LNC RNALinc00152对宫颈癌细胞生物学行为及Fra-1/p53基因的影响

目的探究LNCRNALinc00152对宫颈癌细胞生物学行为及Fra-1/p53基因的影响。方法RT-PCR方法检测人宫颈癌Hela细胞和人正常宫颈上皮End1/E6E7细胞中Linc00152表达;将Hela细胞分为正常组(control组)、转染组(si-00152)和转染对照组(si-NC),RT-PCR方法检测Linc00152的表达;MTT法检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞侵袭能力;Westernblot检测细胞中Fra-1和p53蛋白表达。结果Hela细胞中Linc00152的表达水平明显高于End1/E6E7细胞(P<0.05)。转染si-Linc00152后,Hela细胞Linc00152表达明显降低,增殖、迁移与侵袭能力明显降低(P<0.05),p53表达明显升高,Fra-1表达明显降低(P<0.05)。结论沉默LncRNALinc00152表达能抑制Hela细胞的增殖、迁移和侵袭。

病理性心肌肥厚中环状RNA研究的新进展

环状RNA(circRNA)为一种共价键形成闭合环状结构的内源性非编码RNA,能吸附微小RNA、调控基因表达、调控蛋白质的生成、作为生物标志物等。病理性心肌肥厚是由心肌梗死、机械刺激、激素、细胞因子、生长因子和压力超负荷等因素引起的,其发病机制复杂,受多种细胞信号调控,其中包括新兴的circRNA等非编码RNA调控。某些circRNA的上调或下调可以促进或抑制病理性心肌肥厚,其作用方式主要集中于circRNA充当miRNA的内源性海绵吸附靶基因,进而影响心肌肥厚相关的信号通路蛋白。本文旨在对circRNA的生物学研究、病理性心肌肥厚的形成机制以及circRNA在病理性心肌肥厚中的研究新进展进行综述。

《解剖科学进展》征稿简则

《解剖科学进展》是中国解剖学会主办,中国医科大学承办的国家级学术期刊,为双月刊。本刊主要是综合报道国内、外解剖科学研究的新进展和新动态,刊登解剖学、显微解剖学、神经解剖学、比较解剖学、组织学、胚胎学、细胞学、分子生物学、遗传学以及人类学等各学科领域研究的原著以及综述性论文、专论,并设有原著、综述、技术方法以及教学法研究等栏目。有关文稿要求如下.

SMC3 mRNA表达水平与免疫浸润协同对乳腺癌预后的影响

目的研究SMC3 mRNA表达水平与乳腺癌临床病理指标的相关性,探讨其表达水平与免疫细胞浸润、免疫检查点基因之间的关系及SMC3表达与免疫浸润协同对乳腺癌预后的影响。方法基于TCGA公共数据库分析SMC3与临床特征变量、免疫检查基因之间的相关性,应用TIMER2.0数据库分析SMC3 mRNA表达和突变与免疫细胞浸润之间的关系及SMC3 mRNA表达水平和免疫细胞浸润与临床预后的关系。结果SMC3 mRNA高表达与淋巴结转移多和TNM分期升高有关,SMC3 mRNA表达与B细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞和髓样树突状细胞的免疫浸润呈正相关。在Luminal A型乳腺癌中,相比于野生型,SMC3突变型CD8+T细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞具有较高的浸润水平。免疫检查点基因表达与SMC3 mRNA表达呈正相关。SMC3 mRNA表达与免疫浸润水平协同影响乳腺癌的预后。结论SMC3 mRNA表达水平与乳腺癌免疫细胞浸润相关,SMC3表达与免疫浸润协同作用于乳腺癌预后。

