三株新城疫广西分离株全基因组序列的测定与分析

根据GenBank上所公布的新城疫病毒（NDV）的全基因组序列，设计了8对引物，运用RT-PCR方法获取了3株广西地方强毒株GX7／02、GX9／03和GX11／03的全基因组序列，并对其进行了比较分析。此3株病毒的全基因组序列均由15192个碱基组成，与GenBank公布的ZJ1、U．S／Largo／71、Italy／2736／00等7个毒株的全基因组序列长度相同，比LaSota、Clone-30和B1的全基因组序列多出6个核苷酸，此6个核苷酸位于np基因的非编码区内，相对与NDV毒株LaSota、Clone-30和B1序列的1647～1648nt位。通过序列的比较分析，发现GX7／02、GX9／03和GX11／03与ZJ1毒株的同源性较高，而与LaSota、Clone-30和B1等毒株的同源性较低。

荧光定量PCR技术检测样品中SeMNPV有效含量

采用NCBI提供的BLAST软件在线检索SeMNPV特异性基因ORF22、ORF40,并将其构建到pMD18-T载体上。以纯化的pMD18-T-ORF22、pMD18-T-ORF40质粒为标准样品,已计数野生型SeMNPV的基因组作对照,用荧光定量PCR检测样品中SeMNPV多角体含量。荧光定量PCR检测得到标准曲线方程为con=10(-0.282CT+9.965)(相关系数:R2=0.9997)和con=10(-0.296CT+9.945)(相关系数:R2=0.9995)。测得一个SeMNPV多角体包含102核酸分子,检测到SeMNPV复合剂包含633PIBs/mg、691PIBs/mgSeMNPV多角体,两者结果一致。与复合剂中SeMNPV实际含量相符。

猪细小病毒vp2基因的表达和类病毒颗粒的构建

利用PCR方法从病毒基因组中获得了vp2完整的编码区并经测序后克隆到原核表达载体pET-32(a)上。在大肠杆菌中诱导表达了VP2与Trx-His-STag的融合蛋白,通过免疫家兔获得了高特异性的兔抗血清。另外,将vp2克隆到pFastBacDUAL载体上,利用昆虫表达系统,即AcMNPV的Bac-to-Bac系统对vp2进行了表达,经SDS-PAGE和Westernblot分析,表达产物为64kD,并且该蛋白能在昆虫细胞中形成类病毒颗粒。

蓝舌病毒HbC_3株对小鼠乳腺癌MA-782细胞的感染特性

体外研究蓝舌病毒湖北株3(BTV-HbC3)对鼠乳腺癌细胞MA782的感染性并探讨BTV-HbC3靶向性溶癌的机制。观察MA782细胞感染BTV-HbC3的病变效应(CPE);MTT法研究病毒致细胞病变率的特征;透射电镜观察感染病毒后细胞超微结构的变化;免疫组化研究病毒蛋白在细胞内的表达特点;凋亡染色(TUNEL法)观察病毒诱导细胞凋亡的情况;流式细胞仪测定病毒对MA782细胞周期的影响。结果证明BTV-HbC3感染MA782细胞后有明显的细胞病变效应;病毒蛋白主要表达在细胞的胞膜及胞浆内;凋亡染色发现大量的凋亡细胞;流式细胞仪可见明显的亚二倍体峰。故认为BTV-HbC3在体外能有效的感染MA782细胞,并能诱导MA782细胞凋亡。

流感病毒ns1基因的克隆及其原核表达载体的构建

为了解H5N1亚型流感病毒株的ns1基因特性及其规模制备NS1蛋白,首先将病毒在鸡胚中传代,从收获的尿囊液中提取RNA,采用RT-PCR技术扩增流感病毒全长ns基因。测序显示H5N1亚型流感病毒NS1cDNA全长678bp,编码225个氨基酸。BLAST分析表明,Qa/ST/852/01(H5N1)病毒株ns1基因与近年来从华南地区分离的禽H5N1毒株的ns1基因有很高的同源性。之后采用PCR方法扩增ns1基因的cDNA片段,将其克隆到pGEX-4T-3载体中,与谷胱甘肽巯基转移酶(GST)基因融合,构建重组质粒pGEX-4T-3/NS1cDNA,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达。SDS-PAGE和凝胶扫描分析,GST-NS1融合蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,并且以可溶形式存在,重组融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的28.5%,表达产物经亲和层析纯化后蛋白质纯度达96%以上。经免疫印记证实重组融合蛋白可以被GST特异性抗体所识别。该表达载体的构建为获得大量NS1蛋白进行功能研究及抗体制备提供了基础。

