01),穿越平台次数、目标象限驻留时间及新物体识别指数显著增加(P<0.05或P<0.01)。FJB染色结果显示,与模型组比较,二甲双胍组和强记汤组小鼠海马CA1和CA3区FJB标记的神经元数量显著减少(P<0.05或P<0.01)。透射电镜显示,与模型组比较,二甲双胍组和强记汤组小鼠海马神经细胞中线粒体损伤减轻,且线粒体的长度和面积显著增加(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,二甲双胍组和强记汤组小鼠海马神经细胞中ROS水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。JC-1染色结果显示,与模型组比较,二甲双胍组和强记汤组小鼠海马神经细胞线粒体膜电位显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,二甲双胍组和强记汤组小鼠海马组织线粒体ATP及线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。Western blot结果显示,与模型组比较,二甲双胍组和强记汤组小鼠海马p-AMPKα-Thr172、SIRT1、PGC-1α、NRF1、NRF2和TFAM水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:强记汤可通过激活AMPKα/SIRT1/PGC-1α信号通路减轻D-半乳糖诱导的认知障碍、神经元损伤及线粒体功能障碍。

淫羊藿苷通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞上皮-间充质转化

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)对高糖(HG)诱导的人肾小管上皮细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响及机制。方法:将人肾小管上皮HK-2细胞分为正常对照(NC)组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高渗(OSM)组(5.5mmol/L D-葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇)、HG组(30 mmol/L D-葡萄糖)、低剂量ICA(L-ICA)组(30 mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L ICA)、高剂量ICA(H-ICA)组(30 mmol/L D-葡萄糖+40μmol/L ICA)、H-ICA+SC79[蛋白激酶B(PKB/AKT)激活剂]组(30 mmol/L D-葡萄糖+40μmol/L ICA+10μmol/L SC79)和LY294002[磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂]组(30 mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L LY294002)。CCK-8法检测细胞活力;倒置显微镜观察细胞形态;RT-qPCR检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和上皮钙黏素(E-cadherin)的mRNA表达水平;Western blot检测细胞中α-SMA、Ecadherin、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白水平;划痕实验检测细胞的迁移能力。结果:与NC组比较,HG组HK-2细胞活力下降,迁移能力增强,细胞失去原有形态,部分细胞呈长梭状,E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平显著下降,α-SMA的mRNA和蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值均显著升高(P<0.05)。相较于NC组,OSM组细胞形态无明显改变,其它相关上述指标变化均无统计学意义(P>0.05),提示高渗透压对HK-2细胞无显著影响。与HG组比较,不同剂量ICA组细胞形态由长梭状逐渐趋向正常形态,细胞活力增强,迁移能力降低,E-cad-herin的mRNA和蛋白表达水平显著升高,α-SMA的mRNA和蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值均显著降低(P<0.05);LY294002组细胞E-cadherin蛋白表达水平显著升高,α-SMA蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和pAKT/AKT比值均显著降低(P<0.05)。与H-ICA组相比,H-ICA+SC79组细胞中E-cadherin蛋白表达水平显著下降,α-SMA蛋白表达水平及p-AKT/AKT比值均显著升高(P<0.05)。结论:ICA能够抑制HG诱导的HK-2细胞EMT,可能与其抑制PI3K/AKT信号通路活化有关。

肾小球基底膜发育及相关疾病的研究进展

肾小球是位于肾皮质的球形毛细血管簇,血液经肾小球滤过形成原尿。其中,肾小球滤过屏障起重要作用,是位于循环系统和鲍曼囊之间由肾小球基底膜(glomerular basement membrane,GBM)、鲍曼囊脏层上皮细胞(即足细胞)、足细胞裂孔膜、肾小球毛细血管内皮细胞和内皮细胞表面膜共同构成的有机整体,将血液与尿液分隔开,在阻碍血浆蛋白(主要是白蛋白和免疫球蛋白)通过的同时,确保水和构成初级滤液的小溶质有效滤过。