PM2.5对哮喘大鼠呼吸道黏膜上皮病理损伤及炎症的影响

目的探讨PM2.5对哮喘大鼠呼吸道黏膜上皮病理损伤和炎症的影响。方法124只SD大鼠随机分为对照组、哮喘组、哮喘大鼠+PM2.5小剂量组、哮喘大鼠+PM2.5大剂量组。HE染色观察气道黏膜、肺组织病理改变;qRT-PCR检测肺组织TOLL样受体2(TLR2)、β防御素2(RBD2)的mRNA水平;免疫组化检测肺组织TLR2、RBD2蛋白表达;ELISA试剂盒检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)及血清总免疫球蛋白E(IgE)含量。结果哮喘大鼠暴露于PM2.52周时,呼吸道黏膜上皮细胞纤毛减少,炎症反应加重;哮喘大鼠暴露于小剂量PM2.52周时TLR2及RBD2表达增加;哮喘大鼠暴露于小剂量PM2.52周时,BALF中IL-8含量明显增加,4周时IL-6含量明显增加,IL-8增高早于IL-6;暴露于小剂量PM2.5第4周时,哮喘大鼠血清IgE含量明显增高。结论PM2.5可加重呼吸道黏膜上皮损伤,其机制与PM2.5导致TLR2、RBD2表达增加,引起气道炎症反应有关。

刺五加注射液通过TLR4/NF-κB通路抑制肾缺血再灌注大鼠炎症反应的研究

目的探讨刺五加注射液(ASI)对肾缺血再灌注(RIR)大鼠炎症反应的影响及其机制。方法将96只健康SD大鼠随机分为假手术(Sham)组,模型(Model)组,ASI(30 mg/kg)组和ASI(30 mg/kg)+LPS(TLR4激活剂,5 mg/kg)组,每组24只,计算各组大鼠肾脏指数,检测血清肾功能指标。HE染色法行肾组织病理学检查并行病理评分;ELISA法检测血清和肾组织炎症因子水平;RT-PCR法、Western blot法分别检测肾组织Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB p65(NF-κB p65)mRNA和蛋白表达。结果ASI显著降低RIR大鼠肾脏指数和血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)水平(P<0.05);明显改善肾小球体积增大、肾小管管腔扩张、细胞空泡变性、炎性细胞浸润等病理学改变,降低病理评分(P<0.05);降低血清和肾组织TNF-α、IL-1β水平,提高IL-10水平(P<0.05);降低肾组织TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达量(P<0.05)。LPS明显逆转ASI对TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达的调控作用。结论ASI具有抑制RIR大鼠炎症反应、减轻肾组织损伤的作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路有关。

NLRP3炎症小体介导的炎症反应参与亚砷酸钠所致胰岛β细胞毒性损伤

目的探讨NLRP3炎症小体介导的炎症反应在亚砷酸钠(NaAsO2)诱发小鼠胰岛β细胞MIN6毒性损伤中的作用。方法筛选NLRP3炎症小体抑制剂MCC950的最适处理浓度,并将MIN6细胞分为正常对照组、MCC950对照组、亚砷酸钠组、MCC950+亚砷酸钠组。应用倒置显微镜观察细胞生长状态;MTS法检测细胞存活率;TUNEL荧光染色法检测细胞凋亡;Real-time RT-PCR和Western blot检测NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的mRNA和蛋白表达。结果与亚砷酸钠组相比,MCC950+亚砷酸钠组细胞生长状态和存活率显著提升,细胞凋亡数量明显下降。亚砷酸钠组NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的mRNA和蛋白表达水平均高于正常对照组;MCC950干预明显降低亚砷酸钠染毒所致的NLRP3炎症小体活化,显著减少IL-1β、IL-18的蛋白表达水平。结论NLRP3炎症小体介导的炎症反应参与亚砷酸钠所致小鼠胰岛β细胞MIN6毒性损伤。

小檗碱调控HIF-1α和TGF-β抑制鼻咽癌细胞增殖和侵袭转移

目的探讨小檗碱对人鼻咽癌细胞5-8F细胞增殖和侵袭转移的影响及可能机制。方法体外培养人鼻咽癌细胞5-8F细胞后,将细胞分为对照组(0μmol/L)、12.5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L小檗碱处理组。CCK-8检测5-8F细胞的增殖情况;划痕实验检测鼻咽癌细胞迁移能力;穿梭小室实验检测鼻咽癌细胞侵袭能力的变化;Western blot检测各组细胞中HIF-1α信号通路相关蛋白和TGF-β的表达。结果小檗碱抑制5-8F细胞增殖,并呈浓度依赖性和时间依赖性。划痕实验和穿梭小室实验结果表明小檗碱能显著降低5-8F细胞迁移和侵袭能力。Western blot检测结果发现,HIF-1α和TGF-β的表达在药物作用后显著降低。结论小檗碱通过抑制HIF-1α和TGF-β的表达抑制人鼻咽癌细胞5-8F细胞增殖、迁移和侵袭。