牛血清中27kDa蛋白的免疫学特性研究

为探讨牛血清中存在的HBsAg样蛋白的性质,给HBV的发病机制、治疗、预防等研究提供依据,我们采集93份牛血清,以SDS-PAGE、WesternBlot对血清中HBsAg样蛋白进行研究,发现其分子量约为27kDa;以SDS-PAGE分离牛血清中的HBsAg样蛋白,经皮下多点免疫小鼠,可产生与人HBV编码蛋白HBsAg反应的抗体。表明该27kDa蛋白可能存在与HBsAg相似的免疫学特性。

表达绿色荧光蛋白的重组CVI988病毒的构建及特性

提取马立克氏病毒Ⅰ型疫苗毒株CVI988的总DNA为模板,利用PCR技术扩增出病毒生长非必需的US2基因并克隆入T-easy载体。将CMV启动子和增强子控制的含GFP基因表达盒克隆入US2基因中,成功构建了含GFP基因的转移质粒载体pGUS2GFP。用脂质体将其与CVl988株共转染CEF细胞,用96孔板稀释法得到纯化的表达绿色荧光蛋白的重组CVI988病毒株rCVIGFP,并分别测定其在体内和体外的生长情况。表达EGFP基因的重组病毒在细胞上生长曲线与亲本毒CVI988类似,体外实验表明,1日龄腹腔接种该重组毒后,可以从鸡体内分离到表达绿色荧光的病毒。

A亚群禽白血病病毒囊膜基因gp85片段在大肠杆菌中的表达

将RAV 1囊膜基因gp85片段亚克隆到表达质粒pET 2 1d(+)中得到重组表达质粒pET 2 1d RAV 1env(BglII /SalI) ,序列分析表明该插入片段的核苷酸序列和阅读框都与RAV 1囊膜基因相应序列相同。用其转化大肠杆菌BL2 1(DE3)并经IPTG诱导 ,SDS PAGE分析表明RAV 1囊膜基因融合蛋白表达产物约 2 0kD ,与理论值相符 ;IPTG诱导起始时间比诱导持续时间对表达量的影响更大。

猪瘟病毒中国兔化弱毒疫苗株在原代牛睾丸细胞中增殖特性的研究

以猪瘟病毒中国兔化弱毒疫苗株 (CSFVC株 )为实验材料 ,研究该病毒株在原代牛睾丸细胞中增殖的基本特性与规律。找到了一株能够使用免疫荧光技术进行检测的C株猪瘟病毒 ,并对病毒滴度的测定方法进行了改进 ,发展完善了荧光斑技术 (F PFU)。使用改进的病毒滴度测定方法 ,对接毒后培养上清中病毒滴度的变化趋势进行检测。在原代牛睾丸细胞中 ,接毒后 5d ,几乎所有的细胞都可被病毒感染 ;释放到培养液中有活性的病毒粒子达到 10 5F PFU/mL以上 ,后维持在该水平。对原代细胞中细胞种类随代次增加的变化趋势进行了观察 ,并对CSFV的增殖特点及生产中出现的一收毒价不稳定、多次收获病毒等现象的机制进行探讨。并对影响猪瘟病毒增殖的因素进行了实验 ,不仅加深了对猪瘟病毒C株在原代牛睾丸细胞中增殖规律的了解 。

一种新的人类疱疹病毒:Kaposi’s肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)

１９９４年Ｙ．Ｃｈａｎｇ等人从ＡＩＤＳ患者的Ｋａｐｏｓｉ’ｓ肉瘤（ＫＳ）组织中分离到了两种独有的序列［１］，并由ＫＳ建立了基因组文库，对其中外源序列进行克隆和序列分析［２］，初步确认一种新的人类疱疹病毒———ＫＳ相关疱疹病毒。１ＫＳＨＶ的发现Ｋａｐｏ...

AC-PCR法检测连云港海域贝类HAV

为了解连云港海域贝类甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）污染状况，证实其在本地区甲肝传播中的媒介地位，我们应用抗体捕捉聚合酶链反应（ＡＣ／ＰＣＲ）检测市售贝类的ＨＡＶ，结果报告如下：材料和方法１贝类样品于１９９６年春、秋二季采集新浦区、连云区和赣榆县等地水产品市场...