气管滴注大气细颗粒物构建大鼠慢性阻塞性肺疾病模型

目的:采用气管滴注大气细颗粒物(PM_(2.5))建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺功能损伤大鼠模型,并对该模型进行评价。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、2.5 mg/kg PM_(2.5)组、5 mg/kg PM_(2.5)组和10 mg/kg PM_(2.5)组。按1 mL/kg气管滴注PM_(2.5)溶液,连续5次。采用小动物呼吸肺功能测量系统测定大鼠肺功能;ELISA法测定大鼠血清中炎症指标;收集大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),对BALF进行涂片和染色,对炎症细胞进行分类和计数;检测肺组织匀浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;通过HE、Masson和弹性纤维染色检测各组大鼠肺组织病理变化。结果:PM_(2.5)滴注对大鼠体重无显著影响,可引起大鼠呼吸频率和呼吸指数增加(P<0.05),降低最大吸气流速和肺动态顺应性(P<0.05)。PM_(2.5)滴注可引起大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-β)和IL-6含量显著增高(P<0.05),大鼠BALF中白细胞和单核细胞比值显著升高(P<0.05,P<0.01),嗜酸性粒细胞比值降低(P<0.01)。PM_(2.5)滴注可显著降低大鼠肺组织匀浆中GSH-Px活性(P<0.05)。PM_(2.5)滴注可引起大鼠气道管腔变形、炎症细胞浸润、胶原纤维和弹性纤维表达增加,在巨噬细胞内可观察到PM_(2.5)颗粒。结论:PM_(2.5)气管滴注可成功构建大鼠COPD肺功能损伤模型。

龙胆苦苷对大鼠腹膜纤维化的抑制作用及其机制研究

目的:观察龙胆苦苷对腹膜透析大鼠腹膜纤维化组织氧化应激反应和转化生长因子β(TGF-β)/Smads信号通路的影响,探讨龙胆苦苷防治腹膜纤维化的作用机制。方法:通过4.25%高糖腹膜透析液(100 mL/kg;每天1次)联合脂多糖(0.6 mg/kg;第1、3、5、7天注射)构建大鼠腹膜纤维化模型。将30只雄性SD大鼠随机分为5组:生理盐水组、模型组及低、中、高剂量(30、60和120 mg/kg)龙胆苦苷组,每组6只。透析28 d后行1 h腹膜功能试验:测定超滤量、初始腹透液与透出液葡萄糖比值、透析液与血浆尿素氮比值及葡萄糖转运量。取大鼠壁层腹膜进行腹膜病理形态学观察,计算腹膜厚度。取腹主动脉血检测血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。免疫组化检测各组大鼠腹膜组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)和I型胶原(COL I)的表达情况。Western blot检测各组大鼠腹膜组织中TGF-β1、Smad3和Smad7蛋白的表达。结果:透析28 d后,经腹腔注射4.25%高糖腹膜透析液及脂多糖建立的腹膜纤维化大鼠模型腹膜功能显著降低(P<0.05),腹膜厚度显著增加(P<0.01),并可见炎症细胞浸润、纤维细胞及血管增生明显增多;大鼠血清中MDA含量显著增多,SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.01);免疫组化显示,α-SMA和COL I蛋白表达显著增加,E-cad⁃herin蛋白表达显著降低(P<0.01);Western blot显示,TGF-β1和Smad3蛋白表达显著增加,Smad7蛋白表达显著降低(P<0.01)。龙胆苦苷干预能够显著降低氧化应激水平,抑制TGF-β1和Smad3蛋白的表达,提高Smad7蛋白表达水平,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:龙胆苦苷可减轻高糖腹透液联合脂多糖诱导的腹膜纤维化模型大鼠的腹膜纤维化病变程度,其机制与抑制氧化应激反应及腹膜间皮-间充质转化进程有关。