抑制CDK9的表达减轻高脂饮食介导的炎症反应和动脉粥样硬化程度

目的探究细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK9)在高脂饮食介导的炎症反应及动脉粥样硬化中的作用。方法收集健康体检者及动脉粥样硬化患者血清标本各20例,ELISA方法检测患者血清CDK9和炎症因子白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,分析CDK9表达量与炎症因子的相关性。24只雄性C57/B6小鼠随机分为对照组、模型组和CDK9抑制剂组,每组8只。HE染色与油红O染色方法观察动脉粥样斑块的形态学变化;免疫组织化学方法检测各组小鼠主动脉组织中IL-6、TNF-α、CD68、PCNA和Ki67;Western blot方法检测各组小鼠主动脉组织中α-SMA和PCNA的表达。结果动脉粥样硬化患者的血液CDK9和炎症因子水平显著高于健康体检者,且两者呈正相关。模型组小鼠动脉粥样硬化斑块沉积面积明显增加;IL-6、TNF-α水平和CD68阳性细胞数显著升高;α-SMA和PCNA的蛋白表达显著升高(P<0.05)。CDK9抑制剂处理明显减少模型小鼠主动脉动脉粥样斑块沉积的面积、降低IL-6、TNF-α水平和CD68阳性细胞数、降低α-SMA和PCNA的蛋白表达(P<0.05)。结论抑制CDK9的表达能够减轻高脂饮食介导的炎症反应、动脉粥样硬化程度,抑制血管平滑肌细胞的增殖。

转移性大肠癌特异性核酸适配体分子信标的构建及其靶向成像

目的设计并构建靶向转移性大肠癌的核酸适配体分子信标(MAB),分析其生物活性并进行特异性成像研究,为转移性大肠癌的靶向成像提供新的方法。方法根据分子信标的设计原则在转移性大肠癌特异性核酸适配体的基础上构建MAB,采用流式细胞术对MAB的特异性和亲和性进行分析,并对不同温度下(4℃、25℃和37℃)MAB与靶细胞的结合情况进行检测;采用激光共聚焦显微镜对MAB与靶细胞靶向成像进行观察。结果构建的MAB与转移性大肠癌细胞的结合具有高亲和性和高特异性,解离常数为(22.70±2.46)nM,且不受温度的影响,激光共聚焦显微镜观察结果表明MAB不需洗涤过程便可一步法实现转移性大肠癌细胞的靶向成像。结论成功构建出基于转移性大肠癌特异性核酸适配体的MAB,建立了一种快速、便捷的转移性大肠癌的靶向成像方法。

COTE-1上调Yap促进非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭

目的探讨COTE-1蛋白在非小细胞肺癌中的表达及对肺癌细胞增殖和侵袭的影响。方法免疫组织化学染色检测COTE-1在肺癌组织中的表达;克隆形成实验和Transwell实验检测COTE-1对肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响;Western blot检测COTE-1对肺癌细胞YAP和CTGF蛋白表达的影响。结果 COTE-1在非小细胞肺癌组织和细胞系中明显高表达,COTE-1过表达促进肿瘤细胞增殖和侵袭能力,COTE-1过表达上调YAP及靶基因CTGF促进非小细胞肺癌的演进。结论 COTE-1参与调控YAP及靶基因CTGF的表达,可作为一个肺癌的潜在治疗靶点。