杯状病毒的分类和分子生物学研究进展

杯状病毒的分类和分子生物学研究进展毛春生，金宁一，殷震（解放军农牧大学研究所，长春１３００６２）ＣｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆＣａｌｉｃｉｖｉｒｕｓＭａｏＣｈｕｎｓｈｅｎｇ；ＪｉｎＮｉｎｇｙｉ；ＹｉｎＺｈｅｎ（...

甘薯病毒研究进展

甘薯病毒研究进展孟清，张鹤龄（内蒙古大学生物系，呼和浩特０１００２１）ＲｅｓｅａｒｃｈＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＳｗｅｅｔＰｏｔａｔｏＶｉｒｕｓｅｓＭｅｎｇＱｉｎｇ；ＺｈａｎｇＨｅｌｉｎｇ（ＢｉｏｌｏｇｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＵｎ...

草鱼出血病病毒多肽的免疫原性

采用中和试验比较了草鱼出血病病毒ＧＣＨＶ８７３的１１个多肽的免疫原性，确定了主要中和抗原。纯化的单个病毒多肽免疫家兔获得抗血清，多肽ＶＰ＿１、ＶＰ＿５、ＶＰ＿６和ＶＰ＿９的抗血清具有中和效价，而ＶＰ＿２、ＶＰ＿３、ＶＰ＿４、ＶＰ＿７、ＶＰ＿８、ＶＰ＿（１０）和ＶＰ＿（１１）则不能诱生中和抗体。其中ＶＰ＿６的抗血清中和效价最高，因此，ＶＰ＿６极可能是病毒多肽中的主要中和抗原。

不同感染状态下EB病毒核抗原亚型表达的研究

本实验用免疫印迹法纯化的抗ＥＢＮＡ亚型抗体，结合显微荧光分光光度检测技术，检测在不同感染状态下，三种亚型ＥＢＮＡ抗原在细胞中的表达程度。结果表明，处于潜伏感染状态下的Ｒａｊｉ细胞ＥＢＮＡ－１表达量较大，经巴豆油和正丁酸诱导进入钝挫感染状态后ＥＢＮＡ－１表达减少，而ＥＢＮＡ－２的表达增强。Ｂ＿（９５－８）细胞也有相似的趋势。表明ＥＢ病毒的激活可能与不同ＥＢＮＡ亚型表达量的改变有关。

VIROLOGICA SINICA Instructions to Authors

VIROLOGICA SINICA is an academic, professional periodical published by Wuhan Institute of Virology, The Chinese Academy of Science and The Chinese Society for Microbiology. Munuscripts are welcome form any part of the world.

新分离呼吸道肠道病毒生物学特性和S4片段的序列测定

新分离呼吸道肠道病毒(简称呼肠病毒)经过空斑分纯后进行生物学和部分基因序列的鉴定。首先通过BYD株(由端青从北京于某患者标本中分离到的第一株呼肠病毒)对4种传代细胞的敏感性试验,选出L929和LLC-MK2敏感细胞,然后用LLC-MK2细胞进行理化性质试验,血凝试验和形态学鉴定。结果显示该病毒为耐乙醚、不耐酸、不耐热的RNA病毒;对人O型红细胞能产生凝集,滴度达1:32;电镜下可查见细胞胞浆内有球形、直径为70nm～80nm、双层衣壳的病毒颗粒。提取BYD株RNA并进行S4片段序列分析,结果显示该片段的氨基酸序列与已知呼肠病毒1～3型标准株的同源性分别为95%、90%和95%。以上这些生物学以及S4片断的序列分析结果表明:新分离BYD株病毒符合呼肠病毒科的特性。

SpltMNPV日本分离株gp41的克隆表达及gp41和ph的进化分析

从斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)日本分离株(C3)基因组中克隆了gp41基因。该基因编码区含993bp核苷酸,编码分子量为36.9kDa的多肽。将该基因克隆至原核表达载体pET28a,经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了表达。应用CLUSTAL程序分析表明,SpltMNPV日本株(C3)gp41的核苷酸序列和氨基酸序列与SpltMNPV中国G2株相似性最高,均达99.9%。用MEGA分别构建了基于gp41和ph的聚类分析图和分子进化树,发现它们具有相似的拓扑结构。将这两个基因序列结合在一起构建进化树,该树的结构与基于gp41的进化树相似。突变率分析显示gp41的突变率高于ph,这意味着在杆状病毒进化过程中,gp41和ph面临不同的选择压力。