三种方法建立外伤性增生性玻璃体视网膜病变的兔模型研究

目的:比较三种方法建立外伤性增生性玻璃体视网膜病变(TPVR)兔模型的效果。方法:青紫蓝兔24只,共48只眼,在均造成眼外伤的基础上随机分成4组,每组各12只眼:实验组3组,分别为富血小板血浆(PRP)组[玻璃体腔内注射0.3 mLPRP]、转化生长因子β_(2)(TGF-β_(2))组[玻璃体腔内注射0.3 mLTGF-β_(2)(50μg/L)]和视网膜色素上皮(RPE)组[玻璃体腔内注射0.3 mLRPE细胞(1.5×10^(9)/L)],以及对照组(玻璃体腔内注射0.3 mL生理盐水)。术后每周通过眼底照相和B超观察玻璃体及视网膜的增生情况;术后第4周采用Westernblot法检测玻璃体内视网膜增生过程中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,采用冰冻切片法在显微镜下观察各组视网膜组织结构。结果:术后第4周,对照组及3组实验组TPVR的平均分级分别是0、3.67、2.33和2.50,3组实验组病变级别显著高于对照组(P<0.05),PRP组病变级别高于TGF-β_(2)组和RPE组(P<0.05),TGF-β_(2)组与RPE组病变级别差异无统计学显著性(P>0.05);术后第4周,各实验组玻璃体内视网膜α-SMA表达均高于对照组(P<0.05);术后第4周,各实验组视网膜切片显示视网膜增生程度均高于对照组。结论:在造成眼球穿通伤的基础上,玻璃体腔内注射RPE细胞、PRP和TGF-β_(2)均能造成兔TPVR,其中玻璃体内注射PRP的建模效果最明显。

七氟烷对衰老模型大鼠认知功能的影响及机制初探

目的:探讨七氟烷(Sev)对衰老模型大鼠认知能力及大脑前额叶皮质炎症因子表达的影响。方法:48只4月龄雄性SD大鼠,于大鼠头颈部皮下注射D-半乳糖(125 mg·kg-1·d-1)持续42 d建立衰老大鼠模型,按随机数字表法分为4组:空白对照(Con)组、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体抑制剂MCC950组、Sev组和MCC950治疗(Sev+MCC950)组,每组12只。水迷宫实验评估每组大鼠学习和工作记忆能力;HE染色法观察每组大鼠肺组织和大脑前额叶皮质区神经元形态;Western blot检测前额叶皮质离子钙结合接头分子1(Iba-1)、NLRP3、caspase-1、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18蛋白表达情况;ELISA检测检测大鼠大脑前额叶皮质及血清中炎症因子IL-1β和IL-18水平。结果:与Con组相比,Sev组大鼠逃避潜伏期显著增加,逃逸平台次数显著降低(P<0.05),大脑前额叶皮质区神经元显著损伤,前额叶皮质Iba-1、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达显著增加(P<0.05),中枢及外周IL-1β和IL-18炎症因子水平显著升高(P<0.05)。与Sev组相比,Sev+MCC950组大鼠学习和工作记忆能力显著提高(P<0.05),前额叶皮质Iba-1、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达水平显著下降(P<0.05),中枢及外周炎症因子水平显著降低(P<0.05)。结论:Sev致衰老模型大鼠认知功能障碍及前额叶皮质内神经炎症,其机制可能与Sev活化小胶质细胞NLRP3炎症小体,进而诱导IL-1β和IL-18炎症因子水平升高有关。

口服α-硫辛酸对MPTP-PD模型老年小鼠的保护作用

目的:探讨α-硫辛酸对帕金森病(PD)模型老年小鼠的保护作用。方法:本实验采用老年小鼠1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)-PD模型,通过长期口服给予α-硫辛酸进行干预,并通过Westernblot及免疫荧光检测不同实验组小鼠大脑黑质多巴胺神经元的损伤情况以及氧化应激途径的改变。结果:长期口服α-硫辛酸并没有显著减少正常衰老状态下的酪氨酸羟化酶神经元丢失,而在MPTP-PD模型组中长期口服α-硫辛酸能发挥抗氧化应激作用,显著保护酪氨酸羟化酶神经元免受MPTP毒物损害造成的丢失,并改善运动功能。结论:长期口服α-硫辛酸对老年PD的发生发展可能有一定的延缓、抑制作用。