circZFR促进HT29和LOVO细胞增殖和迁移

目的研究环状RNA锌指样RNA结合蛋白(circular RNA zinc finger RNA binding protein,circZFR)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织及细胞系中表达及其对HT29和LOVO细胞增殖和迁移能力的影响。方法应用GEO2R软件分析circZFR在Gene Expression Omnibus (GEO)数据库中结直肠癌相关数据集GSE126094及GSE147597中的表达;实时荧光定量PCR检测circZFR在收集的50例结直肠癌组织样本以及其在结直肠癌细胞系中的表达;在HT29和LOVO细胞中转染circZFR特异性短发夹RNA (short hairping RNA,shRNA),同步转染对照(negativecontrolshRNA,shNC),RT-qPCR验证转染效率;克隆形成实验(colonyformation assay)及Transwell实验(transwell assay)检测不同circZFR表达水平对HT29和LOVO细胞增殖及迁移能力的影响。结果在GSE126094中,circZFR在结肠癌组织中的表达明显高于其在正常结直肠组织中的表达;在GSE147597中,circZFR在合并肝转移的结直肠癌组织中表达高于无肝转移的结直肠癌组织;circZFR在收集的结直肠癌组织中的表达大部分(44/50,88.00%)高于相应的癌旁组织;相比于正常肠上皮细胞系NCM460,circZFR在结直肠癌细胞系中的表达升高;在HT29和LOVO细胞中转染circZFR siRNA后,circZFR的表达水平明显下调;下调circZFR的表达可明显抑制HT29和LOVO细胞的增殖和迁移能力。结论 circZFR在结直肠癌组织及细胞系中表达增高,在HT29和LOVO细胞中下调circZFR的表达可明显抑制细胞的增殖及迁移能力。

脑卒中、轴突出芽与神经元微管

轴突出芽是脑卒中功能恢复的一个重要过程,轴突再生与微管蛋白的修饰以及微管的动态稳定性密切相关。神经细胞的独特形态和结构由细胞骨架中的微管支持和装配,同时微管的特殊结构也为神经元的物质运输提供基础。微管蛋白结构上的多样化修饰,以及塌陷反应调节蛋白在神经细胞修复与轴突再生的过程中起重要作用;多种分子机制维持微管稳定性,由此决定轴突出芽的延伸方向。

PEDF基因沉默MSCs对糖尿病心肌梗死大鼠心肌损伤的保护作用

目的探讨色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)修饰的骨髓干细胞(bone marrow-derived stem cell,MSCs)对糖尿病心肌梗死大鼠心肌损伤的保护作用。方法SPF级SD大鼠30只,随机分为糖尿病组(DM组)、糖尿病心肌梗死模型组(DMI组)和给予沉默PEDF的MSC糖尿病心肌梗死组(PM组)。大鼠饲喂高糖高脂饲料8周后,腹腔注射STZ建立糖尿病模型,并在成功的大鼠结扎冠状动脉建立糖尿病心肌梗死模型。PM组于模型成功后转移PEDF—/MSC 50μl,于给药4周后检测大鼠心功能后处死大鼠;HE和Masson染色观察大鼠心肌组织病理学结果;TUNEL染色观察大鼠心肌组织凋亡情况;Western-blot法检测各组大鼠心肌组织中Bax、Bcl-2及cleaved caspase 3蛋白表达。结果沉默PEDF的MSCs可以显著改善大鼠心功能,病理学可见PM组心肌细胞损伤明显改善,心肌细胞形态尚完整,肌纤维排列有序,可见心肌组织充血、轻度肿胀及少量炎性细胞浸润,仅见少量胶原纤维蛋白沉积于细胞间隙,整体纤维化程度较低;心肌细胞凋亡明显低于DMI组,约占心肌细胞35.2%士2.1%(P<0.05),可以显著上调Bcl-2表达水平,下调Bax、cleaved caspase3表达水平。结论沉默PEDF的MSCs对糖尿病心肌梗死大鼠具有保护作用,与改善心肌细胞的凋亡相关。