MLK3基因敲除抑制骨骼肌损伤后再生

目的:探讨混合谱系激酶3(MLK3)在骨骼肌损伤后再生中的作用及其机制。方法:小鼠胫骨前肌注射心脏毒素制备骨骼肌损伤模型;RT-qPCR及Western blot检测损伤后0、1、3、5 d胫骨前肌中MLK3的表达变化;损伤7 d的骨骼肌进行麦胚凝集素染色和Masson染色,观察损伤后骨骼肌再生和纤维化程度;损伤3 d的骨骼肌进行免疫荧光染色观察肌卫星细胞标志物配对盒蛋白7(PAX7)的表达;RT-qPCR检测肌卫星细胞分化相关基因Myod和Myog表达;Western blot检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶和p38的磷酸化水平。结果:损伤后3 d,骨骼肌中MLK3表达显著升高。损伤后7 d,MLK3基因敲除小鼠的新生肌纤维面积显著减小,间质纤维化面积增加。损伤后3 d,MLK3基因敲除小鼠骨骼肌中PAX7阳性肌卫星细胞比例、Myod和Myog表达水平及ERK1/2磷酸化水平均显著低于野生型小鼠。结论:MLK3通过调控ERK1/2信号通路在骨骼肌再生过程中发挥重要作用。

组织驻留记忆T细胞在抗结核分枝杆菌感染中的研究进展

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的一种严重威胁人畜健康的传染性疾病,目前仍然是全球十大致死率疾病之一[1]。据WHO报告指出:由于这两年受到COVID-19大流行的影响,TB患者的数量大幅度下降,但由于多重耐药、共患病等因素的上升以及对TB诊断、预防和服务支出的下降,导致TB的预防和治疗现状变得更加棘手[2-3]。据不完全统计,全球目前有近四分之一的MTB潜伏感染者,这部分感染者免疫力下降后,就可能发展为活动性TB患者。由此可见,结核病发生发展与机体免疫应答功能密切相关。

抗TNF-α药物治疗抑郁症的研究进展

抑郁症是一种多因素引起的精神障碍性疾病,主要表现为思维迟缓、食欲下降、体重减少、快感缺乏、精神不振和认知障碍等,对消化系统、免疫系统及神经系统等造成不利影响,严重者甚至出现自杀倾向,具有高患病率、高自杀率和高复发率等特点。

益肾通络方对大鼠勃起功能障碍及NO-cGMP通路的影响

目的:探究益肾通络方对大鼠勃起功能障碍(ED)及一氧化氮-环磷酸鸟苷(NO-cGMP)通路的影响。方法:构建ED模型大鼠,随机分为模型组,益肾通络方低、中、高剂量组,以及西地那非组,每组12只;另取12只SD大鼠设为对照组。采用阿扑吗啡实验检测大鼠勃起功能,测定最大阴茎海绵体内压(Max ICP)/平均动脉压(MAP),ELISA检测血清睾酮水平、阴茎组织一氧化氮合酶(NOS)活性及NO和cGMP水平,Western blot法检测阴茎组织NOS和鸟苷酸环化酶(GC)的表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠勃起次数显著减少,Max ICP/MAP、血清睾酮水平、阴茎组织NOS活性、NO和cGMP水平及NOS和GC蛋白表达均显著降低(P<0.05),勃起潜伏期显著延长(P<0.05);与模型组比较,益肾通络方低、中、高剂量组和西地那非组大鼠勃起次数显著增多,Max ICP/MAP、血清睾酮水平、阴茎组织NOS活性、NO和cGMP水平及NOS和GC蛋白表达均显著升高(P<0.05),勃起潜伏期显著缩短(P<0.05),且益肾通络方各组之间呈剂量依赖性(P<0.05);益肾通络方高剂量组与西地那非组相比,各指标的差异无统计学显著性(P>0.05)。结论:益肾通络方可提高血清睾酮水平并减轻大鼠ED,这可能是通过上调NO-cGMP通路实现的。

沉默信息调节因子在高血压发病机制中的研究进展

高血压是多种心血管疾病的主要危险因素。尽管许多研究都强调了高血压的多因素性,但是高血压的发病机制仍然有待探索。大量证据表明,表观遗传学在高血压发病中起着重要的作用[1],其中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotimide adenosine dinucleo-tide,NAD^(+))依赖性酶家族介导的血管动态平衡和心血管疾病的表观遗传过程引起了研究者的广泛关注。分子水平上,NADPH氧化酶信号的激活、内源性抗氧化剂的抑制、DNA的甲基化、组蛋白的修饰和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)异构体蛋白表达的改变等共同参与了高血压的发病[2]。沉默信息调节因子(sirtuins/silent information regulators,SIRTs)作为NAD+依赖的脱乙酰酶,参与了高血压的形成与发展。本文将综述SIRTs家族不同成员在高血压发病中的作用。

阿维来司他对主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的作用及机制研究

目的:探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)抑制剂阿维来司他(alvelestat;又称AZD9668)对猪主动脉瓣膜间质细胞(VICs)成骨分化的作用及其潜在机制。方法:收集3例患钙化性主动脉瓣膜疾病(CAVD)和1例非CAVD患者的瓣膜组织,采用免疫组织化学染色和Western blot检测NE、骨桥蛋白(OPN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Runt相关转录因子2(RUNX2)的表达。分离猪主动脉VICs,采用细胞免疫荧光染色进行表型鉴定。MTT法检测alvelestat对VICs活力的影响。将对数生长期的VICs分为正常对照组(blank组)、成骨培养液(OM)组及OM+5、10、20和40 nmol/L alvelestat组。采用Western blot、碱性磷酸酶染色和茜素红染色等方法检测早期纤维化指标α-SMA和I型胶原(collagen I),晚期成骨分化指标OPN和RUNX2,以及NE的水平;Western blot检测alvelestat对细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路的作用情况,并设置blank组、OM组、OM+alvelestat组及OM+PD98059(ERK1/2抑制剂)组,检测NE、OPN和RUNX2的表达。结果:钙化的瓣膜组织中NE、OPN、RUNX2、α-SMA及pERK的表达上调(P<0.05)。分离出的猪主动脉VICs中α-SMA及vimentin阳性,CD31阴性;40 nmol/L以上的alvelestat影响VICs的活力(P<0.05);40 nmol/L alvelestat可显著抑制纤维化指标α-SMA和collagen I,成骨分化指标RUNX2和OPN,以及NE的表达(P<0.05);碱性磷酸酶染色和茜素红染色结果显示,alvelestat可以抑制成骨诱导的VICs早期和晚期钙盐沉积;alvelestat降低VICs中ERK1/2的磷酸化水平(P<0.01),且alvelestat和ERK1/2抑制剂PD98059均能降低钙盐诱导的NE、RUNX2及OPN蛋白表达(P<0.05)。结论:NE抑制剂alvelestat通过抑制成骨诱导的NE和ERK1/2信号通路而抑制VICs的成骨分化。

五味子哮喘汤对哮喘小鼠SIRT1/Akt信号通路及肺功能的影响

目的:探究五味子哮喘汤(Schisandrae-asthma decoction)对哮喘小鼠沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)信号通路及肺功能的影响。方法:BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照地塞米松(10 mg/kg)组及低剂量(8.5 g/kg)、中剂量(17 g/kg)和高剂量(34 g/kg)五味子哮喘汤组,每组20只。除对照组外其余5组采用卵清蛋白+氢氧化铝刺激制备哮喘模型,对照组予以等量生理盐水注射及雾化吸入,于第16天进行药物干预,每天1次,连续灌胃7 d。末次给药后24 h,肺功能仪检测各组小鼠肺功能指标0.1 s用力呼气容积(forced expiratory volume in 0.1 s,FEV0.1)及最高呼气流速(peak expiratory flow rate,PEFR),HE染色检测小鼠肺组织病理学变化,RT-qPCR和Western blot检测肺组织SIRT1、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)及Akt的mRNA和蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组小鼠FEV0.1和PEFR水平及肺组织SIRT1 mRNA和蛋白表达均显著降低,PI3K和Akt mRNA及p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白水平均显著升高(P<0.05),肺组织周围可见大量炎症细胞浸润;与模型组比较,地塞米松组和各剂量五味子哮喘汤组小鼠FEV0.1和PEFR水平及肺组织SIRT1 mRNA和蛋白表达均显著增加,PI3K和Akt mRNA及p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白水平均显著降低(P<0.05),肺组织病变呈不同程度减轻。结论:五味子哮喘汤可改善哮喘小鼠肺功能,减轻哮喘症状,可能与调控SIRT1/Akt信号通路有关。