DPC4基因抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路调控胰腺癌细胞增殖、侵袭及上皮间质转化

目的观察DPC4基因对人胰腺癌细胞增殖、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响,探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路在其中的作用。方法建立稳转DPC4基因的胰腺癌JF305细胞;取稳转细胞系和正常JF305细胞,CCK8方法观察细胞增殖能力变化;Western blot检测PI3K、P-PI3K、Akt、p-AKT、mTOR、pmTOR及EMT相关标志物(E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Snail)的表达,Transwell检测细胞侵袭能力变化;裸鼠移植瘤实验观察DPC4基因对肿瘤的增殖影响。结果稳转DPC4基因的胰腺癌细胞增殖能力降低,侵袭能力下降,接种稳转DPC4基因的JF305细胞抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,E-cadherin蛋白表达水平上调,而Snail、vimentin和N-cadherin蛋白表达水平降低,且PI3K/Akt信号通路受到抑制,p-PI3K,p-Akt、p-mTOR表达水平降低(P<0.05)。结论DPC4基因抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭能力,与PI3K/Akt/mTOR信号通路调控EMT相关。

基于“金课”理念的人体解剖学混合式教学初探

人体解剖学是研究正常人体形态结构的科学,医学生只有学好人体解剖学才能正确判断人体结构的正常与异常、才能深刻理解生理现象与病理变化、才能为其他医学课程的学习打下良好的基础。由于人体解剖学教学内容繁杂、名词术语较多且抽象,及近年来学生人数和专业增加导致教学资源紧张等原因,人体解剖学教学面临严峻的挑战[1]。

TAZ激活剂衍生物对C2C12细胞肌分化的作用

目的目的应用C2C12肌肉分化模型,探讨9种TAZ激活剂IBS008738衍生物对肌分化的作用。方法设计合成IBS008738衍生物,C2C12细胞按分化培养液中相应终浓度处理细胞,荧光显微镜下观察分化后肌管并行免疫染色,用Image J软件测量并计算融合指数。结果设计合成的9种衍生物经1H NMR确认结构及纯度,作用于分化C2C12细胞3d后,IBS008738衍生物中KI-1表现出了强于IBS008738的促肌分化的作用,显示肌管粗,数量增多,融合指数增高,且呈现剂量-效应关系。结论衍生物KI-1与IBS008738共同结构可能是IBS008738的促进肌肉分化的功能成分,对其强化可开发出更具效能的抗肌萎缩药物。

ELF5在乳腺癌的表达及意义

目的研究E74-like factor 5 (ELF5)在乳腺癌的表达,探讨ELF5的表达与不同分型乳腺癌预后的关系。方法利用Oncomine数据库挖掘ELF5在乳腺癌组织中的表达;利用Kaplan-Meier Plotter分析ELF5表达水平与雌激素受体阳性/阴性表达乳腺癌生存的关系。结果 Oncomine数据库分析ELF5在乳腺癌中表达降低(P=8.29e^(-10));KM plotter数据库分析结果显示ELF5表达量与雌激素受体阳性表达的乳腺癌无复发生存(RFS)呈正相关,即高表达ELF5的患者无复发生存较高(P=0.008)。结论 ELF5在乳腺癌组织中表达低于癌旁正常组织,其表达水平越高预后越好。

质粒载体介导的短发夹RNA对RPE细胞转染效率及毒性研究

目的连接针对人血管内皮生长因子(VEGF)设计的短发夹RNA与质粒载体,并转染视网膜色素上皮(RPE)细胞,观察其转染效率及对细胞的毒性。方法设计针对人VEGF的短发夹RNA(shRNAs,V1,V2),V3为阴性对照即不含特异性shRNA,其表达载体为pGCSilencer^(TM)/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi。用Lipofectamine^(TM) 2000转染RPE细胞,用倒置荧光显微镜及流式细胞仪观察其转染效率;用MTT法观察其对细胞的毒性。结果质粒载体介导的GFP在细胞中的表达呈黄绿色,弥漫于整个胞浆和胞核,转染后24h GFP开始表达,转染后48h表达明显增强。流式细胞仪检测质粒pGCSilencer^(TM)/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi对体外培养的RPE细胞转染效率为43.9%,质粒转染后MTT法测定细胞活性的OD值与对照组相比明显降低(P=0.004)。结论质粒pGCSilencerTM/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi可以有效地转染体外培养的RPE细胞,但质粒转染对细胞有明显的毒性。